植物的组织培养第二节胡萝卜的组织培养
植物的组织培养 第二节 胡萝卜的组织培养
预备任务1人/1个无菌操作台。每组取如下工具放于203室无菌操作台上先行灭菌培养皿、镊子、无菌水和培养基：带1个500mL的烧杯，作废液缸：：1个250mL的烧杯装工业酒精150mL：带1个100mL的烧杯。·注意放置物品时，先关灭紫外灯，放好后，关上门，再开启紫外灯；
预备任务 • 1人/1个无菌操作台。 • 每组取如下工具放于203室无菌操作台上先行灭菌 培养皿、镊子、无菌水和培养基； 带1个500 mL的烧杯，作废液缸；1个250 mL的烧杯装工业 酒精150mL；带1个100 mL的烧杯。 • 注意 放置物品时，先关灭紫外灯，放好后，关上门，再开启紫外灯；
组织培养基本原理·全能性植物体的每一个完整的细胞都拥有形成完整植株的全部遗传信息，在一定的条件下都具有产生一株完整个体的潜在能力。·去分化去除外植体原有的分化性状，重新进入新的发育分化状态
一、组织培养基本原理 • 全能性 植物体的每一个完整的细胞都拥有 形成完整植株的全部遗传信息，在一定 的条件下都具有产生一株完整个体的潜 在能力。 • 去分化 去除外植体原有的分化性状，重新进入新 的发育分化状态
·组织培养的特点：取材少，培养材料经济人为控制培养条件，不受自然条件影响：生长周期短，繁殖率高：管理方便，利于自动化控制。组织培养应用：在理论上是研究细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科的重要手段：在生产上在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等生产领域得到广泛的应用
• 组织培养的特点：取材少，培养材料经济； 人为控制培养条件，不受自然条件影响；生 长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动 化控制。 • 组织培养应用：在理论上是研究细胞学、遗 传学、育种学、生物化学和药物学等学科的 重要手段；在生产上在农学、园艺、林业和 次生代谢产物工程等生产领域得到广泛的应 用
组织培养的方法和步骤二、丝1、培养材料的采集·选择原则：根据培养目的、易于诱导、带菌少。生理状态：幼嫩的组织取材季节：易成活，生长旺盛季节，内源激素含量高，易分化植物的长势：生长健壮的组织外植体大小：应根据培养目的而定胚胎培养或脱除病毒，则外植体宜小；快速繁殖，外植体宜大。一般外植体大小在0.5～1.0cm为宜
二、组织培养的方法和步骤 • 选择原则： 根据培养目的、易于诱导、带菌少。 生理状态：幼嫩的组织 取材季节：易成活，生长旺盛季节，内源激素含量高，易分化 植物的长势：生长健壮的组织 外植体大小：应根据培养目的而定 胚胎培养或脱除病毒，则外植体宜小； 快速繁殖，外植体宜大。 一般外植体大小在0.5～1.0 cm为宜。 1、培养材料的采集
2、外植体的表面消毒处理·外植体的表面清洗：洗衣粉清洗，吐温·外植体表面灭菌（一般采用2次灭菌法）先用70%酒精浸10~30s；转到其它消毒溶液，灭菌液要充分浸没材料·无菌水涮洗涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类涮洗3-10次左右
2、外植体的表面消毒处理 • 外植体的表面清洗：洗衣粉清洗，吐温。 • 外植体表面灭菌（一般采用2次灭菌法） 先用70%酒精浸10～30s； 转到其它消毒溶液，灭菌液要充分浸没材料。 • 无菌水涮洗 涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类， 涮洗3-l0次左右
使用浓度灭菌剂去除难易灭菌时间灭菌效果(%)易好酒精70-750.1-3较难最好氯化汞2-100.1-0.2易很好漂白粉饱和溶液5-30易很好9-10次氯酸钙5-30易5-30很好次氯酸钠2（活性氯）好最易5-15过氧化氢10-12中较好抗菌素30-604-50mg/L
灭菌剂 使用浓度 （%） 去除难易 灭菌时间 灭菌效果 酒精 70-75 易 0.1-3 好 氯化汞 0.1-0.2 较难 2-10 最好 漂白粉 饱和溶液 易 5-30 很好 次氯酸钙 9-10 易 5-30 很好 次氯酸钠 2（活性氯） 易 5-30 很好 过氧化氢 10-12 最易 5-15 好 抗菌素 4-50mg/L 中 30-60 较好
3、制备外植体与接种·将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊子等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。在操作中严禁用手接触材料。，在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种2~4个，防止交叉污染。·接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养Ⅲ用无菌胶带封口
3、制备外植体与接种 • 将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊子等，在 无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和 种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。在操作中严禁 用手接触材料。 • 在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养 基上，每瓶接种2~4个，防止交叉污染。 • 接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿 用无菌胶带封口
三、无菌操作步骤接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开紫外线灯进行杀菌；接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯：接种员洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，换穿拖鞋等：上工作台后，用酒精棉球双手（特别是指甲处）和工作台面；用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次
三、无菌操作步骤 • 接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开紫外线 灯进行杀菌； • 接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； • 接种员洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，换穿拖鞋等； • 上工作台后，用酒精棉球搽拭双手（特别是指甲处）和工作 台面； • 用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； • 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳 嗽等； • 接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟， 若连续接种，每5天要大强度灭菌一次
四、本实验一胡萝卜的接种培养1、胡萝下的切块处理把胡萝下切成约40mm的段：去除表皮，去除木质部和髓切成约40×20×10mm的条状，共切4块皮层一形成层木质部韧皮部
四、本实验—胡萝卜的接种培养 • 把胡萝卜切成约40mm的段； • 去除表皮，去除木质部和髓； • 切成约40×20×10 mm的条状，共切4块。 1、胡萝卜的切块处理 皮层 韧皮部 形成层 木质部