实验一植物的组织培养 实验原理 植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细 胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和 植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分 化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具 有全能性
实验一植物的组织培养 实验原理 植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细 胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和 植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分 化并形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞具 有全能性
组织培养的特点是：取材少，培养材料经 济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生 长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控 制。组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种 学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段； 而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等 生产领域得到广泛的应用
组织培养的特点是：取材少，培养材料经 济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生 长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控 制。组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种 学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段； 而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等 生产领域得到广泛的应用
培养基是植物组织培养中的主要部分， 除了培养材料本身因素外，培养基的种类和 成分等直接影响培养材料的生长和发育，应 根据培养材料的种类和培养部位选择适宜的 培养基。培养基的种类很多，不同的培养基 有其不同的特点
培养基是植物组织培养中的主要部分， 除了培养材料本身因素外，培养基的种类和 成分等直接影响培养材料的生长和发育，应 根据培养材料的种类和培养部位选择适宜的 培养基。培养基的种类很多，不同的培养基 有其不同的特点
培养基的主要成分： 水 无机成分： 无机大量元素 氮： 铵态氮、硝态氮混合 磷： 磷酸盐 钾： 钾盐 钙、硫、镁 无机微量元素 主要有：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯 有机成分： 糖、 维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。 植物生长调节物质： 生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D 细胞分裂素类：BAP, KT，TDz，ZT 其他类： GA3 , ABA， PP333 琼脂 pH值
培养基的主要成分： 水 无机成分： 无机大量元素 氮： 铵态氮、硝态氮混合 磷： 磷酸盐 钾： 钾盐 钙、硫、镁 无机微量元素 主要有：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯 有机成分： 糖、 维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。 植物生长调节物质： 生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D 细胞分裂素类：BAP, KT，TDz，ZT 其他类： GA3 , ABA， PP333 琼脂 pH值
配制培养基最方便的方法是预先配制不同组分 的培养基母液，贮藏在冰箱，待配制培养基时取出， 按比例稀释。 配制母液时为了减少工作量可以把几种药品配 在同一母液中，但是应该注意各种化合物的组合以 及加入的前后顺序，应该把钙离子、锰离子、钡离 子和硫酸根和磷酸根例子错开，以免发生沉淀。 把每种试剂单独溶解后再加入后一种化合物。 混合已溶解的各种矿质盐时还应该注意加样顺序
配制培养基最方便的方法是预先配制不同组分 的培养基母液，贮藏在冰箱，待配制培养基时取出， 按比例稀释。 配制母液时为了减少工作量可以把几种药品配 在同一母液中，但是应该注意各种化合物的组合以 及加入的前后顺序，应该把钙离子、锰离子、钡离 子和硫酸根和磷酸根例子错开，以免发生沉淀。 把每种试剂单独溶解后再加入后一种化合物。 混合已溶解的各种矿质盐时还应该注意加样顺序
铁 盐单独配制，其配法为5.57g 的硫酸亚铁（ Fe SO4.7H2O）和7.45g乙二胺四乙酸二钠（Na2 -EDTA）溶于 1L水中，用时每配1L培养基，取该溶液5ml。 IAA 、IBA、NAA等可用少量的乙醇溶解，然后在加 水定容。2,4-D可用1 N的Na OH 溶解然后再定容； KT和 6-BA应先定容于少量的1 mol/L 的HCl中，再加水定容。 玉米素应该溶于95%的乙醇中再定容。 pH值对培养基的凝固情况和植物材料的生长有很大的 影响，因此，等培养基配好后，应该立即调整培养基的 pH ,最好用酸度计，既快又准。培养基配好后应该立即分 装，体积一般为容器的 1/4 或者1/3为好
铁 盐单独配制，其配法为5.57g 的硫酸亚铁（ Fe SO4.7H2O）和7.45g乙二胺四乙酸二钠（Na2 -EDTA）溶于 1L水中，用时每配1L培养基，取该溶液5ml。 IAA 、IBA、NAA等可用少量的乙醇溶解，然后在加 水定容。2,4-D可用1 N的Na OH 溶解然后再定容； KT和 6-BA应先定容于少量的1 mol/L 的HCl中，再加水定容。 玉米素应该溶于95%的乙醇中再定容。 pH值对培养基的凝固情况和植物材料的生长有很大的 影响，因此，等培养基配好后，应该立即调整培养基的 pH ,最好用酸度计，既快又准。培养基配好后应该立即分 装，体积一般为容器的 1/4 或者1/3为好
器材和药品 高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真 空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪 瓷杯、搪瓷盘、100 ml三角烧瓶（12个/组）、 250 ml三角瓶（2个/组）、试剂瓶、解剖刀柄与 刀片、单面刀片、剪刀、长镊子、培养皿、移 液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、 1000 m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、 封口薄膜、牛皮纸、线绳、牛皮筋、脱脂棉、 滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、 药勺等
器材和药品 高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、循环水式真 空泵、电子天平、酸度测定仪、光照培养箱,搪 瓷杯、搪瓷盘、100 ml三角烧瓶（12个/组）、 250 ml三角瓶（2个/组）、试剂瓶、解剖刀柄与 刀片、单面刀片、剪刀、长镊子、培养皿、移 液管、漏斗、量筒、烧杯（50、100、500、 1000 m1），酒精灯、火柴、玻璃棒、吸耳球、 封口薄膜、牛皮纸、线绳、牛皮筋、脱脂棉、 滤纸、pH试纸（5.4-7.0）、标签纸、称量纸、 药勺等
• 次氯酸钠消毒液, 75%的酒精 ,0.2％的升汞溶液. • 1 N 盐酸,1 N NaOH,0.8%的琼脂,3%的蔗糖. 0.1 mg/ml的2,4-D溶液：取25 mg的 2,4-D，加入 少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解，再加蒸馏水 定容至250 ml。 • 0.1 mg/ml 的6-BA溶液：取25 mg的6-BA，用少 量1 N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250 ml
• 次氯酸钠消毒液, 75%的酒精 ,0.2％的升汞溶液. • 1 N 盐酸,1 N NaOH,0.8%的琼脂,3%的蔗糖. 0.1 mg/ml的2,4-D溶液：取25 mg的 2,4-D，加入 少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解，再加蒸馏水 定容至250 ml。 • 0.1 mg/ml 的6-BA溶液：取25 mg的6-BA，用少 量1 N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250 ml
MS 培养基储备液的配制 成分 1升储备液用量（mg） 每升培养基取用量（ml） 20×储备液1（大量元素） NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 50 200×储备液2（微量元素） KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 166 1240 4460 1720 50 5 5 5 200*储备液3（铁盐） FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 5560 7460 5 200*储备液4（有机成分） 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 20000 100 100 20 400 5 表.1 MS培养基储备液的配制
MS 培养基储备液的配制 成分 1升储备液用量（mg） 每升培养基取用量（ml） 20×储备液1（大量元素） NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 50 200×储备液2（微量元素） KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 166 1240 4460 1720 50 5 5 5 200*储备液3（铁盐） FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 5560 7460 5 200*储备液4（有机成分） 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 20000 100 100 20 400 5 表.1 MS培养基储备液的配制
实实验步骤 P培养基的配制 11．母液配制： 按照表 1分别配制，并在4 ℃冰箱中保存。 22. 植物激素配制：称取10 mg NAA,加入少量酒精，并加水定 容50 ml (浓度为0.2 mg/ml), 用同样的方法配制2，4-D母液。 称取 50 mg 6-BA, 加少量的1 mol/L HCl，使其充分溶解，然后加水至 50 ml (浓度为1 mg/ml) 。 4
实实验步骤 P培养基的配制 11．母液配制： 按照表 1分别配制，并在4 ℃冰箱中保存。 22. 植物激素配制：称取10 mg NAA,加入少量酒精，并加水定 容50 ml (浓度为0.2 mg/ml), 用同样的方法配制2，4-D母液。 称取 50 mg 6-BA, 加少量的1 mol/L HCl，使其充分溶解，然后加水至 50 ml (浓度为1 mg/ml) 。 4