《遗传与分子生物学实验》真核细胞基因组DNA提取2018/8/13
真核细胞基因组DNA提取 遗传与分子生物学实验 《遗传与分子生物学实验》 2018/8/13
真核生物的多样性背景知识不同的生物体中，核酸所处的环境不尽相同：1.核酸与蛋白质结合紧密程度不同。2、DNA与RNA含量有差别。3、核酸分子量大小有差别。4、由于生物体所组成的成分十基本相同，核酸性质基本相同，因此，对于不同的生物体核酸的分离方法相差不大
不同的生物体中，核酸所 处的环境不尽相同：1、 核酸与蛋白质结合紧密程 度不同。2、DNA与RNA 含量有差别。3、核酸分 子量大小有差别。4、. 由于生物体所组成的成分 基本相同，核酸性质基本 相同，因此，对于不同的 生物体核酸的分离方法相 差不大。 背景知识 真核生物的多样性
DNA的存在形式背景知识Thymine胸腺嘧啶Adenine腺嘌吟5%3端DNA的基本单位-脱氧核糖核苷酸OHPhosphate-deoxyribose含氨碱基脱氧核糖backbone磷酸脱氧核糖骨架鳥嘌Cytosine3端胞嘧啶Guanine5端
背景知识 DNA的存在形式 DNA的基本单位-脱氧核糖核苷酸
从DNA到染色体的过程背景知识中期从DNA到染色体染色体染色单体核苷酸（直径700mm）染色质丝（直径300nm）核小体双螺旋结构（直径110A或11nm）+组蛋白一级结构-核小体→二级结构-螺线管螺线管I（直径30mm）三级结构-超螺旋管→组蛋白四级结构-染色体店ONA（直径2mm）
背景知识 核苷酸 双螺旋结构 一级结构-核小体 二级结构-螺线管 三级结构-超螺旋管 四级结构-染色体 +组蛋白 从DNA到染色体的过程
DNA的理化性质背景知识DNA为白色类似石棉样的纤维状物，呈酸味。、氯DNA是极性化合物，一般都微溶于水，不溶于乙醇、仿等有机溶剂。在酸性溶液中，DNA易水解，中性或弱碱性溶液中较稳X定。天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)。从细胞中提取DNA时，先把DNP抽提出来，然后除去蛋白、糖、脂类及无机离子等杂质，分离出DNA
DNA的理化性质 DNA为白色类似石棉样的纤维状物，呈酸味。 DNA是极性化合物，一般都微溶于水，不溶于乙醇、氯 仿等有机溶剂。 在酸性溶液中，DNA易水解，中性或弱碱性溶液中较稳 定。 天然状态的DNA是以脱氧核糖核蛋白(DNP)。从细胞中提 取DNA时，先把 DNP抽提出来，然后除去蛋白、糖、脂 类及无机离子等杂质，分离出 DNA。 背景知识
DNA的理化性质背景知识DNP在盐溶液中的溶解度会受盐浓度的影响DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14mol/L氯化钠中溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%；随着盐浓度的增加溶解度也增加，在1mol/L氯化钠中溶解度比纯水中高2倍；RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白
DNP在盐溶液中的溶解度会受盐浓度的影响。 DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在 0.14 mol/L氯 化钠中溶解度最低，仅为在水中溶解度的 1%； 随着盐浓度的增加溶解度也增加，在1 mol/L氯化钠中溶解 度比纯水中高 2倍； RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小 在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，常用 此法分离这两种核蛋白。 背景知识 DNA的理化性质
核酸提取的一般流程背景知识I.破碎细胞或包膜一一内容物释放II.核酸分离、纯化III.沉淀或吸附核酸，并去除杂质IV.核酸溶解在适量缓冲液或水中
I. 破碎细胞或包膜——内容物释放 II. 核酸分离、纯化 III. 沉淀或吸附核酸，并去除杂质 IV. 核酸溶解在适量缓冲液或水中 背景知识 核酸提取的一般流程
DNA提取的几种方法背景知识浓盐法阴离子去污法苯酚抽提法
DNA提取的几种方法 浓盐法 阴离子去污法 苯酚抽提法 背景知识
DNA提取的几种方法背景知识浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1mol/LNaCl抽提，得到的DNP粘液，然后与氯仿：异戊醇（24:1）一起摇荡使乳化，离心除去蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体无水乙醇可将DNA钠盐沉淀出来
浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者 分离，常用的方法是用 1 mol/L NaCl 抽提，得到的 DNP粘液，然后与氯仿:异戊醇（24:1）一起摇荡使乳 化，离心除去蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯 仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体无水乙醇 可将 DNA 钠盐沉淀出来。 背景知识 DNA提取的几种方法
DNA提取的几种方法背景知识阴离子去污法由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA
阴离子去污法 由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合， 阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提 取DNA 用 SDS 或 二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从 生物材料中提取DNA。 背景知识 DNA提取的几种方法