实验十细胞融合与血红细胞渗透性的观察实验1：细胞融合实验及观察实验2：红细胞膜渗透性观察
实验1: 细胞融合实验及观察 实验2: 红细胞膜渗透性观察 实验十 细胞融合与血红细胞渗透性的观察
实验1细胞融合操作与观察细胞融合（cellfusion）又称细胞杂交（cellhybridization），是指在自然条件或利用人工（生物的、物理的、化学的）方法，使两个或两个以上的细胞融合成一个具有双核或多核细胞的现象。此杂交细胞具有很强的生命力，增殖旺盛。细胞融合术是细胞遗传学、细胞免疫学、病毒学、肿瘤学等研究的一重要手段，也是制备单克隆抗体杂交瘤细胞株的重要技术
实验1 细胞融合操作与观察 细胞融合（cell fusion）又称细胞杂交（cell hybridization），是指在自然条件或利用人工（生 物的、物理的、化学的）方法，使两个或两个以上 的细胞融合成一个具有双核或多核细胞的现象。此 杂交细胞具有很强的生命力，增殖旺盛。 细胞融合术是细胞遗传学、细胞免疫学、病毒学、 肿瘤学等研究的一重要手段，也是制备单克隆抗体 杂交瘤细胞株的重要技术
一、实验的。了解细胞融合的原理、意义;O了解细胞融合的方式；α初步掌握聚乙二醇法诱导细胞融合的实验方法
一、实验目的 了解细胞融合的原理、意义； 了解细胞融合的方式； 初步掌握聚乙二醇法诱导细胞融合的实验方法
细胞融合基本原理二、纟在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，最后打通两质膜，形成双核或多核细胞包（此时称同核体或异核体）。·同一个体（基因型相同）的亲本细胞同核体00-8·不同个体（基因型不同）的亲本细胞00-0异核体O
在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，细胞发生 凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主 要是某些化学键的断裂与重排，最后打通两质膜，形成双 核或多核细胞（此时称同核体或异核体）。 二、细胞融合基本原理 同核体 • 同一个体（基因型相同）的亲本细胞 异核体 • 不同个体（基因型不同）的亲本细胞
细胞融合的意义我们知道，无论是远缘杂交还是利用多倍体技术都要先实现有性杂交，而亲缘关系较远的物种间杂交往往表现为杂交不亲和或不能受精或是胚胎早期败育。克服远缘杂交中的不亲和障碍；优良性状改良；组合起各种植物的优良遗传性状，从而培育出理想的新品种。进行体细胞融合就可以避开生殖细胞的受精过程。在亲?缘关系更远的物种间实现基因转移，创造出自然界没有的新物种
细胞融合的意义 我们知道，无论是远缘杂交还是利用多倍体技术都 要先实现有性杂交，而亲缘关系较远的物种间杂交往往 表现为杂交不亲和或不能受精或是胚胎早期败育。 克服远缘杂交中的不亲和障碍； 优良性状改良； 组合起各种植物的优良遗传性状，从而培育出理想的新 品种。 进行体细胞融合就可以避开生殖细胞的受精过程。在亲 缘关系更远的物种间实现基因转移，创造出自然界没有 的新物种
实例马铃薯和番茄通过细胞融合得到了至今有性杂交未能获得的属间杂种薯番茄和番茄薯；白菜和甘蓝通过细胞融合得到白菜一甘蓝白菜蓝白菜一甘蓝
马铃薯和番茄通过细胞融合得到了至今有性杂交未能获 得的属间杂种薯番茄和番茄薯； 白菜和甘蓝通过细胞融合得到白菜—甘蓝。 实例 白 菜 甘 蓝 白菜－甘蓝
细胞融合方式自发产生V国人工诱导产生·生物法：灭活的病毒·化学法：聚乙二醇(PEG）·物理法：电融合
细胞融合方式 自发产生 人工诱导产生 • 生物法：灭活的病毒 • 化学法：聚乙二醇(PEG） • 物理法: 电融合
方式一：病毒诱导融合很多种类的病毒能介导细胞融合,如仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒、牛痘病毒等，其中仙台病毒最常用。这类病毒的被膜中有融合蛋白，可介导病毒与宿主细胞融合也可介导细胞与细胞融合。用作融合剂的病毒必须事先用紫外线或β-丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。■优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，且仙台病毒能在鸡胚中大量繁殖，容易培养。■缺点：病毒不稳定，在保存过程中融合活性会降低，并且制备过程比较烦琐。此外，病毒引进细胞后，可能会对细胞的生命活动产生干扰
很多种类的病毒能介导细胞融合,如仙台病毒、新城鸡瘟 病毒、疱疹病毒、牛痘病毒等，其中仙台病毒最常用。这 类病毒的被膜中有融合蛋白，可介导病毒与宿主细胞融合， 也可介导细胞与细胞融合。用作融合剂的病毒必须事先用 紫外线或β-丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病 毒的融合活性。 优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，且仙台病毒 能在鸡胚中大量繁殖，容易培养。 缺点：病毒不稳定，在保存过程中融合活性会降低，并且 制备过程比较烦琐。此外，病毒引进细胞后，可能会对细 胞的生命活动产生干扰。 方式一：病毒诱导融合
方式二：化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇（PEG）二甲亚矾、甘油、山梨醇等。■这类物质导致细胞膜脂分子排列的改变，在去除作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中由于接口处双分子层质膜的相互亲合和表面张力，使相接触的细胞发生融合。■优缺点：使用起来很方便，诱导细胞融合的频率比较高，但是它有一定毒性，对有些细胞（如卵细胞）不适用
方式二：化学诱导融合 很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇（PEG）、 二甲亚砜、甘油、山梨醇等。 这类物质导致细胞膜脂分子排列的改变，在去除作用因 素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中由于 接口处双分子层质膜的相互亲合和表面张力，使相接触 的细胞发生融合。 优缺点：使用起来很方便，诱导细胞融合的频率比较 高，但是它有一定毒性，对有些细胞（如卵细胞）不 适用
方式三：电融合20世纪80年代建立起来的电融合技术，是将两种细胞的混合液置于低压交流电场中，细胞极化成偶极子，排列成串珠状，然后施加瞬间强脉冲，使质膜发生可逆性电击穿，从而导致融合。■具有融合的频率高，具有对细胞无毒害作用、操作简便、作用机制明确、可重复性好等优点，但难以控制一对细胞的融合。电融合仪ECM2001
20世纪80年代建立起来的电融合技术，是将两种细胞 的混合液置于低压交流电场中，细胞极化成偶极子，排 列成串珠状，然后施加瞬间强脉冲，使质膜发生可逆性 电击穿，从而导致融合。 具有融合的频率高，具有对细胞无毒害作用、操作简 便、作用机制明确、可重复性好等优点，但难以控制一 对细胞的融合。 方式三：电融合 电融合仪