一 教学要求 ⚫ 学习凝集反应的类型及原理 ⚫ 掌握间接法检测血清类风湿因子的方法 实验三 间接凝集反应检测 血清类风湿因子
一 教学要求 ⚫ 学习凝集反应的类型及原理 ⚫ 掌握间接法检测血清类风湿因子的方法 实验三 间接凝集反应检测 血清类风湿因子
二 实验原理 (1)凝集反应原理 细菌和细胞等颗粒性抗原与相应抗体特异性结合 后,在适量的电解质存在下,可以出现肉眼可见的凝 集现象,并将此种反应称为抗原抗体的凝集反应。根 据检测凝聚反应的条件可将起分为玻片法,试管法和 微量法。根据试验中抗原与抗体的检测方式分为2类: a.直接凝集反应,颗粒性抗原与抗体直接反应而凝集; b.间接凝集反应,将可溶性抗原事先吸附或偶联于与免 疫无关的颗粒载体表面,制成致敏载体颗粒,再与相 应抗体反应。 此方法比较简单,但因敏感性较差,一般只用在 颗粒抗原免疫后抗体效价的检测、血型配型检测和细 菌检测等方面
二 实验原理 (1)凝集反应原理 细菌和细胞等颗粒性抗原与相应抗体特异性结合 后,在适量的电解质存在下,可以出现肉眼可见的凝 集现象,并将此种反应称为抗原抗体的凝集反应。根 据检测凝聚反应的条件可将起分为玻片法,试管法和 微量法。根据试验中抗原与抗体的检测方式分为2类: a.直接凝集反应,颗粒性抗原与抗体直接反应而凝集; b.间接凝集反应,将可溶性抗原事先吸附或偶联于与免 疫无关的颗粒载体表面,制成致敏载体颗粒,再与相 应抗体反应。 此方法比较简单,但因敏感性较差,一般只用在 颗粒抗原免疫后抗体效价的检测、血型配型检测和细 菌检测等方面
(2)间接凝集反应检测类风湿因子原理 类风湿因子(RF)是由于细菌、病毒等感染因子,引 起体内产生的以变性IgG(一种抗体)为抗原的一种自 身抗体。目前已知有四种类风湿因子,即IgM型、IgA 型、IgG型、IgE型。其中IgM和IgA类风湿因子易于检 测,而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM 类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。 一般医院主要采用乳胶凝集法和酶联免疫吸附法 测定类风湿因子。 将IgG吸附于聚苯乙烯胶乳上,RF与其反应可产生 凝集现象
(2)间接凝集反应检测类风湿因子原理 类风湿因子(RF)是由于细菌、病毒等感染因子,引 起体内产生的以变性IgG(一种抗体)为抗原的一种自 身抗体。目前已知有四种类风湿因子,即IgM型、IgA 型、IgG型、IgE型。其中IgM和IgA类风湿因子易于检 测,而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM 类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。 一般医院主要采用乳胶凝集法和酶联免疫吸附法 测定类风湿因子。 将IgG吸附于聚苯乙烯胶乳上,RF与其反应可产生 凝集现象
三 材料与器材(略)
三 材料与器材(略)
四 操作步骤 (1)在3块载玻片上分别加一滴RF阳性血 清、RF阴性血清及待检血清。 (2)加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品 中,轻微晃动载玻片混匀。 (3)1 min 后观察凝集反应发生情况
四 操作步骤 (1)在3块载玻片上分别加一滴RF阳性血 清、RF阴性血清及待检血清。 (2)加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品 中,轻微晃动载玻片混匀。 (3)1 min 后观察凝集反应发生情况
五 注意事项 (1)器材要洁净、血清要新鲜、以确保结 果可靠 (2)注意阴性、阳性对照的设立 (3)注意血清及致敏胶乳加样量的比例
五 注意事项 (1)器材要洁净、血清要新鲜、以确保结 果可靠 (2)注意阴性、阳性对照的设立 (3)注意血清及致敏胶乳加样量的比例
六 思考题 (1)记录试验结果并进行分析 (2)探讨影响实验结果的因素
六 思考题 (1)记录试验结果并进行分析 (2)探讨影响实验结果的因素