一 教学要求 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验原理 ⚫ 掌握双向琼脂免疫实验操作方法 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验结果分析 实验一 双向琼脂免疫扩散
一 教学要求 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验原理 ⚫ 掌握双向琼脂免疫实验操作方法 ⚫ 学习双向琼脂免疫实验结果分析 实验一 双向琼脂免疫扩散
二 实验原理 ⚫ 位于凝胶不同小孔中的抗原和抗体,当两者相对扩散时, 经一定时间后,若两者相对应,会在琼脂小孔间、两者最 恰当的比例处形成白色沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、 形状以及对比各沉淀线之间的关系,可对抗原或抗体进行 定性分析。 ⚫ 此方法可应用于以下方面: (1)抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。 (2)用已知抗血清(或抗原)检测未知抗原(或抗体) (3)抗原或抗体相对分子量的估计 ⚫ 双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅 花孔型(见图1)
二 实验原理 ⚫ 位于凝胶不同小孔中的抗原和抗体,当两者相对扩散时, 经一定时间后,若两者相对应,会在琼脂小孔间、两者最 恰当的比例处形成白色沉淀线。观察沉淀线的位置、数量、 形状以及对比各沉淀线之间的关系,可对抗原或抗体进行 定性分析。 ⚫ 此方法可应用于以下方面: (1)抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行初步估算。 (2)用已知抗血清(或抗原)检测未知抗原(或抗体) (3)抗原或抗体相对分子量的估计 ⚫ 双向琼脂扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排孔型、梅 花孔型(见图1)
图1 双向免疫琼脂扩散孔型 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 三孔型 双孔型 双排孔型 梅花孔型
图1 双向免疫琼脂扩散孔型 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ 三孔型 双孔型 双排孔型 梅花孔型
三 材料与器材(略)
三 材料与器材(略)
四 操作步骤 1.制板:用移液管吸取热琼脂3.5ml,平铺于载玻片上。 2.打孔:待琼脂凝固后,按图1梅花孔型打孔,孔径3mm, 中心孔与边缘孔距离10mm。用针挑去孔内琼脂。 3.用微量加样器将羊抗人IgG抗体及羊抗人IgM(1:30, v/v) 各5ul加入中间孔内。 4.加样:将待检血清用生理盐水稀释成1:2、1:6、1: 10 以及空白(生理盐水)加入周围各孔中,每孔10ul 。 5.将玻璃片置于湿盒内,于37℃温育,隔天观察结果
四 操作步骤 1.制板:用移液管吸取热琼脂3.5ml,平铺于载玻片上。 2.打孔:待琼脂凝固后,按图1梅花孔型打孔,孔径3mm, 中心孔与边缘孔距离10mm。用针挑去孔内琼脂。 3.用微量加样器将羊抗人IgG抗体及羊抗人IgM(1:30, v/v) 各5ul加入中间孔内。 4.加样:将待检血清用生理盐水稀释成1:2、1:6、1: 10 以及空白(生理盐水)加入周围各孔中,每孔10ul 。 5.将玻璃片置于湿盒内,于37℃温育,隔天观察结果
五 注意事项 1.用琼脂浇载玻片时,载玻片必须保持水平位置。 2.每个孔的加样量应保持一致,既使每个孔都被 加满,又必须不使样品溢出孔外。 3.打孔时注意不要将孔弄破
五 注意事项 1.用琼脂浇载玻片时,载玻片必须保持水平位置。 2.每个孔的加样量应保持一致,既使每个孔都被 加满,又必须不使样品溢出孔外。 3.打孔时注意不要将孔弄破
六 思考题 1.画出个孔间的沉淀线位置、数量、形态, 并予以简单的说明 2.对实验结果进行分析
六 思考题 1.画出个孔间的沉淀线位置、数量、形态, 并予以简单的说明 2.对实验结果进行分析