一 教学要求 • 学习免疫电泳技术操作 • 掌握免疫电泳实验结果的分析方法 实验四 免疫电泳
一 教学要求 • 学习免疫电泳技术操作 • 掌握免疫电泳实验结果的分析方法 实验四 免疫电泳
免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。先利用 区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内 分离，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，加入抗血 清。37℃下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置与抗 体反应形成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解见图1。 二 实验原理
免疫电泳为区带电泳与双向免疫扩散的结合。先利用 区带电泳技术将不同电荷和分子量的蛋白抗原在琼脂内 分离，然后在与电泳方向平行的方向上开槽，加入抗血 清。37℃下使两者扩散，各区带蛋白在相应的位置与抗 体反应形成弧形沉淀线。免疫电泳原理图解见图1。 二 实验原理
图1 免疫电泳原理图解
图1 免疫电泳原理图解
三 材料与器材（略）
三 材料与器材（略）
（1）吸取4 mL琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，注意 要马上用吸管尖把琼脂表面整平，若有气泡立刻除去。 （2）取打孔器在图示的位置打孔（见图2），此二孔位 置要对称。 （3）用微量加样器加入10 uL的羊抗人IgG和羊抗人IgM 抗体，不要溢出。 （4）把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，琼 脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压10- 12v/cm电泳1-2h。 （5）样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终止 电泳，小心取出载玻片。 四 操作步骤
（1）吸取4 mL琼脂溶液，均匀涂布到载玻片上，注意 要马上用吸管尖把琼脂表面整平，若有气泡立刻除去。 （2）取打孔器在图示的位置打孔（见图2），此二孔位 置要对称。 （3）用微量加样器加入10 uL的羊抗人IgG和羊抗人IgM 抗体，不要溢出。 （4）把载玻片放到电泳槽中，倒入巴比妥缓冲液，琼 脂板两端用滤纸与缓冲液搭桥，接通电源，电压10- 12v/cm电泳1-2h。 （5）样品中有蓝色染料，当蓝色接近另一端时，终止 电泳，小心取出载玻片。 四 操作步骤
（6）用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要 深及底部，两道平行线间隔不可大于3 mm。用大头 针挑去琼脂。 （7）加入人全血清，放入湿盒中，37 ℃下扩散24h。 4mm 2mm 图2 胶板打孔及挖槽示意图
（6）用刀片在胶体的中央，划两道平行线。刀刻要 深及底部，两道平行线间隔不可大于3 mm。用大头 针挑去琼脂。 （7）加入人全血清，放入湿盒中，37 ℃下扩散24h。 4mm 2mm 图2 胶板打孔及挖槽示意图
五 注意事项 （1）浇载玻片时，玻片应保持水平，琼脂 面要尽量铺平 （2）加样应一次加满，并防止样品溢出孔 外 （3）电泳过程中注意防止发热，以免影响 电泳结果
五 注意事项 （1）浇载玻片时，玻片应保持水平，琼脂 面要尽量铺平 （2）加样应一次加满，并防止样品溢出孔 外 （3）电泳过程中注意防止发热，以免影响 电泳结果
六 思考题 （1）画出沉淀线的形态、数量和位置，并予以 简要说明。 （2）与相关的免疫学试验进行比较，探讨免疫 电泳的主要优点
六 思考题 （1）画出沉淀线的形态、数量和位置，并予以 简要说明。 （2）与相关的免疫学试验进行比较，探讨免疫 电泳的主要优点