一 教学要求 ⚫ 巩固细胞免疫的相关知识 ⚫ 学习免疫细胞分离的原理及方法 ⚫ 掌握巨噬细胞的分离方法 实验5 小鼠腹腔巨噬细胞收集 及形态观察
一 教学要求 ⚫ 巩固细胞免疫的相关知识 ⚫ 学习免疫细胞分离的原理及方法 ⚫ 掌握巨噬细胞的分离方法 实验5 小鼠腹腔巨噬细胞收集 及形态观察
二 实验原理 ⚫ 巨噬细胞（MΦ）发育：骨髓多能干细胞→定向干细胞 （髓样干细胞）→单核母细胞→前体单核细胞→单核 细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞） ⚫ MΦ分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎存在 于所有表皮和黏膜下组织。 ⚫ MΦ形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。 ⚫ MΦ分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨噬细胞， 可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正常小鼠每 只可收集腹腔渗出细胞106，其中30%为巨噬细胞，如 果给小鼠腹腔注射某中刺激物，可使巨噬细胞渗出增 加，易于分离更多的巨噬细胞。 ⚫ 纯化：巨噬细胞易于沉降和贴壁，对X射线不敏感，而 淋巴细胞和成纤维细胞对X射线敏感
二 实验原理 ⚫ 巨噬细胞（MΦ）发育：骨髓多能干细胞→定向干细胞 （髓样干细胞）→单核母细胞→前体单核细胞→单核 细胞→血液→组织（分化为巨噬细胞） ⚫ MΦ分布：单核细胞主要于血液中，巨噬细胞几乎存在 于所有表皮和黏膜下组织。 ⚫ MΦ形态：有伪足，马蹄状单核，细胞形体大。 ⚫ MΦ分离纯化：小鼠和大鼠腹腔内有丰富的巨噬细胞， 可用腹腔清洗的方法获得较多细胞悬液。正常小鼠每 只可收集腹腔渗出细胞106，其中30%为巨噬细胞，如 果给小鼠腹腔注射某中刺激物，可使巨噬细胞渗出增 加，易于分离更多的巨噬细胞。 ⚫ 纯化：巨噬细胞易于沉降和贴壁，对X射线不敏感，而 淋巴细胞和成纤维细胞对X射线敏感
三 材料与器材（略）
三 材料与器材（略）
四 操作步骤 （1）将小鼠以颈椎脱臼法处死，仰卧，固定四肢。 （2）依次用碘酒及酒棉球消毒腹部，以镊子提取腹壁，剪 去一小块皮肤，继以镊子提取腹腔。剪一小口。以注射 器注入少量冲洗液。用滴管吸出，再注入冲洗液并吸出， 滴管在腹腔内各个位置吸取液体，冲洗每只小鼠腹腔约 共 5 mL （3）将腹腔细胞悬液滴于干净玻片上，置 37 ℃ 湿盒内。 1～2h后倾去玻片上的液体。并用腹腔冲洗液轻洗玻片， 即可见玻片上有毛玻璃样的单层核巨噬细胞粘附，巨噬 细胞含量可达90%。 （4）在显微镜下计算巨噬细胞的百分比，以检测分离结果
四 操作步骤 （1）将小鼠以颈椎脱臼法处死，仰卧，固定四肢。 （2）依次用碘酒及酒棉球消毒腹部，以镊子提取腹壁，剪 去一小块皮肤，继以镊子提取腹腔。剪一小口。以注射 器注入少量冲洗液。用滴管吸出，再注入冲洗液并吸出， 滴管在腹腔内各个位置吸取液体，冲洗每只小鼠腹腔约 共 5 mL （3）将腹腔细胞悬液滴于干净玻片上，置 37 ℃ 湿盒内。 1～2h后倾去玻片上的液体。并用腹腔冲洗液轻洗玻片， 即可见玻片上有毛玻璃样的单层核巨噬细胞粘附，巨噬 细胞含量可达90%。 （4）在显微镜下计算巨噬细胞的百分比，以检测分离结果
五 注意事项 （1）皮肤和腹膜要分别剪开，并确保皮肤血液 不流入腹腔。 （2）腹腔内的冲洗液要全部吸干。 （3）腹腔冲洗液洗玻片时要适量，既要保证将 盐分清洗干净，又不将细胞洗脱
五 注意事项 （1）皮肤和腹膜要分别剪开，并确保皮肤血液 不流入腹腔。 （2）腹腔内的冲洗液要全部吸干。 （3）腹腔冲洗液洗玻片时要适量，既要保证将 盐分清洗干净，又不将细胞洗脱
六 思考题 ⚫ 绘图并描述观察到的各种细胞的形态特征 ⚫ 计算腹腔巨噬细胞的百分比
六 思考题 ⚫ 绘图并描述观察到的各种细胞的形态特征 ⚫ 计算腹腔巨噬细胞的百分比