一、目的要求 掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法。 二、原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基,有还原性, 属于还原糖;而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖 能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量 对总糖进行测定。 还原糖的测定方法多种,本实验采用间接滴定法。其 原理是:在碱性溶液中,二价铜离子被还原糖还原成一价 的氧化亚铜,氧化亚铜在酸性环境中与一定量的过量碘起 反应, 再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘,即可算出还 原糖的含量。反应方程式是:
一、目的要求 掌握碱性铜试剂法测定还原糖的原理和操作方法。 二、原理 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基,有还原性, 属于还原糖;而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖 能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量 对总糖进行测定。 还原糖的测定方法多种,本实验采用间接滴定法。其 原理是:在碱性溶液中,二价铜离子被还原糖还原成一价 的氧化亚铜,氧化亚铜在酸性环境中与一定量的过量碘起 反应, 再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘,即可算出还 原糖的含量。反应方程式是:
2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4 COOK COOK Cu(OH)2 + H―C―OH = H―C―O H―C―OH H―C―O COONa COONa Cu + 2 H2O COOK H― C ―O H―C ―O COONa Cu CHO (CHOH)4+ 2 H2O = 2 CH2OH COOK H― C ―OH H―C―OH COONa COOH ( CHOH)4 + Cu2O↓ CH2OH + + 2 酒石酸甲钠 可溶性的氧化铜络合物 葡萄糖 酒石酸甲钠 葡萄糖酸
2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4 COOK COOK Cu(OH)2 + H―C―OH = H―C―O H―C―OH H―C―O COONa COONa Cu + 2 H2O COOK H― C ―O H―C ―O COONa Cu CHO (CHOH)4+ 2 H2O = 2 CH2OH COOK H― C ―OH H―C―OH COONa COOH ( CHOH)4 + Cu2O↓ CH2OH + + 2 酒石酸甲钠 可溶性的氧化铜络合物 葡萄糖 酒石酸甲钠 葡萄糖酸
IO3¯ + 5 I¯ + 6 H 3 I2 + 3 H2O + Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O + 2+ I2 + 2 S2O3 S4O6 + 2 I¯ 2- 2- 因此,用硫代硫酸钠滴定剩余的碘,在有已知浓度的 标准还原糖浓度时,可以间接地计算出未知样品的还原 糖的含量
IO3¯ + 5 I¯ + 6 H 3 I2 + 3 H2O + Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O + 2+ I2 + 2 S2O3 S4O6 + 2 I¯ 2- 2- 因此,用硫代硫酸钠滴定剩余的碘,在有已知浓度的 标准还原糖浓度时,可以间接地计算出未知样品的还原 糖的含量
三、试剂与器材 1. 试剂 铜试剂、0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化 钾溶液、 0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液、1%淀粉指示剂 2. 器材 碱式滴定管、恒温水浴锅
三、试剂与器材 1. 试剂 铜试剂、0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化 钾溶液、 0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液、1%淀粉指示剂 2. 器材 碱式滴定管、恒温水浴锅
四、操作步骤 1. 取6只试管,按照下表的次序加入试剂。另取6 个小三角烧瓶,按相应的试管顺序编号。 试剂 管号 H2O (mL) 标准葡萄糖 (mL) 还原糖提取液 (mL) 总糖水解液 (mL) 铜试剂 (mL) 沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟 空 白 试 验 1 2 4 2 2 4 标 准 试 验 1 1 1 4 2 1 1 4 总 糖 试验 1 2 4 2 2 4
四、操作步骤 1. 取6只试管,按照下表的次序加入试剂。另取6 个小三角烧瓶,按相应的试管顺序编号。 试剂 管号 H2O (mL) 标准葡萄糖 (mL) 还原糖提取液 (mL) 总糖水解液 (mL) 铜试剂 (mL) 沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟 空 白 试 验 1 2 4 2 2 4 标 准 试 验 1 1 1 4 2 1 1 4 总 糖 试验 1 2 4 2 2 4
2. 各试管冷却后,摇动试管,使试管底部的红色沉淀分 散后倾入相应的三角瓶中; 3. 分别在每个试管中加入2mL 2%碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4,以洗涤管中的残留物,并转入相应的试 管中,最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次; 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入 淀粉指示剂5滴,继续滴定至蓝色消失为止。 五、计算 X = 0.5 V空 -V标 X(V空-V未知)
2. 各试管冷却后,摇动试管,使试管底部的红色沉淀分 散后倾入相应的三角瓶中; 3. 分别在每个试管中加入2mL 2%碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4,以洗涤管中的残留物,并转入相应的试 管中,最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次; 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入 淀粉指示剂5滴,继续滴定至蓝色消失为止。 五、计算 X = 0.5 V空 -V标 X(V空-V未知)