第七章鞭毛虫 鞭毛虫隶属于肉足鞭毛门( Phylum Sarcomastigophora)的动鞭纲 ( Class Zoomastigophorea),以鞭毛作为运动细胞器,有一根或多根 鞭毛。某些种类有阿米巴型,可有或无鞭毛。种类繁多,分布很广, 生活方式多种多样。营寄生生活的鞭毛虫主要寄生于宿主的消化道、 泌尿道、血液及组织内。生活过程以分裂法繁殖。有些种类尚可形成 包囊 寄生人体的鞭毛虫常见的有十余种,其中利什曼原虫、锥虫、蓝 氏贾第鞭毛虫及阴道毛滴虫对人体危害较大 第一节杜氏利什曼原虫 利什曼原虫( Leishmania spp)属于动基体目( Order Kinetoplastida),锥虫亚目( Suborder Trypanosomatina),锥虫科( family 7 ypanasomatidae),利什曼属( Genus leishmania)。生活史有前鞭毛 体( promastigote)及无鞭毛体( amastigote)两个时期,前者寄生于 节肢动物(白蛉)的消化道内,后者寄生于脊椎动物的单核巨噬细胞 内,通过白蛉传播。 由利什曼原虫感染而引起的疾病,称利什曼病( leishmaniasis) 利什曼病广泛分布在亚、欧、非、拉美等洲的许多国家。是对人体危 害严重的人兽共患寄生虫病。据TDR(1989)估计全球患病人数在1 千2百万以上,每年有4百万新感染病例出现;1998年死于本病的 人数为42万人。根据临床损害组织不同,利什曼病可分为三种不同 类型:①内脏利什曼病( visceral leishmaniasis,VL),在印度,患者皮 PAGE 2
PAGE 2 第七章 鞭毛虫 鞭毛虫隶属于肉足鞭毛门（Phylum Sarcomastigophora）的动鞭纲 （Class Zoomastigophorea），以鞭毛作为运动细胞器，有一根或多根 鞭毛。某些种类有阿米巴型，可有或无鞭毛。种类繁多，分布很广， 生活方式多种多样。营寄生生活的鞭毛虫主要寄生于宿主的消化道、 泌尿道、血液及组织内。生活过程以分裂法繁殖。有些种类尚可形成 包囊。 寄生人体的鞭毛虫常见的有十余种，其中利什曼原虫、锥虫、蓝 氏贾第鞭毛虫及阴道毛滴虫对人体危害较大。 第一节 杜氏利什曼原虫 利 什 曼 原 虫 （ Leishmania spp ） 属 于 动 基 体 目 （ Order Kinetoplastida），锥虫亚目（Suborder Trypanosomatina），锥虫科（Family Trypanasomatidae），利什曼属（Genus Leishmania）。生活史有前鞭毛 体（promastigote）及无鞭毛体（amastigote）两个时期，前者寄生于 节肢动物（白蛉）的消化道内，后者寄生于脊椎动物的单核巨噬细胞 内，通过白蛉传播。 由利什曼原虫感染而引起的疾病，称利什曼病（leishmaniasis）。 利什曼病广泛分布在亚、欧、非、拉美等洲的许多国家。是对人体危 害严重的人兽共患寄生虫病。据 TDR（1989）估计全球患病人数在 1 千 2 百万以上，每年有 4 百万新感染病例出现；1998 年死于本病的 人数为 4.2 万人。根据临床损害组织不同，利什曼病可分为三种不同 类型：①内脏利什曼病（visceral leishmaniasis,VL），在印度，患者皮
肤常有暗的色素沉着,并有发热,故称( kala-azar),即黑热病,由杜 氏利什曼原虫[ Leishmania donovani( Laveran&. Mesnil,1903) Ros1903]侵害内脏器官(如脾、肝、骨髓等)而致病,如未得到及 时治疗,常可致死。②粘膜皮肤利什曼病( mucocutaneous leishmaniasis, MCL),由巴西利什曼原虫( Leishmania braziliensis vianna,1911)所 致。原虫寄生于皮肤内引起皮肤病变,也可经淋巴或血液侵入鼻咽部 粘膜内,可致粘膜病变。严重者鼻中隔、甚至喉和气管的软骨也有损 伤。分布于中、南美洲,非洲的埃塞俄比亚和苏丹也有病例报告。③ 皮肤利什曼病( cutaneous leishmaniasis、CL),流行于非洲、拉丁美洲、 西南亚、地中海盆地和前苏联部分地区。由热带利什曼原虫 [ Leishmania tropica( wright1903)Luhe,1906]和墨西哥利什曼原虫 [ Leishmania mexicana( biagi1953) Garnham,1962]所致。热带利什曼原 虫又可分为两个独立的亚种,即硕大利什曼原虫 Leishmania major) 与热带利什曼原虫( Leishmania tropica),两个亚种在形态上,临床 表现及流行病学上各有特点。我国黑热病是由杜氏利什曼原虫引起 【形态】 不同种株利什曼原虫的形态与结构均无明显差别,在其生活史中 由于宿主和环境的不同,有无鞭毛体和前鞭毛体两种不同的形态。 图7-1杜氏利什曼原虫 1.无鞭毛体( amastigote)通常称利杜体( Leishman- Donovan body, LD body),寄生于人和其他哺乳动物的吞噬细胞内。虫体很小, 卵圆形,大小29~57×18~40μm。瑞氏染液染色后,原虫细胞质 呈淡蓝或淡红色。内有一个较大而明显的圆形核,呈红色或淡紫色 动基体( kinetoplast)位于核旁,着色较深,细小、杆状。易于与其他原 虫相区别。在更高倍数放大时,可见虫体前端从颗粒状的基体( basal PAGE 2
PAGE 2 肤常有暗的色素沉着，并有发热，故称（kala-azar），即黑热病，由杜 氏 利 什 曼 原 虫 [Leishmania donovani (Laveran&. Mesnil,1903) Ross,1903]侵害内脏器官（如脾、肝、骨髓等）而致病，如未得到及 时治疗，常可致死。②粘膜皮肤利什曼病（mucocutaneous leishmaniasis, MCL），由巴西利什曼原虫（Leishmania braziliensis Vianna,1911）所 致。原虫寄生于皮肤内引起皮肤病变，也可经淋巴或血液侵入鼻咽部 粘膜内，可致粘膜病变。严重者鼻中隔、甚至喉和气管的软骨也有损 伤。分布于中、南美洲，非洲的埃塞俄比亚和苏丹也有病例报告。③ 皮肤利什曼病（cutaneous leishmaniasis,CL），流行于非洲、拉丁美洲、 西南亚、地中海盆地和前苏联部分地区。由热带利什曼原虫 [Leishmania tropica(wright,1903),Luhe,1906]和墨西 哥利什 曼原虫 [Leishmania mexicana(biagi,1953)Garnham,1962]所致。热带利什曼原 虫又可分为两个独立的亚种，即硕大利什曼原虫(Leishmania.major) 与热带利什曼原虫（Leishmania.tropica），两个亚种在形态上，临床 表现及流行病学上各有特点。我国黑热病是由杜氏利什曼原虫引起。 【形态】 不同种株利什曼原虫的形态与结构均无明显差别，在其生活史中 由于宿主和环境的不同，有无鞭毛体和前鞭毛体两种不同的形态。 1．无鞭毛体（amastigote） 通常称利杜体（Leishman-Donovan body, LD body），寄生于人和其他哺乳动物的吞噬细胞内。虫体很小， 卵圆形，大小 2.9～5.7×1.8～4.0μm。瑞氏染液染色后，原虫细胞质 呈淡蓝或淡红色。内有一个较大而明显的圆形核，呈红色或淡紫色。 动基体(kinetoplast)位于核旁，着色较深，细小、杆状。易于与其他原 虫相区别。在更高倍数放大时，可见虫体前端从颗粒状的基体（basal 图 7-1 杜氏利什曼原虫
body)发出一根丝体( rhizoplast)。基体及根丝体在普通显微镜下难 以区分。 在透射电镜下,虫体由内外两层表膜包被。每一层为一个单位膜 在内层表膜下有排列整齐的管状纤维,称为膜下微管( subpellicular microtubule)。微管数目、直径、间距等在种、株鉴定上有一定意义 虫体前端的表膜向内凹陷,形成一袋状腔,称为鞭毛袋,内有一根短 的鞭毛(即光镜下的根丝体)。基体为中空圆形。动基体为腊肠状, 其内有一束与长轴平行的纤丝,该纤丝由DNA组成。其它线粒体呈 泡状或管状,内有少数排列不整齐的板状嵴。类脂体圆形或卵圆形。 内质网不发达呈管状或泡状。核一个,卵圆形,大小约15×10um 核膜两层,可见核孔。核仁1~2个。 (图7—2)杜氏利什曼原虫无鞭毛体超微结构图 2.前鞭毛体( promastigote)寄生于白岭消化道。成熟的虫体 呈梭形或长梭形,前端有一根伸出体外的鞭毛,为虫体运动器官。虫 体大小为143~20×15~18um,核位于虫体中部,动基体在前部。 基体在动基体之前,鞭毛即由此发出。活的前鞭毛体运动活泼,鞭毛 不停地摆动,常以虫体前端聚集成团,排列成菊花状。体外培养有时 也可见到粗短形前鞭毛体和梭形前鞭毛体,这与不同的发育程度有关 (图7-2) 透射电镜可见虫体前端有一袋状凹陷的鞭毛袋,内有鞭毛。 鞭毛表面有薄膜两层。鞭毛的横切面上有9对周围纤维和两根中央纤 维,它们都与基体相连。动基体与核的超微结构与无鞭毛体相似。 利什曼原虫的DNA及核外DNA,后者占DNA总量的10~25%, 主要集中在动基体内,故称KDNA。它是动基体目( Kinetop lastida) 原虫特有的线粒体DNA,是由许多微环( minicircle)和少数大环 PAGE 2
PAGE 2 body）发出一根丝体（rhizoplast）。基体及根丝体在普通显微镜下难 以区分。 在透射电镜下，虫体由内外两层表膜包被。每一层为一个单位膜。 在内层表膜下有排列整齐的管状纤维，称为膜下微管（subpellicular microtubule）。 微管数目、直径、间距等在种、株鉴定上有一定意义。 虫体前端的表膜向内凹陷，形成一袋状腔，称为鞭毛袋，内有一根短 的鞭毛（即光镜下的根丝体）。基体为中空圆形。动基体为腊肠状， 其内有一束与长轴平行的纤丝，该纤丝由 DNA 组成。其它线粒体呈 泡状或管状，内有少数排列不整齐的板状嵴。类脂体圆形或卵圆形。 内质网不发达呈管状或泡状。核一个，卵圆形，大小约 1.5×1.0μm。 核膜两层，可见核孔。核仁 1～2 个。 2．前鞭毛体（promastigote） 寄生于白岭消化道。成熟的虫体 呈梭形或长梭形，前端有一根伸出体外的鞭毛，为虫体运动器官。虫 体大小为 14.3～20×1.5～1.8μm，核位于虫体中部，动基体在前部。 基体在动基体之前，鞭毛即由此发出。活的前鞭毛体运动活泼，鞭毛 不停地摆动，常以虫体前端聚集成团，排列成菊花状。体外培养有时 也可见到粗短形前鞭毛体和梭形前鞭毛体，这与不同的发育程度有关 （图 7－2）。 透射电镜可见虫体前端有一袋状凹陷的鞭毛袋，内有鞭毛。 鞭毛表面有薄膜两层。鞭毛的横切面上有 9 对周围纤维和两根中央纤 维，它们都与基体相连。动基体与核的超微结构与无鞭毛体相似。 利什曼原虫的DNA 及核外DNA，后者占DNA 总量的10～25%， 主要集中在动基体内，故称 K-DNA。它是动基体目（Kinetoplastida） 原虫特有的线粒体 DNA，是由许多微环（minicircle）和少数大环 （图 7－2）杜氏利什曼原虫无鞭毛体超微结构图
( maxicircle)所组成的网状结构。微环容易分离、提纯,且有不同 属、种甚至株DNA序列同源性的差异。如 Southern杂交试验显示, 同株原虫微环之间同源性大;冋种异株微环间,同源性较前者为小; 不同种之间只有部分同源;而不同属微环间,则只有少数同源序列, 即仅13对碱基序列同源。分析k-DNA微环的DNA序列的同源性, 为从本质上区分利什曼原虫不同的种、株,提供了新手段。 【生活史】 杜氏利什曼原虫生活史需要两个宿主即白蛉和人或哺乳动物。 1.在白蛉体内发育当雌性白蛉叮剌病人或受感染的动物宿主 时,血液或皮肤内含无鞭毛体的巨噬细胞被吸入胃内,经24小时, 无鞭毛体发育为早期前鞭毛体。此时虫体呈卵圆形,鞭毛也开始伸出 体外。48小时后发育为粗短的前鞭毛体或梭形前鞭毛体,体形从卵 圆形逐渐变为宽梭形或长度超过宽度3倍的梭形,此时鞭毛亦由短变 长。第3、4天出现大量成熟前鞭毛体,长113~15.9μm(有时可达 20μm),活动力明显加强,并以纵二分裂法繁殖。在数量剧增的同 时,虫体逐渐向白蛉前胃、食道和咽部移动。一周后具感染力的前鞭 毛体大量聚集在口腔及喙。当白蛉叮剌健康人时,前鞭毛体随白蛉唾 液进入人体。在离体培养中可见前鞭毛体分裂繁殖是从原鞭毛附近伸 出一根新的鞭毛开始,虫体逐渐变粗短,长度仅为宽的1~2倍。有 的虫体先从前端开始纵裂,继之后端也出现裂隙,虫体在中部断裂为 两个虫体。也有虫体从前向后顺序裂开,最后在后端断裂为两个虫体 分裂后虫体逐渐变长呈梭形 2.在人体内发育感染有前鞭毛体的雌性白蛉叮刺人体吸血时, 前鞭毛体随白蛉分泌的唾液进入人体的皮下组织。一部分前鞭毛体可 被多核白细胞吞噬消灭;一部分则进入巨噬细胞。原虫进入巨噬细胞 PAGE 2
PAGE 2 （maxicircle）所组成的网状结构。微环容易分离、提纯，且有不同 属、种甚至株 DNA 序列同源性的差异。如 Southern 杂交试验显示， 同株原虫微环之间同源性大；同种异株微环间，同源性较前者为小； 不同种之间只有部分同源；而不同属微环间，则只有少数同源序列， 即仅 13 对碱基序列同源。分析 k-DNA 微环的 DNA 序列的同源性， 为从本质上区分利什曼原虫不同的种、株，提供了新手段 。 【生活史】 杜氏利什曼原虫生活史需要两个宿主即白蛉和人或哺乳动物。 1．在白蛉体内发育 当雌性白蛉叮剌病人或受感染的动物宿主 时，血液或皮肤内含无鞭毛体的巨噬细胞被吸入胃内，经 24 小时， 无鞭毛体发育为早期前鞭毛体。此时虫体呈卵圆形，鞭毛也开始伸出 体外。48 小时后发育为粗短的前鞭毛体或梭形前鞭毛体，体形从卵 圆形逐渐变为宽梭形或长度超过宽度 3 倍的梭形，此时鞭毛亦由短变 长。第 3、4 天出现大量成熟前鞭毛体，长 11.3～15.9μm（有时可达 20μm），活动力明显加强，并以纵二分裂法繁殖。在数量剧增的同 时，虫体逐渐向白蛉前胃、食道和咽部移动。一周后具感染力的前鞭 毛体大量聚集在口腔及喙。当白蛉叮剌健康人时，前鞭毛体随白蛉唾 液进入人体。在离体培养中可见前鞭毛体分裂繁殖是从原鞭毛附近伸 出一根新的鞭毛开始，虫体逐渐变粗短，长度仅为宽的 1～2 倍。有 的虫体先从前端开始纵裂，继之后端也出现裂隙，虫体在中部断裂为 两个虫体。也有虫体从前向后顺序裂开，最后在后端断裂为两个虫体。 分裂后虫体逐渐变长呈梭形。 2．在人体内发育 感染有前鞭毛体的雌性白蛉叮刺人体吸血时， 前鞭毛体随白蛉分泌的唾液进入人体的皮下组织。一部分前鞭毛体可 被多核白细胞吞噬消灭；一部分则进入巨噬细胞。原虫进入巨噬细胞
后,逐渐变圆,失去其鞭毛的体外部分,向无鞭毛体期转化。此时巨 噬细胞内形成含虫空泡。无鞭毛体在巨噬细胞内不但可以存活,且能 进行分裂繁殖。电镜观察可见无鞭毛体分裂从新鞭毛轴丝形成和动基 体DNA纤丝伸长开始,以后DNA纤丝出现裂隙,继之细胞核分裂, 虫体一侧表膜出现凹陷,新膜下微管和表膜先后形成,并向细胞内伸 入,包绕两个分裂的虫体,完成细胞分裂。无鞭毛体的大量繁殖,最 终巨噬细胞破裂。游离的无鞭毛体又进入其他巨噬细胞,重复上述增 殖过程(图7-3) (图7-3)杜氏利什曼原虫生活史 利什曼原虫入侵巨噬细胞的机制近年来体外试验硏究证明利 什曼原虫首先粘附于巨噬细胞,再进入该细胞内。粘附的途径可分为 二种:一种为配体一受体结合途径,一种为前鞭毛体吸附的抗体和补 体与巨噬细胞表面的F或C受体结合途径。在调整或封闭这些受体 后,可大大减少前鞭毛体与巨噬细胞的结合。粘附后原虫则随巨噬细 胞的吞噬活动而进入巨噬细胞。前鞭毛体的能动性只増加接触机会, 并非它主动入侵巨噬细胞。受感染的巨噬细胞表面,有利什曼原虫抗 原存在。前鞭毛体质膜中的分子量为63KDa糖蛋白(GP63)系多种 利什曼原虫表面抗原的主要成分。GP63具有部分保护作用。用GP63 脂化后免疫动物,使宿主获得免疫力,可抵抗利什曼原虫的感染。他 进一步研究这种免疫保护作用产生的抗原结构基础发现,GP63是巨 噬细胞上Cυ受体的配体,利什曼原虫前鞭毛体可通过GP63多肽链 上的 Arg-Gly-Asp即所谓的“粘性”序列与巨噬细胞上C3b结合,从 而介导前鞭毛体入侵巨噬细胞。用前鞭毛体的mRNA构建cDNA文 库,在表达性载体λst中表达,并以 kala-azar病人血清筛选,结果 获得了包含GP63基因的克隆。利什曼原虫前鞭毛体还可从体表脱落 PAGE 2
PAGE 2 后，逐渐变圆，失去其鞭毛的体外部分，向无鞭毛体期转化。此时巨 噬细胞内形成含虫空泡。无鞭毛体在巨噬细胞内不但可以存活，且能 进行分裂繁殖。电镜观察可见无鞭毛体分裂从新鞭毛轴丝形成和动基 体 DNA 纤丝伸长开始，以后 DNA 纤丝出现裂隙，继之细胞核分裂， 虫体一侧表膜出现凹陷，新膜下微管和表膜先后形成，并向细胞内伸 入，包绕两个分裂的虫体，完成细胞分裂。无鞭毛体的大量繁殖，最 终巨噬细胞破裂。游离的无鞭毛体又进入其他巨噬细胞，重复上述增 殖过程（图 7－3）。 利什曼原虫入侵巨噬细胞的机制 近年来体外试验研究证明利 什曼原虫首先粘附于巨噬细胞，再进入该细胞内。粘附的途径可分为 二种：一种为配体—受体结合途径，一种为前鞭毛体吸附的抗体和补 体与巨噬细胞表面的 Fc或 C3b受体结合途径。在调整或封闭这些受体 后，可大大减少前鞭毛体与巨噬细胞的结合。粘附后原虫则随巨噬细 胞的吞噬活动而进入巨噬细胞。前鞭毛体的能动性只增加接触机会， 并非它主动入侵巨噬细胞。受感染的巨噬细胞表面，有利什曼原虫抗 原存在。前鞭毛体质膜中的分子量为 63KDa 糖蛋白（GP63）系多种 利什曼原虫表面抗原的主要成分。GP63 具有部分保护作用。用 GP63 脂化后免疫动物，使宿主获得免疫力，可抵抗利什曼原虫的感染。他 进一步研究这种免疫保护作用产生的抗原结构基础发现，GP63 是巨 噬细胞上 C3b受体的配体，利什曼原虫前鞭毛体可通过 GP63 多肽链 上的 Arg-Gly-Asp 即所谓的“粘性”序列与巨噬细胞上 C3b结合，从 而介导前鞭毛体入侵巨噬细胞。用前鞭毛体的 mRNA 构建 cDNA 文 库，在表达性载体λgtll 中表达，并以 kala-azar 病人血清筛选，结果 获得了包含 GP63 基因的克隆。利什曼原虫前鞭毛体还可从体表脱落 （图 7－3）杜氏利什曼原虫生活史
种糖耦合物,称排泄因子( excretory factor,FF)。GP63或EF能与 巨噬细胞表面结合从而侵入巨噬细胞。 两种发育阶段的转化机制有学者曾通过控制培养基成份、pH 值和培养温度在无氧培养中完成墨西哥利什曼原虫的生活史各种发 育阶段的循环,但利什曼原虫的前鞭毛体转化为无鞭毛体的机制目前 尚未完全阐明。一般认为可能是微小环境的改变,如pH,温度等及 原虫所需营养物质和宿主对原虫作用等因素的影响所致。实验证明, 前鞭毛体发育以27℃为宜,无鞭毛体则需要35℃环境。它们的抗原 性也有明显差异,除存在共同性区带外,它们还各有不同的期特异抗 原区带。总蛋白量、蛋白酶、核酸酶和分泌性磷酸酶以及微管蛋白均 存在较大的差异。 机体对利什曼原虫的杀伤利什曼原虫在巨噬细胞内寄生和繁 殖,其抗原可在巨噬细胞表面表达。宿主对利什曼原虫的免疫应答属 细胞免疫,其效应细胞为激活的巨噬细胞;通过细胞内产生的活性氧 杀伤无鞭毛体。使含有无鞭毛体的巨噬细胞坏死并清除虫体,这种现 象在皮肤利什曼病表现明显。近年研究结果,提示抗体也参与宿主对 利什曼原虫的免疫应答。 【致病】 内脏利什曼病( visceral leishmaniasis)人体感染杜氏利什曼原 虫后,经过4~7个月或最长10~11个月的潜伏期,即可出现全身性 症状和体征。患者的主要症状和体征为长期不规则发热,常呈双峰热 型(上、下午各有一次高热),伴脾、肝、淋巴结肿大,消瘦、贫血, 白细胞及血小板减少,血清丙种球蛋白明显增高,白/球蛋白比率倒 置,蛋白尿和血尿,患者常发生鼻衄和齿龈出血,晚期病人面部两颊 可出现色素沉着。由于全血细胞减少,免疫受损,易并发各种感染性 PAGE 2
PAGE 2 一种糖耦合物，称排泄因子（excretory factor,EF）。GP63 或 EF 能与 巨噬细胞表面结合从而侵入巨噬细胞。 两种发育阶段的转化机制 有学者曾通过控制培养基成份、pH 值和培养温度在无氧培养中完成墨西哥利什曼原虫的生活史各种发 育阶段的循环，但利什曼原虫的前鞭毛体转化为无鞭毛体的机制目前 尚未完全阐明。一般认为可能是微小环境的改变，如 pH，温度等及 原虫所需营养物质和宿主对原虫作用等因素的影响所致。实验证明， 前鞭毛体发育以 27℃为宜，无鞭毛体则需要 35℃环境。它们的抗原 性也有明显差异，除存在共同性区带外，它们还各有不同的期特异抗 原区带。总蛋白量、蛋白酶、核酸酶和分泌性磷酸酶以及微管蛋白均 存在较大的差异。 机体对利什曼原虫的杀伤 利什曼原虫在巨噬细胞内寄生和繁 殖，其抗原可在巨噬细胞表面表达。宿主对利什曼原虫的免疫应答属 细胞免疫，其效应细胞为激活的巨噬细胞；通过细胞内产生的活性氧 杀伤无鞭毛体。使含有无鞭毛体的巨噬细胞坏死并清除虫体，这种现 象在皮肤利什曼病表现明显。近年研究结果，提示抗体也参与宿主对 利什曼原虫的免疫应答。 【致病】 内脏利什曼病（visceral leishmaniasis） 人体感染杜氏利什曼原 虫后，经过 4～7 个月或最长 10～11 个月的潜伏期，即可出现全身性 症状和体征。患者的主要症状和体征为长期不规则发热，常呈双峰热 型（上、下午各有一次高热），伴脾、肝、淋巴结肿大，消瘦、贫血， 白细胞及血小板减少，血清丙种球蛋白明显增高，白/球蛋白比率倒 置，蛋白尿和血尿，患者常发生鼻衄和齿龈出血，晚期病人面部两颊 可出现色素沉着。由于全血细胞减少，免疫受损，易并发各种感染性
疾病。如肺炎等,常可导致患儿死亡。急性粒细胞缺乏症是黑热病的 另一严重并发症,如不及时治疗,患者病情不断恶化,则大都在患病 后1~2年内并发其他疾病而死亡。无鞭毛体在巨噬细胞内大量繁殖, 使巨噬细胞大量破坏和増生,从而导致肝、脾、淋巴结肿大,其中脾 肿大最为常见(95%)。由于浆细胞大量增生和患者肝功受损使患者 白蛋白生成减少,从而导致白/球蛋白的比率倒置。此外,血液中红 细胞、白细胞和血小板都减少,这是因为患者脾功能亢进,再加上免 疫溶血,血细胞遭到大量破坏所致 患黑热病时出现免疫受损,患者不仅有特异性细胞免疫的抑制, 而且对其它病原生物产生细胞免疫和体液免疫反应的能力降低,即非 特异性抑制,这可能与患者体内原虫繁殖快速,产生抗原太多,机体 处于免疫无反应状态有关 人体对杜氏利什曼原虫无先天免疫力,黑热病多见于婴儿及儿 童。但黑热病愈后则可产生稳固的获得性免疫,能够抵抗同种利什曼 原虫的再感染。黑热病患者治愈后利什曼素皮内试验(LDT)阳性呈 一曲线,20~29年后达到高峰,以后呈下降趋势,阳性反应可保持 50余年之久,反应强度并不减弱。可见患者治愈后,可获得终身免 疫。 皮肤型黑热病( post-kala-azar dermal leishmaniasis,PKDL)部 分黑热病患者在用锑剂治疗过程中或在治愈后数年甚至十余年后可 发生皮肤黑热病,病人在面部、颈部、四肢或躯干等部位出现许多含 有利什曼原虫的皮肤结节,结节呈大小不等的肉芽肿,或呈暗色丘疹 状,常见于面部及颈部,有的酷似瘤型麻疯。皮肤型黑热病在我国首 先在苏北发现3例,50年代至今已报道100余例。根据1988年统计, 有550%为皮肤与内脏损害同时并发,35%的病人发生在内脏病变消 PAGE 2
PAGE 2 疾病。如肺炎等，常可导致患儿死亡。急性粒细胞缺乏症是黑热病的 另一严重并发症，如不及时治疗，患者病情不断恶化，则大都在患病 后 1～2 年内并发其他疾病而死亡。无鞭毛体在巨噬细胞内大量繁殖， 使巨噬细胞大量破坏和增生，从而导致肝、脾、淋巴结肿大，其中脾 肿大最为常见（95%）。由于浆细胞大量增生和患者肝功受损使患者 白蛋白生成减少，从而导致白/球蛋白的比率倒置。此外，血液中红 细胞、白细胞和血小板都减少，这是因为患者脾功能亢进，再加上免 疫溶血，血细胞遭到大量破坏所致。 患黑热病时出现免疫受损，患者不仅有特异性细胞免疫的抑制， 而且对其它病原生物产生细胞免疫和体液免疫反应的能力降低，即非 特异性抑制，这可能与患者体内原虫繁殖快速，产生抗原太多，机体 处于免疫无反应状态有关。 人体对杜氏利什曼原虫无先天免疫力，黑热病多见于婴儿及儿 童。但黑热病愈后则可产生稳固的获得性免疫，能够抵抗同种利什曼 原虫的再感染。黑热病患者治愈后利什曼素皮内试验（LDT）阳性呈 一曲线，20～29 年后达到高峰，以后呈下降趋势，阳性反应可保持 50 余年之久，反应强度并不减弱。可见患者治愈后，可获得终身免 疫。 皮肤型黑热病（post-kala-azar dermal leishmaniasis, PKDL） 部 分黑热病患者在用锑剂治疗过程中或在治愈后数年甚至十余年后可 发生皮肤黑热病，病人在面部、颈部、四肢或躯干等部位出现许多含 有利什曼原虫的皮肤结节，结节呈大小不等的肉芽肿，或呈暗色丘疹 状，常见于面部及颈部，有的酷似瘤型麻疯。皮肤型黑热病在我国首 先在苏北发现 3 例，50 年代至今已报道 100 余例。根据 1988 年统计， 有 55.0%为皮肤与内脏损害同时并发，35%的病人发生在内脏病变消
失多年之后,另有10%的病人既未查见内脏感染,又无黑热病病史。 淋巴结型黑热病[ ymph glands visceral leishmaniasis(LGⅤL)]无 黑热病病史,病变局限于淋巴结的内脏利什曼病又称淋巴结型黑热 病。本病在北京、新疆先后有过报道,在内蒙古额济纳旗荒漠黑热病 疫区内较常见。临床表现主要是全身多处淋巴结肿大,肿大的淋巴结 以腹股沟和股部最多见,其次是颈部、腋下和上滑车,再次是耳后, 锁骨上和腋窝处,一般如花生米和蚕豆大小,局部无明显压痛或红肿。 摘取淋巴结作连续切片常可查见利什曼原虫。患者的一般情况大多良 好,少数可有低热和乏力,肝、脾很少触及,嗜酸性粒细胞常增多。 本病多数患者可以自愈。 皮肤利什曼病( cutaneous leishmaniasis)皮肤利什曼病常发生皮 肤溃疡,溃疡中常有脓液流出。当溃疡发生在肘、膝及手腕关节部位 时,可使人丧失劳动力;若发生继发感染,则可并发淋巴管炎,面部 的皮肤溃疡,愈合后可残留瘢痕。在克拉玛依,皮肤利什曼病患者有 的可出现结节性痒疹样皮肤损害,皮损部位奇痒难忍,搔破后又极易 发生感染。患者以青壮年为主,媒介为硕大白蛉吴氏亚种,其病原尚 有待进一步确定 【实验诊断】 1.病原检査检出病原体即可确诊。应注意与播散型组织胞浆 菌病鉴别,该病是一种经呼吸道传播的、多见于热带和亚热带的真菌。 患者有长期发烧、肝脾肿大,血细胞减少等症状。其子孢子直径2 4μm,卵圆形,多累及单核巨噬细胞系统,骨髓涂片所见病原体与利 什曼原虫相似,但无动基体 (1)穿刺检查 1)涂片法以骨髓穿刺涂片法最为常用。以骼骨穿刺简便安全, PAGE 2
PAGE 2 失多年之后，另有 10%的病人既未查见内脏感染，又无黑热病病史。 淋巴结型黑热病[lymph glands visceral leishmaniasis (LGVL)] 无 黑热病病史，病变局限于淋巴结的内脏利什曼病又称淋巴结型黑热 病。本病在北京、新疆先后有过报道，在内蒙古额济纳旗荒漠黑热病 疫区内较常见。临床表现主要是全身多处淋巴结肿大，肿大的淋巴结 以腹股沟和股部最多见，其次是颈部、腋下和上滑车，再次是耳后， 锁骨上和腋窝处，一般如花生米和蚕豆大小，局部无明显压痛或红肿。 摘取淋巴结作连续切片常可查见利什曼原虫。患者的一般情况大多良 好，少数可有低热和乏力，肝、脾很少触及，嗜酸性粒细胞常增多。 本病多数患者可以自愈。 皮肤利什曼病(cutaneous leishmaniasis) 皮肤利什曼病常发生皮 肤溃疡，溃疡中常有脓液流出。当溃疡发生在肘、膝及手腕关节部位 时，可使人丧失劳动力；若发生继发感染，则可并发淋巴管炎，面部 的皮肤溃疡，愈合后可残留瘢痕。在克拉玛依，皮肤利什曼病患者有 的可出现结节性痒疹样皮肤损害，皮损部位奇痒难忍，搔破后又极易 发生感染。患者以青壮年为主，媒介为硕大白蛉吴氏亚种，其病原尚 有待进一步确定。 【实验诊断】 1．病原检查 检出病原体即可确诊。应注意与播散型组织胞浆 菌病鉴别，该病是一种经呼吸道传播的、多见于热带和亚热带的真菌。 患者有长期发烧、肝脾肿大，血细胞减少等症状。其子孢子直径 2～ 4μm，卵圆形，多累及单核巨噬细胞系统，骨髓涂片所见病原体与利 什曼原虫相似，但无动基体。 （1）穿刺检查 1）涂片法 以骨髓穿刺涂片法最为常用。以骼骨穿刺简便安全
原虫检出率为80—90%。淋巴结穿刺多选肿大的淋巴结,如腹股沟 肱骨上滑车、颈淋巴结等,检出率约在46-87%。也可作淋巴结活检 脾脏穿刺检出率较高,达90.6-99.3%。但不安全,一般少用或不用。 2)培养法用无菌方法将上述穿刺物接种于NNN培养基,置 22-25℃温箱内。约1周后在培养物中若査见运动活泼的前鞭毛体, 即判为阳性结果。此法较涂片更为敏感。但需较长时间,用 Schneider 氏培养基,效果更好,3天即可出现前鞭毛体。培养中应严格无菌操 作。 3)动物接种法把穿刺物接种于易感动物(如金地鼠, BALB/c 小鼠等),1—2个月后取肝、脾作印片涂片,瑞氏染液染色镜检。 (2)皮肤活组织检査:在皮肤结节处用消毒针头刺破皮肤,取 少许组织液,或用手术刀刮取少许组织作涂片,染色镜检。 2.免疫诊断法近年来,人体寄生虫病免疫诊断的研究重点, 已从检测抗体转移到检测循环抗原。从黑热病免疫诊断研究中也显示 出后者的优越性 (1)检测血清循环抗原:单克隆抗体一抗原斑点试验 (McAb-AST),用于诊断黑热病,阳性率达9703%,假阳性02%。敏 感性、特异性、重复性均好,且具有简易可行,仅需微量血清等优点, 必要时还可作定量测定。该法还具有能反映现行感染,确定是否“治 愈”,或“复发”的独特优点(胡孝素等,1989)。 (2)检测血清抗体:如酶联免疫吸附试验(ELSA),间接血 凝试验(ⅢA)、对流免疫电泳(C)、间接荧光试验(IF)、直接凝 集试验(DA)等均可采用。斑点- ELISA的阳性率也较高,但查抗体 方法常与其他疾病出现交叉反应,在诊断利什曼病上有其局限性。且 PAGE 2
PAGE 2 原虫检出率为 80—90%。淋巴结穿刺多选肿大的淋巴结，如腹股沟、 肱骨上滑车、颈淋巴结等，检出率约在 46—87%。也可作淋巴结活检。 脾脏穿刺检出率较高，达 90.6—99.3%。但不安全，一般少用或不用。 2）培养法 用无菌方法将上述穿刺物接种于 NNN 培养基，置 22—25℃温箱内。约 1 周后在培养物中若查见运动活泼的前鞭毛体， 即判为阳性结果。此法较涂片更为敏感。但需较长时间，用 Schneider 氏培养基，效果更好，3 天即可出现前鞭毛体。培养中应严格无菌操 作。 3）动物接种法 把穿刺物接种于易感动物(如金地鼠，BALB/c 小鼠等)，1—2 个月后取肝、脾作印片涂片，瑞氏染液染色镜检。 （2）皮肤活组织检查： 在皮肤结节处用消毒针头刺破皮肤，取 少许组织液，或用手术刀刮取少许组织作涂片，染色镜检。 2．免疫诊断法 近年来，人体寄生虫病免疫诊断的研究重点， 已从检测抗体转移到检测循环抗原。从黑热病免疫诊断研究中也显示 出后者的优越性。 （1 ）检测血清循环抗原： 单克隆抗体—抗原斑点试验 (McAb-AST)，用于诊断黑热病，阳性率达 97.03%，假阳性 0.2%。敏 感性、特异性、重复性均好，且具有简易可行，仅需微量血清等优点， 必要时还可作定量测定。该法还具有能反映现行感染，确定是否“治 愈”，或“复发”的独特优点（胡孝素等， 1989）。 （2）检测血清抗体： 如酶联免疫吸附试验（ELISA），间接血 凝试验（IHA）、对流免疫电泳（CIE）、间接荧光试验（IF）、直接凝 集试验（DA）等均可采用。斑点-ELISA 的阳性率也较高，但查抗体 方法常与其他疾病出现交叉反应，在诊断利什曼病上有其局限性。且
抗体短期内不易消失,不宜用于疗效考核 (3)利什曼素皮内试验:该法简便易行,故较早和较广泛地应 用于黑热病流行病学调査。该法必须在病人获得痊愈后,才呈现阳性 反应,且维持时间很长,甚至终生保持阳性,故不能作为现症患者诊 断工具。但用于确定疫区与非疫区,判断流行程度,及考核防治效果, 具有一定的价值 3.分子生物学方法 (1)聚合酶链反应( Polymerase chain reaction,PCR):检测黑热 病效果好,敏感性、特异性均高。国内学者采用PCR法扩增Ld种 特异性kDNA片段用于诊断黑热病,阳性率为955%(21/22),与骨 髓涂片符合率为91%(2022),全部对照均为阴性。采用逆转录一聚 合酶链反应( RT-PCR)诊断黑热病,该法较rDNA为模板的PCR法 敏感高出100倍。 (2)kDNA探针杂交法:该法敏感、特异,取材方便。采用该 法检测四川黑热病流行区T1只犬耳缘皮肤组织标本,阳性率40.8% (29/71),与骨髓涂片符合率85.9%(6171),显示该法可用于犬利 什曼病的现场流行病学调查及防治 (3) Dip-stick法:该法将免疫印迹,薄层层析和分子克隆技术 相结合,将利什曼原虫重组抗原rk39制备成 Dip-stick试纸条,用于 美洲内脏利什曼病的诊断,阳性率100%。国内采用该法检测黑热病, 显示该法简便易行、携带方便,操作易行,2~5分钟内即可得到结 果,便于推广。 【流行】 黑热病在世界上分布很广。在亚洲主要流行于印度、中国、孟加 拉和尼泊尔。东非、北非、欧洲的地中海沿岸地区和国家,前苏联的 PAGE 2
PAGE 2 抗体短期内不易消失，不宜用于疗效考核。 （3）利什曼素皮内试验： 该法简便易行，故较早和较广泛地应 用于黑热病流行病学调查。该法必须在病人获得痊愈后，才呈现阳性 反应，且维持时间很长，甚至终生保持阳性，故不能作为现症患者诊 断工具。但用于确定疫区与非疫区，判断流行程度，及考核防治效果， 具有一定的价值。 3．分子生物学方法 （1）聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)： 检测黑热 病效果好，敏感性、特异性均高。国内学者采用 PCR 法扩增 L.d 种 特异性 kDNA 片段用于诊断黑热病，阳性率为 95.5%（21/22），与骨 髓涂片符合率为 91%（20/22），全部对照均为阴性。采用逆转录—聚 合酶链反应（RT-PCR）诊断黑热病，该法较 rDNA 为模板的 PCR 法 敏感高出 100 倍。 （2）kDNA 探针杂交法： 该法敏感、特异，取材方便。采用该 法检测四川黑热病流行区 71 只犬耳缘皮肤组织标本，阳性率 40.8% （29/71），与骨髓涂片符合率 85.9%（61/71），显示该法可用于犬利 什曼病的现场流行病学调查及防治。 （3）Dip-stick 法： 该法将免疫印迹，薄层层析和分子克隆技术 相结合，将利什曼原虫重组抗原 rk39 制备成 Dip-stick 试纸条，用于 美洲内脏利什曼病的诊断，阳性率 100%。国内采用该法检测黑热病， 显示该法简便易行、携带方便，操作易行，2～5 分钟内即可得到结 果，便于推广。 【流行】 黑热病在世界上分布很广。在亚洲主要流行于印度、中国、孟加 拉和尼泊尔。东非、北非、欧洲的地中海沿岸地区和国家，前苏联的