实验三 培养组织的观察
实验三 培养组织的观察
实验器材 倒置相差显微镜、显微摄影装置
实验器材 倒置相差显微镜、显微摄影装置
在培养5～6d后，把培养瓶置于倒置相差显微 镜下观察，可见有细胞从组织块周边生长，呈 放射状排列。 实验步骤:
在培养5～6d后，把培养瓶置于倒置相差显微 镜下观察，可见有细胞从组织块周边生长，呈 放射状排列。 实验步骤:
注意事项 组织培养中常见的污染物有细菌、酵母菌、真菌和支原 体，其来源或由培养物自身携带或由培养物以外的环境 污染。微生物污染培养细胞的特征主要有： 1. 培养液的酸碱度发生异常的改变，大多数情况下培 养液的PH下降； 2. 培养液呈现混淆状，有时在培养液的面上出现薄膜 或泡沫，或者出现许多微小点子，当摇动培养瓶时 则散开； 3. 光镜（100倍）观察，在细菌感染后，在细胞间的空 隙出现有颗粒，有较小形的出牙颗粒。真菌感染则 可见许多细丝状菌丝，有时还密集有集群孢子
注意事项 组织培养中常见的污染物有细菌、酵母菌、真菌和支原 体，其来源或由培养物自身携带或由培养物以外的环境 污染。微生物污染培养细胞的特征主要有： 1. 培养液的酸碱度发生异常的改变，大多数情况下培 养液的PH下降； 2. 培养液呈现混淆状，有时在培养液的面上出现薄膜 或泡沫，或者出现许多微小点子，当摇动培养瓶时 则散开； 3. 光镜（100倍）观察，在细菌感染后，在细胞间的空 隙出现有颗粒，有较小形的出牙颗粒。真菌感染则 可见许多细丝状菌丝，有时还密集有集群孢子
培养细胞的生长和增殖： 游离期：细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶； 生长期：指数生长期，可用细胞分裂指数即每千个 细胞的分裂细胞数来表示，一般情况为0.2-0.5%。 停止期：细胞密度已饱和，细胞停止增殖，但代谢 活动仍在进行
培养细胞的生长和增殖： 游离期：细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶； 生长期：指数生长期，可用细胞分裂指数即每千个 细胞的分裂细胞数来表示，一般情况为0.2-0.5%。 停止期：细胞密度已饱和，细胞停止增殖，但代谢 活动仍在进行
培养结果的检测 一、组织细胞的分型： 根据细胞与容器之间是否相贴可把培养细胞分为贴 附型和悬浮型。多数细胞属于贴附型，贴附在培养 瓶壁上生长，常失去原有形态而出现类似于“返祖” 的现象，大致有如下几种： 1. 成纤维细胞型：与体内成纤维细胞的形态相似，胞 体呈梭形或不规则△，核卵圆形，胞质外伸2～3个 突起。细胞生长呈放射状、火焰状或漩涡状走行。 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的 组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞核血管内皮常呈 本型。在营养状况不良的情况下培养出来的其他类 型细胞也会转成本型
培养结果的检测 一、组织细胞的分型： 根据细胞与容器之间是否相贴可把培养细胞分为贴 附型和悬浮型。多数细胞属于贴附型，贴附在培养 瓶壁上生长，常失去原有形态而出现类似于“返祖” 的现象，大致有如下几种： 1. 成纤维细胞型：与体内成纤维细胞的形态相似，胞 体呈梭形或不规则△，核卵圆形，胞质外伸2～3个 突起。细胞生长呈放射状、火焰状或漩涡状走行。 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的 组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞核血管内皮常呈 本型。在营养状况不良的情况下培养出来的其他类 型细胞也会转成本型
2. 上皮细胞型：扁平不规则多角形，核圆居中。 细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移 动，膜边缘的细胞很少脱离细胞群单独活动。 起源于内、外胚层的细胞呈此型，如表皮及其 衍生物、消化管上皮、肝、胰和肺泡上皮。 3. 游走细胞型：分散生长，一般不连成片。细 胞质常伸出伪足和突起，能作为游走和变形运 动，其运动速度快而不规则。 4. 多型细胞型：有的细胞难以确定形态特点， 可归为此型，如神经组织的细胞
2. 上皮细胞型：扁平不规则多角形，核圆居中。 细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移 动，膜边缘的细胞很少脱离细胞群单独活动。 起源于内、外胚层的细胞呈此型，如表皮及其 衍生物、消化管上皮、肝、胰和肺泡上皮。 3. 游走细胞型：分散生长，一般不连成片。细 胞质常伸出伪足和突起，能作为游走和变形运 动，其运动速度快而不规则。 4. 多型细胞型：有的细胞难以确定形态特点， 可归为此型，如神经组织的细胞
二、培养细胞的生长和繁殖 细胞“一代”的生长和繁殖过程要经过三个阶段： 第一阶段为游离期，细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶。 第二阶段为生长期，即指数增生期。这是细胞增殖旺盛阶段，细 胞分裂相多。组织块培养的细胞生长从组织块四周开始，当细胞 分裂，数量增多则形成生长晕(细胞培养5～6天后，把培养 瓶置于倒置相差显微镜下观察，可见到有细胞从组织块 周边生长，呈放射状排列，称为生长晕)。生长晕的大小 与细胞增殖相关。数天后细胞连接成片，细胞间发生接触抑制而 停止扩展运动。 第三阶段为停止期（平顶期），细胞密度已饱和，细胞停止增殖， 但代谢活动仍在进行。此时要及时分离、传代，以免影响下一代 细胞的机能状态
二、培养细胞的生长和繁殖 细胞“一代”的生长和繁殖过程要经过三个阶段： 第一阶段为游离期，细胞接种后从悬浮状态到细胞贴瓶。 第二阶段为生长期，即指数增生期。这是细胞增殖旺盛阶段，细 胞分裂相多。组织块培养的细胞生长从组织块四周开始，当细胞 分裂，数量增多则形成生长晕(细胞培养5～6天后，把培养 瓶置于倒置相差显微镜下观察，可见到有细胞从组织块 周边生长，呈放射状排列，称为生长晕)。生长晕的大小 与细胞增殖相关。数天后细胞连接成片，细胞间发生接触抑制而 停止扩展运动。 第三阶段为停止期（平顶期），细胞密度已饱和，细胞停止增殖， 但代谢活动仍在进行。此时要及时分离、传代，以免影响下一代 细胞的机能状态