一 教学要求 （1）学习抗菌活性菌株的筛选方法。 （2）掌握双层琼脂扩散法筛选抗菌活性菌 株的操作方法。 实验三 双层琼脂扩散法筛选放线菌活性菌株的
一 教学要求 （1）学习抗菌活性菌株的筛选方法。 （2）掌握双层琼脂扩散法筛选抗菌活性菌 株的操作方法。 实验三 双层琼脂扩散法筛选放线菌活性菌株的
二 实验原理 抗菌活性菌株是指那些在生长过程中能够产生抑菌 或杀菌活性物质的微生物，通常利用抗生素测定的方 法给予检出。抗菌抗生素的测定主要有稀释法、比浊 法和扩散法。扩散法是利用药物在琼脂中扩散使其周 围的指示菌生长受到抑制而形成抑菌圈，根据抑菌圈 的大小来判断抗菌活性。扩散法包括了纸片法、管碟 法、点滴法等多种方法。本实验采用的双层琼脂扩散 法是一种抗菌活性菌株快速简便的初步筛选方，既直 接在琼脂培养基上培养供测菌，产生的抗生素在琼脂 中扩散，加入指示菌后测量抑菌圈直径和菌落直径比 值（Di/Dc)，根据比值的大小检出活性菌株
二 实验原理 抗菌活性菌株是指那些在生长过程中能够产生抑菌 或杀菌活性物质的微生物，通常利用抗生素测定的方 法给予检出。抗菌抗生素的测定主要有稀释法、比浊 法和扩散法。扩散法是利用药物在琼脂中扩散使其周 围的指示菌生长受到抑制而形成抑菌圈，根据抑菌圈 的大小来判断抗菌活性。扩散法包括了纸片法、管碟 法、点滴法等多种方法。本实验采用的双层琼脂扩散 法是一种抗菌活性菌株快速简便的初步筛选方，既直 接在琼脂培养基上培养供测菌，产生的抗生素在琼脂 中扩散，加入指示菌后测量抑菌圈直径和菌落直径比 值（Di/Dc)，根据比值的大小检出活性菌株
三 材料与器材 ⚫ 菌种：链霉菌, 枯草杆菌，大肠杆菌. ⚫ 培养基：高氏1号培养基，牛肉膏蛋白胨 培养基. ⚫ 培养皿，移液管等
三 材料与器材 ⚫ 菌种：链霉菌, 枯草杆菌，大肠杆菌. ⚫ 培养基：高氏1号培养基，牛肉膏蛋白胨 培养基. ⚫ 培养皿，移液管等
四 实验步骤 （1）倒平板：在无菌培养皿中，倒入高氏一号培养基， 凝固后待用。 （2）接种：用接种环挑取供测菌，在平板上涂抹成直径 约0.3cm的接种点，每个平板接种4~6点。倒置，28℃ 培养7天。 （3）覆盖指示菌：取熔解并冷却至约55 ℃的牛肉膏蛋白 胨培养基，加入枯草杆菌或大肠杆菌的菌悬液，摇匀， 终浓度约为106细胞/ml。在接种链霉菌7d后的平板上， 倒入含指示菌的牛肉膏蛋白胨培养基，每皿10~12ml， 凝固后30 ℃或37 ℃培养24 h。 （4）抑菌圈大小测定：测量抑菌圈和菌落直径，根据抑 菌圈和菌落直径比值（Di/Dc)检出活性菌株，比值大 一般抗菌活性较强
四 实验步骤 （1）倒平板：在无菌培养皿中，倒入高氏一号培养基， 凝固后待用。 （2）接种：用接种环挑取供测菌，在平板上涂抹成直径 约0.3cm的接种点，每个平板接种4~6点。倒置，28℃ 培养7天。 （3）覆盖指示菌：取熔解并冷却至约55 ℃的牛肉膏蛋白 胨培养基，加入枯草杆菌或大肠杆菌的菌悬液，摇匀， 终浓度约为106细胞/ml。在接种链霉菌7d后的平板上， 倒入含指示菌的牛肉膏蛋白胨培养基，每皿10~12ml， 凝固后30 ℃或37 ℃培养24 h。 （4）抑菌圈大小测定：测量抑菌圈和菌落直径，根据抑 菌圈和菌落直径比值（Di/Dc)检出活性菌株，比值大 一般抗菌活性较强
五 注意事项 （1）供测菌接种时应直径大小尽量一致 （2）指示菌加入培养液时的温度不能太高， 以免杀死指示菌。温度也不能太低，以 免指示菌覆盖不均
五 注意事项 （1）供测菌接种时应直径大小尽量一致 （2）指示菌加入培养液时的温度不能太高， 以免杀死指示菌。温度也不能太低，以 免指示菌覆盖不均
六 思考题 双层琼脂法在抗生素的测定中有那些优缺 点？
六 思考题 双层琼脂法在抗生素的测定中有那些优缺 点？