实验二 组织原代培养
实验二 组织原代培养
培养瓶 小烧杯 培养皿 直头吸管 弯头吸管 大直头镊子 小弯头镊子 眼科剪 试剂与器材 一、器材： 超净工作台 培养箱
培养瓶 小烧杯 培养皿 直头吸管 弯头吸管 大直头镊子 小弯头镊子 眼科剪 试剂与器材 一、器材： 超净工作台 培养箱
二、试剂： Hank’s液 原代培养液 消毒液（酒精75％） 杂用品：一次性注射针筒、棉花、牛皮纸等 三、实验材料： 鸭胚
二、试剂： Hank’s液 原代培养液 消毒液（酒精75％） 杂用品：一次性注射针筒、棉花、牛皮纸等 三、实验材料： 鸭胚
1、取出活胚胎，置于培养器中； 2、选好鸭卵，将鸭胚移入培养皿中。 3、Hank’s溶液洗涤胚胎； 4、剖开胚体，分离若干器官； 5、选择器官组织，切成大小约0.5mm3； 6、贴瓶； 7、加液； 8、翻瓶； 9、培养。 培养步骤：
1、取出活胚胎，置于培养器中； 2、选好鸭卵，将鸭胚移入培养皿中。 3、Hank’s溶液洗涤胚胎； 4、剖开胚体，分离若干器官； 5、选择器官组织，切成大小约0.5mm3； 6、贴瓶； 7、加液； 8、翻瓶； 9、培养。 培养步骤：
1. 无菌室和操作台消毒：无菌室每周用紫外线消 毒1-2次。实验前，将实验器材放入超净台内， 打开超净台紫外线灭菌灯，同时起动超净台风 机，40min后消毒完毕，关闭紫外线灯。 2. 无菌操作要求：一切操作都要在火焰周围进行， 瓶口、吸管、注射器等要经过火焰消毒。瓶口 要顺风斜放在支架上。试剂使用后应立即封闭 瓶口。 3. 组织培养过程中要注意组织接种量要适宜，适 宜的接种量可造就一个有利于细胞生长的微环 境以促进细胞的增值。 注意事项
1. 无菌室和操作台消毒：无菌室每周用紫外线消 毒1-2次。实验前，将实验器材放入超净台内， 打开超净台紫外线灭菌灯，同时起动超净台风 机，40min后消毒完毕，关闭紫外线灯。 2. 无菌操作要求：一切操作都要在火焰周围进行， 瓶口、吸管、注射器等要经过火焰消毒。瓶口 要顺风斜放在支架上。试剂使用后应立即封闭 瓶口。 3. 组织培养过程中要注意组织接种量要适宜，适 宜的接种量可造就一个有利于细胞生长的微环 境以促进细胞的增值。 注意事项
4. 组织培养的条件控制： ⚫ 温度 ⚫ PH值：选择近中性范围的PH（7.2-7.4）是可 取的；适宜的PH主要是靠恒定的二氧化碳和 培养液中的缓冲体系来维持的。 ⚫ 气体环境：在培养环境中充5%浓度的的二氧 化碳气体，有利于维持培养瓶的PH恒定。 ⚫ 渗透压 ⚫ 促生长因子 ⚫ 抑制细胞生长因素 注意事项
4. 组织培养的条件控制： ⚫ 温度 ⚫ PH值：选择近中性范围的PH（7.2-7.4）是可 取的；适宜的PH主要是靠恒定的二氧化碳和 培养液中的缓冲体系来维持的。 ⚫ 气体环境：在培养环境中充5%浓度的的二氧 化碳气体，有利于维持培养瓶的PH恒定。 ⚫ 渗透压 ⚫ 促生长因子 ⚫ 抑制细胞生长因素 注意事项
将鸭胚或鸡胚的心、肾、肝、肺或其它器官的 组织块均匀地接种在培养瓶的底端，并浸没于 培养液中，让组织块在模拟体内生理环境下继 续生长。 实验结果
将鸭胚或鸡胚的心、肾、肝、肺或其它器官的 组织块均匀地接种在培养瓶的底端，并浸没于 培养液中，让组织块在模拟体内生理环境下继 续生长。 实验结果
1. 总结培养过程中组织块贴壁能否成功的经验， 写出影响组织正常贴壁的因素。 2. 不同的实验材料（如两栖类、鱼类）和相同 实验材料不同组织的培养所需的培养条件和 培养方法是否相同，请说出原因。 思考题：
1. 总结培养过程中组织块贴壁能否成功的经验， 写出影响组织正常贴壁的因素。 2. 不同的实验材料（如两栖类、鱼类）和相同 实验材料不同组织的培养所需的培养条件和 培养方法是否相同，请说出原因。 思考题：