实验一 二 果蝇的形态观察和两对性状的遗传分析 与唾液腺的提取 50 人 实验前准备： 毛笔 30 支 2 袋纱布 4 卷棉花 绳子 100 只解剖针 剪刀 30 把 100 个 100ml 的三角瓶 滤纸 量筒 烧杯 大烧杯 乙醚 3 瓶 70%酒精 3 瓶 配 10 瓶各 30ml 的果蝇唾液腺染色 液 分装 10 瓶 50ml 无菌水 分装 10 瓶 50ml 生理盐水 分装 10 瓶 20ml 1N 盐酸 配 100 瓶培养基 所需原料：琼脂 100g 蔗糖 1000g 玉米粉 1000g 酵母粉 100g 丙酸 1 瓶 蒸馏水 提前一周培养 20 瓶含大量幼虫的果蝇 实验三 染色体组型分析 50 人 实验前准备： 剪刀 55 把 胶水 10 瓶 人体染色体图纸 50 张 实验四 果蝇的三点测交 乙醚 酒精 毛笔 镊子 培养基 实验五 植物多倍体的诱发及鉴定 0.05%秋水仙素 150ml (eppondoff /0.5ml) 卡诺固定液（纯酒精 3：1 冰醋酸）400ml 1N 盐酸 200ml(eppondoff /1ml) 95%酒精 1L 70%酒精 1L 3% 溶壁酶 50ml （可不需要，可用盐酸代替） 载玻片 盖玻片 解剖针 解剖镜 显微镜 醋酸洋红 配法 洋红 4-5g 冰醋酸 45ml 蒸馏水 55ml 将洋红粉加入水及醋酸中小火焰上加温，煮沸用玻棒搅和使其溶解。冷却后该液呈暗红色。 过滤，为饱和干液密封保存，用时以 90 份蒸馏水稀释。 要提前 2 天买好 3 斤圆葱做预处理 另各买 0.2 元的黄豆和绿豆做预处理 一：培养根尖 20—25℃光照 2—3 天后剪下新长根尖 1cm 二：预处理 0.05%秋水仙素 2—5h 三：卡洛固定液 1—24h 四：解离 1N HCL 60℃ 5′-20′ 五：后底渗 ddH2O 10′ 六：染色 醋酸洋红 5′后盖盖玻片 轻敲 七：镜检
实验一 二 果蝇的形态观察和两对性状的遗传分析 与唾液腺的提取 50 人 实验前准备： 毛笔 30 支 2 袋纱布 4 卷棉花 绳子 100 只解剖针 剪刀 30 把 100 个 100ml 的三角瓶 滤纸 量筒 烧杯 大烧杯 乙醚 3 瓶 70%酒精 3 瓶 配 10 瓶各 30ml 的果蝇唾液腺染色 液 分装 10 瓶 50ml 无菌水 分装 10 瓶 50ml 生理盐水 分装 10 瓶 20ml 1N 盐酸 配 100 瓶培养基 所需原料：琼脂 100g 蔗糖 1000g 玉米粉 1000g 酵母粉 100g 丙酸 1 瓶 蒸馏水 提前一周培养 20 瓶含大量幼虫的果蝇 实验三 染色体组型分析 50 人 实验前准备： 剪刀 55 把 胶水 10 瓶 人体染色体图纸 50 张 实验四 果蝇的三点测交 乙醚 酒精 毛笔 镊子 培养基 实验五 植物多倍体的诱发及鉴定 0.05%秋水仙素 150ml (eppondoff /0.5ml) 卡诺固定液（纯酒精 3：1 冰醋酸）400ml 1N 盐酸 200ml(eppondoff /1ml) 95%酒精 1L 70%酒精 1L 3% 溶壁酶 50ml （可不需要，可用盐酸代替） 载玻片 盖玻片 解剖针 解剖镜 显微镜 醋酸洋红 配法 洋红 4-5g 冰醋酸 45ml 蒸馏水 55ml 将洋红粉加入水及醋酸中小火焰上加温，煮沸用玻棒搅和使其溶解。冷却后该液呈暗红色。 过滤，为饱和干液密封保存，用时以 90 份蒸馏水稀释。 要提前 2 天买好 3 斤圆葱做预处理 另各买 0.2 元的黄豆和绿豆做预处理 一：培养根尖 20—25℃光照 2—3 天后剪下新长根尖 1cm 二：预处理 0.05%秋水仙素 2—5h 三：卡洛固定液 1—24h 四：解离 1N HCL 60℃ 5′-20′ 五：后底渗 ddH2O 10′ 六：染色 醋酸洋红 5′后盖盖玻片 轻敲 七：镜检
实验六 细菌转导 培养皿 每人 5 个（1 个 LB 培养基 3 个 EMB 培养基 1 个空的）提前一周灭菌 三角瓶（100ml）10 个 提前一周灭菌 5ml 离心管每人一个 1.5ml 离心管 1ml 0.2ml 0.01ml 枪头提前一周灭菌 涂布棒 接种环 培养箱 50 人 配 200ml 半固体 LB 培养基（灭菌后分装到 5ml 的离心管中，每管 3ml） 250 加倍肉汤培养基 1L 肉汤固体培养基 每人一块 EMB 固体培养基 每人 3 块 共 150 块（3 升） 磷酸缓冲液 1L 灭菌后分装 10 个小瓶中 以上培养基都需要灭菌 需要 1 瓶绿仿 试验七 转座子引起的插入突变 A ，B 培养基每人各两块 LB 培养液每班两瓶，每瓶 50ml （菌种培养好后分装到 5ml 的离心管中每组一只） 生理盐水 1L （0.75%） 1.5 离心管灭菌两罐 少量 5ml 离心管 灭菌好各种枪头 A 培养基 100×20 B 培养基 250×8 水琼脂 1760ml 1760ml 10×A 200ml 200ml VB1 8ml 8ml MgSO4 8ml 8ml 糖 葡 25%Glu 40ml 乳 5%Lac 8ml 甘油 8ml Str 8ml 8ml Km 8ml 其中 Str 和 Km 要灭菌后冷却至 55℃后加 注意 B 培养基 Str 和 Km 都要加 VB1 0.004g/1000ml Str 0.2g/1000ml Km 0.06g/1000ml MgSO4 0.246g/1000ml Glu 5g/1000ml Lac 0.2g/1000ml 甘油 0.2ml 甘油/1000ml
实验六 细菌转导 培养皿 每人 5 个（1 个 LB 培养基 3 个 EMB 培养基 1 个空的）提前一周灭菌 三角瓶（100ml）10 个 提前一周灭菌 5ml 离心管每人一个 1.5ml 离心管 1ml 0.2ml 0.01ml 枪头提前一周灭菌 涂布棒 接种环 培养箱 50 人 配 200ml 半固体 LB 培养基（灭菌后分装到 5ml 的离心管中，每管 3ml） 250 加倍肉汤培养基 1L 肉汤固体培养基 每人一块 EMB 固体培养基 每人 3 块 共 150 块（3 升） 磷酸缓冲液 1L 灭菌后分装 10 个小瓶中 以上培养基都需要灭菌 需要 1 瓶绿仿 试验七 转座子引起的插入突变 A ，B 培养基每人各两块 LB 培养液每班两瓶，每瓶 50ml （菌种培养好后分装到 5ml 的离心管中每组一只） 生理盐水 1L （0.75%） 1.5 离心管灭菌两罐 少量 5ml 离心管 灭菌好各种枪头 A 培养基 100×20 B 培养基 250×8 水琼脂 1760ml 1760ml 10×A 200ml 200ml VB1 8ml 8ml MgSO4 8ml 8ml 糖 葡 25%Glu 40ml 乳 5%Lac 8ml 甘油 8ml Str 8ml 8ml Km 8ml 其中 Str 和 Km 要灭菌后冷却至 55℃后加 注意 B 培养基 Str 和 Km 都要加 VB1 0.004g/1000ml Str 0.2g/1000ml Km 0.06g/1000ml MgSO4 0.246g/1000ml Glu 5g/1000ml Lac 0.2g/1000ml 甘油 0.2ml 甘油/1000ml
实验 8 真核细胞基因组提取 （50 人 25 组 ） 试剂名称 浓度 数量 备注 液氮 纯 3 开水瓶 临时打，保低温 抽提缓冲液（CTAB） (Tris-HCl 100mM pH8.0, EDTA 20mM, NaCl 1.4M, CTAB 2%, 2-巯基乙醇 1%) 50ml/瓶 CTAB, 2-巯基乙醇在 灭菌后加入 9 瓶 共 500ml 灭菌 氯仿：异戊醇 24：1 9 瓶（200ml 分装） 70%乙醇 70% 9 瓶（200ml 分装） TE buffer Tris-Hcl 10mM, EDTA 1mM 9 瓶（200ml 分装） 灭菌 异丙醇 分析纯 9 瓶（200ml 分装） RNase 4 单位（50ug/ml） 2 小管 NaAc（pH 5.2） 3M 9 瓶（200ml 分装） 灭菌 无水乙醇 9 瓶（200ml 分装） 酚：氯仿：异戊醇 25：24：1 9 瓶（200ml 分装） 滤纸 普通常规（12.5cm） 100 张 每组 10 张 手术剪刀 手术专用 15 把 1 把/组 瓷研钵 15 个 1 个/组 药勺 15 个 1 个/组 Eppendorf tube 5ml 离心管 1.5ml 加样枪 #1000ul 加样枪 #100ul Tip 头（枪头） #1000ul Tip 头 #100ul Tip 头 20ul 离心机 5ml-1.5ml 转头 水浴锅 实验 9 DNA 的检测（电泳、测 OD 值） （15 个样品） 试剂 浓度 数量 备注 TBE 电泳液 500ml 供十个样品跑 琼脂糖 1.5g 100ml 可制大胶 1 块 EB 1mg/ml 10ml 足量 DNA 样品 15 个样品 使用上次提取的样品 无菌水 10 瓶 100ml 10ml/瓶/组 Loading buffer 1 管 HindIII Marker 1 管 擦镜纸 若干 加样枪 #100ul
实验 8 真核细胞基因组提取 （50 人 25 组 ） 试剂名称 浓度 数量 备注 液氮 纯 3 开水瓶 临时打，保低温 抽提缓冲液（CTAB） (Tris-HCl 100mM pH8.0, EDTA 20mM, NaCl 1.4M, CTAB 2%, 2-巯基乙醇 1%) 50ml/瓶 CTAB, 2-巯基乙醇在 灭菌后加入 9 瓶 共 500ml 灭菌 氯仿：异戊醇 24：1 9 瓶（200ml 分装） 70%乙醇 70% 9 瓶（200ml 分装） TE buffer Tris-Hcl 10mM, EDTA 1mM 9 瓶（200ml 分装） 灭菌 异丙醇 分析纯 9 瓶（200ml 分装） RNase 4 单位（50ug/ml） 2 小管 NaAc（pH 5.2） 3M 9 瓶（200ml 分装） 灭菌 无水乙醇 9 瓶（200ml 分装） 酚：氯仿：异戊醇 25：24：1 9 瓶（200ml 分装） 滤纸 普通常规（12.5cm） 100 张 每组 10 张 手术剪刀 手术专用 15 把 1 把/组 瓷研钵 15 个 1 个/组 药勺 15 个 1 个/组 Eppendorf tube 5ml 离心管 1.5ml 加样枪 #1000ul 加样枪 #100ul Tip 头（枪头） #1000ul Tip 头 #100ul Tip 头 20ul 离心机 5ml-1.5ml 转头 水浴锅 实验 9 DNA 的检测（电泳、测 OD 值） （15 个样品） 试剂 浓度 数量 备注 TBE 电泳液 500ml 供十个样品跑 琼脂糖 1.5g 100ml 可制大胶 1 块 EB 1mg/ml 10ml 足量 DNA 样品 15 个样品 使用上次提取的样品 无菌水 10 瓶 100ml 10ml/瓶/组 Loading buffer 1 管 HindIII Marker 1 管 擦镜纸 若干 加样枪 #100ul
加样枪 #20ul Tip 头 #100ul Tip 头 #20ul PE 手套 实验 10 多聚酶链式反应（PCR） （15 个样品 50 人） 试剂名称 浓度 数量 备注： 制成的 10xbuffer 10 ul / 9 管 4 x dNTP（已稀释） 2.5mM 20 ul / 9 管 引物 1 12.5pmol/ul 30 ul / 9 管 模板（所提取 DNA） 20ng/ul 20ul/9 管 取实验一样品 Taq 酶（已稀释） 1V/ul 10ul / 9 管 无菌水 1ml/9 管 MgCl2 25mM 10ul/9 管 仪器及易耗品 规格 数量 备注： Eppendorf 管 #0.5mlul 加样枪 #100ul 加样枪 #20ul Tip 头 #100ul Tip 头 #20ul 记号笔 兰色或黑色 5 支 1 支/2 组 PCR 1 台 实验 11 质粒提取 一步法 （60 人 30 组 ） 试剂 浓度 数量 备注 ＬＢ培养液： 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 定容 1000ml pH 7.5 600ml 2 瓶/班 50ml/瓶 培养后分装 20 支 4.5ml 离心管 ＳＴＥ：(0.1M NaCl 10mMTrisHCl(pH8.0) 1mM EDTA) 分装 9 瓶 15ml/瓶 酚:氯仿:异戊醇 要 4.3ml/管 9 组 RNase 琼脂糖 3g 1.5g/板 100ml 胶 2 块 各加EB100ul ＡｍＰ 100ug/ml EB 1mg/ml 20ml 足量 溶菌酶 (新鲜配制) 10mg/ml ( 用 10mM 不要
加样枪 #20ul Tip 头 #100ul Tip 头 #20ul PE 手套 实验 10 多聚酶链式反应（PCR） （15 个样品 50 人） 试剂名称 浓度 数量 备注： 制成的 10xbuffer 10 ul / 9 管 4 x dNTP（已稀释） 2.5mM 20 ul / 9 管 引物 1 12.5pmol/ul 30 ul / 9 管 模板（所提取 DNA） 20ng/ul 20ul/9 管 取实验一样品 Taq 酶（已稀释） 1V/ul 10ul / 9 管 无菌水 1ml/9 管 MgCl2 25mM 10ul/9 管 仪器及易耗品 规格 数量 备注： Eppendorf 管 #0.5mlul 加样枪 #100ul 加样枪 #20ul Tip 头 #100ul Tip 头 #20ul 记号笔 兰色或黑色 5 支 1 支/2 组 PCR 1 台 实验 11 质粒提取 一步法 （60 人 30 组 ） 试剂 浓度 数量 备注 ＬＢ培养液： 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 定容 1000ml pH 7.5 600ml 2 瓶/班 50ml/瓶 培养后分装 20 支 4.5ml 离心管 ＳＴＥ：(0.1M NaCl 10mMTrisHCl(pH8.0) 1mM EDTA) 分装 9 瓶 15ml/瓶 酚:氯仿:异戊醇 要 4.3ml/管 9 组 RNase 琼脂糖 3g 1.5g/板 100ml 胶 2 块 各加EB100ul ＡｍＰ 100ug/ml EB 1mg/ml 20ml 足量 溶菌酶 (新鲜配制) 10mg/ml ( 用 10mM 不要
Tris·HCl pH8.0(新配制) 溶液Ⅰ： 50mM 葡萄糖 25mMTris·HCl（pH8.0） 10mM EDTA 20 管 4.5ml 溶液Ⅱ：（新鲜配制） 0.2N NaOH +1% SDS 配 100ml 需 78ml 蒸 馏水 2ml 10mol/lNaoH 20ml 5 %SDS 20 支 4.5ml 离心管 溶液Ⅲ: 5M KAC 10ml 冰醋酸 11.5ml 水 28.5ml 100ml 20 支 4.5ml 离心管 ＴE： 10mM Tris-HCl (pH8.0) 1mM EDTA 100 ml 20 支 4.5ml 离心管 1.5ml 离心管 紫外分光光度计 1ml200ul 枪头 制冰 无水（70%）乙醇 实验 12 DNA 酶切 （60 人 30 组 ） 试剂 浓度 数量 备注 ΛDNA 样品或质粒DNA 20 个 用实验四的 10xbuffer 60ul 无菌水 1L 2000ul/个 9 瓶 100ml/瓶 内切酶 60ul EDTA 20ml 加样枪 #20ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #20ul 400 个 20 个/组 Eppendorf 管 #5ml 60 个 3 个/组 封口膜 40 个 TBE 电泳液 1000ml 供 20 个样品跑 琼脂糖 10g 可制大胶 4 块 EB 1mg/ml 20ml 足量 Loading buffer 20ul EcoRI Marker 20ul 记号笔 兰色或黑色 10 支 1 支/2 组 1.5ml 离心管 1ml 2oul 200ul 枪头 实验 13 DNA 片段从琼脂糖凝胶中的分离 （20 个样品 30 组） 试剂 浓度 数量 备注 NaHCO3 2% EDTA-Na2 0．01M TBE 电泳液 pH 8.0 200ml 琼脂糖 10g
Tris·HCl pH8.0(新配制) 溶液Ⅰ： 50mM 葡萄糖 25mMTris·HCl（pH8.0） 10mM EDTA 20 管 4.5ml 溶液Ⅱ：（新鲜配制） 0.2N NaOH +1% SDS 配 100ml 需 78ml 蒸 馏水 2ml 10mol/lNaoH 20ml 5 %SDS 20 支 4.5ml 离心管 溶液Ⅲ: 5M KAC 10ml 冰醋酸 11.5ml 水 28.5ml 100ml 20 支 4.5ml 离心管 ＴE： 10mM Tris-HCl (pH8.0) 1mM EDTA 100 ml 20 支 4.5ml 离心管 1.5ml 离心管 紫外分光光度计 1ml200ul 枪头 制冰 无水（70%）乙醇 实验 12 DNA 酶切 （60 人 30 组 ） 试剂 浓度 数量 备注 ΛDNA 样品或质粒DNA 20 个 用实验四的 10xbuffer 60ul 无菌水 1L 2000ul/个 9 瓶 100ml/瓶 内切酶 60ul EDTA 20ml 加样枪 #20ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #20ul 400 个 20 个/组 Eppendorf 管 #5ml 60 个 3 个/组 封口膜 40 个 TBE 电泳液 1000ml 供 20 个样品跑 琼脂糖 10g 可制大胶 4 块 EB 1mg/ml 20ml 足量 Loading buffer 20ul EcoRI Marker 20ul 记号笔 兰色或黑色 10 支 1 支/2 组 1.5ml 离心管 1ml 2oul 200ul 枪头 实验 13 DNA 片段从琼脂糖凝胶中的分离 （20 个样品 30 组） 试剂 浓度 数量 备注 NaHCO3 2% EDTA-Na2 0．01M TBE 电泳液 pH 8.0 200ml 琼脂糖 10g
透析袋 40cm TE buffer 20ml 酚：氯仿 24：1 40ml 乙醇 100% 100ml 乙醇 70% 20ml 正丁醇 40ml NaAc 3M 20ml Loading buffer 20ul Marker 20ul Eppendorf 管 #5ml 100 个 5 个/组 加样枪 #100ul 20 把 1 把/组 加样枪 #20ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #100ul 200 个 10 个/组 Tip 头 #20ul 400 个 20 个/组 PE 手套 20 个 擦镜纸 若干 记号笔 兰色或黑色 10 支 1 支/2 组 实验 14 DNA 的连接与转化 （60 人 30 组） 纯化后的酶切质粒载 体和目的基因 质粒ＤＮＡ（含 Amp 抗生基因） 0．1 u g 质粒载体/组 用实验五的质粒载体 目的基因 １０×Ｔ４ＤＮＡ连 接酶 buffer 200mMTris-HCl(pH7.6) 50mM MgCl2 50mM 二硫苄糖醇 500μl/ml BSA Ｔ４ＤＮＡ连接酶 5mM ATP 无菌水 每组一管 5ml 管 每组 2 只 5ml 空管 ＬＢ培养基 每组一管 1.5ml 管 1000 ml 20 ml/组 受体菌 CaCl2 0.1M 每组一管 5ml 管 Amp 仪器及易耗品 规格 数量 备注： 加样枪 #20ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #20ul 400 个 20 个/组 Eppendorf 管 #5ml 60 个 3 个/组 封口膜 40 个 TBE 电泳液 1000ml 供 20 个样品跑 琼脂糖 10g 可制大胶 4 块 EB 1mg/ml 20ml 足量 Loading buffer 20ul
透析袋 40cm TE buffer 20ml 酚：氯仿 24：1 40ml 乙醇 100% 100ml 乙醇 70% 20ml 正丁醇 40ml NaAc 3M 20ml Loading buffer 20ul Marker 20ul Eppendorf 管 #5ml 100 个 5 个/组 加样枪 #100ul 20 把 1 把/组 加样枪 #20ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #100ul 200 个 10 个/组 Tip 头 #20ul 400 个 20 个/组 PE 手套 20 个 擦镜纸 若干 记号笔 兰色或黑色 10 支 1 支/2 组 实验 14 DNA 的连接与转化 （60 人 30 组） 纯化后的酶切质粒载 体和目的基因 质粒ＤＮＡ（含 Amp 抗生基因） 0．1 u g 质粒载体/组 用实验五的质粒载体 目的基因 １０×Ｔ４ＤＮＡ连 接酶 buffer 200mMTris-HCl(pH7.6) 50mM MgCl2 50mM 二硫苄糖醇 500μl/ml BSA Ｔ４ＤＮＡ连接酶 5mM ATP 无菌水 每组一管 5ml 管 每组 2 只 5ml 空管 ＬＢ培养基 每组一管 1.5ml 管 1000 ml 20 ml/组 受体菌 CaCl2 0.1M 每组一管 5ml 管 Amp 仪器及易耗品 规格 数量 备注： 加样枪 #20ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #20ul 400 个 20 个/组 Eppendorf 管 #5ml 60 个 3 个/组 封口膜 40 个 TBE 电泳液 1000ml 供 20 个样品跑 琼脂糖 10g 可制大胶 4 块 EB 1mg/ml 20ml 足量 Loading buffer 20ul
实验 15 HbsAg 的酶联免疫检测 （60 人 30 组） 多孔免疫聚脂板 封口胶 水浴锅 阳性或阴性血清 终止液 酶联试剂 PBST 缓冲液 显色液 A，B 加样枪 #100ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #100ul 200 个 10 个/组 记号笔 兰色或黑色 10 支 1 支/2 组
实验 15 HbsAg 的酶联免疫检测 （60 人 30 组） 多孔免疫聚脂板 封口胶 水浴锅 阳性或阴性血清 终止液 酶联试剂 PBST 缓冲液 显色液 A，B 加样枪 #100ul 20 把 1 把/组 Tip 头 #100ul 200 个 10 个/组 记号笔 兰色或黑色 10 支 1 支/2 组