人体寄生虫学 实验指导 中山大学中山医学院寄生虫学教研室 2002年9月
0 人体寄生虫学 实 验 指 导 中山大学中山医学院寄生虫学教研室 2002 年 9 月
目录 实验室规则 光学显微镜的使用注意事项 华支睾吸虫 布氏姜片虫 并殖吸虫. 24781 日本血吸虫 带绦虫 曼氏迭宫绦虫 21 细粒棘球绦虫 似蚓蛔线虫(蝈虫) 毛首鞭形线虫(鞭虫) 钩虫 蠕形住肠线虫(蛲虫) 丝虫 33 旋毛形线虫(旋毛虫) 肠道寄生虫病原学检查 溶组织内阿米巴和其它阿米巴 蓝氏贾第鞭毛虫 阴道毛滴虫 杜氏利什曼原虫 疟原虫 机会性致病原虫 蝇 白蛉、蚤、虱和其它节肢动物
1 目录 实验室规则 ………………………………………………………… 1 光学显微镜的使用注意事项 ……………………………………… 2 华支睾吸虫 ………………………………………………………… 4 布氏姜片虫………………………………………………………… 7 并殖吸虫……………………………………………………………... 8 日本血吸虫 ………………………………………………………… 11 带绦虫 ……………………………………………………………… 20 曼氏迭宫绦虫 ……………………………………………………… 21 细粒棘球绦虫 ……………………………………………………… 22 似蚓蛔线虫（蛔虫）……………………………………………….. 25 毛首鞭形线虫（鞭虫）…………………………………………….. 27 钩虫 ………………………………………………………………… 28 蠕形住肠线虫（蛲虫）…………………………………………….. 30 丝虫 ………………………………………………………………… 33 旋毛形线虫（旋毛虫）…………………………………………….. 35 肠道寄生虫病原学检查 …………………………………………… 38 溶组织内阿米巴和其它阿米巴 …………………………………… 41 蓝氏贾第鞭毛虫 …………………………………………………… 45 阴道毛滴虫 ………………………………………………………… 46 杜氏利什曼原虫 …………………………………………………… 47 疟原虫 ……………………………………………………………… 50 机会性致病原虫 …………………………………………………….56 蚊 …………………………………………………………………… 61 蝇 …………………………………………………………………… 66 白蛉、蚤、虱和其它节肢动物 …………………………………… 67
实验室规则 1.进实验室上课时必须穿白大衣,并携带教材、实验指导、实验报告本及必要的 文具(如钢笔、铅笔、彩色铅笔、小尺等) 2.实验前做好预习,明确实验目的和要求,了解每个实验的基本原理和具体做法, 通过实验,加深和巩固己学过的理论知识,从而达到理论和实践相结合的目的。 3.严格遵守操作程序,爱护教学标本、仪器、试剂、动物,如有遗失或损坏应报 告老师,并按学校规定进行适当赔偿 4.实验操作时要耐心细致,自己动手,独立思考,严格要求,培养实事求是的科 学态度和认真负责的作风。 5.上课要准时,不得无故缺席、迟到或早退,特殊情况外出或早退应向老师请假。 6.遵守课堂纪律,保持实验室的安静,关闭手机、呼机,不得高声谈笑,随便走 动或进行与实验无关的活动。 7.动物尸体、玻片、器皿、垃圾应按要求放到指定地点,严禁丢入水池内,以免 堵塞排水管 8.值日生应负责搞好实验室的清洁卫生,离开实验室前应关好水、电、门窗
2 实验室规则 1. 进实验室上课时必须穿白大衣，并携带教材、实验指导、实验报告本及必要的 文具(如钢笔、铅笔、彩色铅笔、小尺等）。 2. 实验前做好预习，明确实验目的和要求，了解每个实验的基本原理和具体做法, 通过实验，加深和巩固已学过的理论知识，从而达到理论和实践相结合的目的。 3. 严格遵守操作程序，爱护教学标本、仪器、试剂、动物，如有遗失或损坏应报 告老师，并按学校规定进行适当赔偿。 4. 实验操作时要耐心细致，自己动手，独立思考，严格要求，培养实事求是的科 学态度和认真负责的作风。 5. 上课要准时，不得无故缺席、迟到或早退，特殊情况外出或早退应向老师请假。 6. 遵守课堂纪律，保持实验室的安静，关闭手机、呼机，不得高声谈笑，随便走 动或进行与实验无关的活动。 7. 动物尸体、玻片、器皿、垃圾应按要求放到指定地点，严禁丢入水池内，以免 堵塞排水管。 8. 值日生应负责搞好实验室的清洁卫生，离开实验室前应关好水、电、门窗
光学显徼镜的使用注意事项 1.显微镜的使用 使用自然光源的显微镜时应面向光源,拨正低倍接物镜,调节反光镜至最 大亮度,将标本置载物台上,根据检查标本的需要,把光线调至适宜强度,用 粗调调至能看清物像后,再用细调调至最淸晰。 如果要转换高倍观察,可将待观察部位移至视野中央,拨转髙倍接物镜即 可。若高倍与低倍焦点不一致,则须先摸索好高倍和低倍的位置和焦距的关系, 并牢记二者的关系,以后便可以自由转换高、低倍镜 用油镜时,先进行高倍观察,将待观察部位移至视野中央,然后用粗调 提高接物镜,在载玻片上加一滴镜油,拨转油镜,眼睛从旁注视,用粗调向下 旋转使物镜与玻片之间成最小距离,然后用细调上下旋转至清晰,或直接用油 镜观察。 如果你使用的是带电光光源的显微镜,请注意,取出显微镜后,先将电源 插头插入电源插座,检查亮度调节柄确实在最低处时,方可开启电源开关,推 动亮度调节柄至合适的亮度。观察完毕,检查显微镜按规定清洁后,下降镜台, 推动亮度调节柄至最低位置,然后关电源,拔电源插头,将显微镜放回原处 2.放大倍数的计算 用目镜的放大倍数乘以物镜的放大倍数,等于该显微镜的放大倍数。例如 观察肺吸虫虫卵,目镜上为10×,低倍物镜上为10×,那么肺吸虫卵在低倍镜 下的放大倍数为10×10=100倍。高倍镜上刻有45×,肺吸虫卵在高倍镜下的 放大倍数为10×45=450倍。观察原虫标本需用油镜,油镜上刻有100倍,油 镜下的放大倍数为10×100=1000倍。 3.观察标本的方法
3 光学显微镜的使用注意事项 1. 显微镜的使用 使用自然光源的显微镜时应面向光源，拨正低倍接物镜，调节反光镜至最 大亮度，将标本置载物台上，根据检查标本的需要，把光线调至适宜强度， 用 粗调调至能看清物像后，再用细调调至最清晰。 如果要转换高倍观察，可将待观察部位移至视野中央，拨转高倍接物镜即 可。若高倍与低倍焦点不一致，则须先摸索好高倍和低倍的位置和焦距的关系， 并牢记二者的关系，以后便可以自由转换高、低倍镜。 用油镜时，先进行高倍观察，将待观察部位移至视野中央，然后用粗调 提高接物镜，在载玻片上加一滴镜油，拨转油镜，眼睛从旁注视，用粗调向下 旋转使物镜与玻片之间成最小距离，然后用细调上下旋转至清晰，或直接用油 镜观察。 如果你使用的是带电光光源的显微镜，请注意，取出显微镜后，先将电源 插头插入电源插座，检查亮度调节柄确实在最低处时，方可开启电源开关，推 动亮度调节柄至合适的亮度。观察完毕，检查显微镜按规定清洁后，下降镜台， 推动亮度调节柄至最低位置，然后关电源，拔电源插头，将显微镜放回原处。 2. 放大倍数的计算 用目镜的放大倍数乘以物镜的放大倍数，等于该显微镜的放大倍数。例如 观察肺吸虫虫卵，目镜上为 10×，低倍物镜上为 10×，那么肺吸虫卵在低倍镜 下的放大倍数为 10×10＝100 倍。高倍镜上刻有 45×，肺吸虫卵在高倍镜下的 放大倍数为 10×45＝450 倍。 观察原虫标本需用油镜，油镜上刻有 100 倍，油 镜下的放大倍数为 10×100＝1000 倍。 3. 观察标本的方法
1)镜检时载物台不可倾斜,以免液体流岀影响观察及污染显微镜。 2)观察标本时,每一个视野都要详细观察。为了减少遗漏,可按一定方向推 进如↓→↑→↓→。如有可疑物像,可放大倍数观察 (3)不论放大倍数如何,光线的强度都要适宜。一般来说,高倍、油镜和比较 厚的标本要求较强的光;低倍、无色标本光线宜弱。调节光线的强弱可通 过上下调节聚光器或光圈的扩大和缩小或调节光源的强弱来控制。 4.显微镜的维护 显微镜是比较贵重的仪器,也是学习的重要工具之一,维护好它十分重要。 (1)提取显微镜时,一手持柄,一手托住底座,保持镜身的垂直,防止反光镜和 目镜脱落。显微镜的部件不得互相调换,如有损坏,立即向老师报告。 (2)检查粪便标本时,如要用高倍观察,必须加上盖玻片,防止粪水污染镜头, 如不小心污染,应立即擦干净 (3)用高倍镜或油镜观察时,宜使用微调,并小心转动,避免压碎损坏镜头和标 本 (4)每次使用显微镜后都要擦拭干浄,镜台镜座用软布擦去污物和灰尘。擦镜头 必须用擦镜纸,不能用草纸或纱布等。油镜使用后,应立刻用擦镜纸擦干净 镜头上的油,然后用擦镜纸沾少许二甲苯拭抹镜头,最后用擦镜纸擦干残余 的二甲苯。若油已干,可沾少许二甲苯擦净,再用擦镜纸擦干。如镜头沾上 较顽固的污物也用同样的方法拭抹。 (5)收镜时将镜头旋在一侧,将聚光镜旋落,避免两镜头相撞。把亮度调节柄推 至最低位置,把光源调至最小,关上电源。最后加上镜罩(或置镜箱内)放 回原处
4 （1） 镜检时载物台不可倾斜，以免液体流出影响观察及污染显微镜。 （2） 观察标本时，每一个视野都要详细观察。为了减少遗漏，可按一定方向推 进如↓→↑→↓→。如有可疑物像，可放大倍数观察。 （3） 不论放大倍数如何，光线的强度都要适宜。一般来说，高倍、油镜和比较 厚的标本要求较强的光；低倍、无色标本光线宜弱。调节光线的强弱可通 过上下调节聚光器或光圈的扩大和缩小或调节光源的强弱来控制。 4. 显微镜的维护 显微镜是比较贵重的仪器，也是学习的重要工具之一，维护好它十分重要。 （1）提取显微镜时，一手持柄，一手托住底座，保持镜身的垂直，防止反光镜和 目镜脱落。显微镜的部件不得互相调换，如有损坏，立即向老师报告。 （2）检查粪便标本时，如要用高倍观察，必须加上盖玻片，防止粪水污染镜头， 如不小心污染，应立即擦干净。 （3）用高倍镜或油镜观察时，宜使用微调，并小心转动，避免压碎损坏镜头和标 本。 （4）每次使用显微镜后都要擦拭干净，镜台镜座用软布擦去污物和灰尘。擦镜头 必须用擦镜纸，不能用草纸或纱布等。油镜使用后，应立刻用擦镜纸擦干净 镜头上的油，然后用擦镜纸沾少许二甲苯拭抹镜头，最后用擦镜纸擦干残余 的二甲苯。若油已干，可沾少许二甲苯擦净，再用擦镜纸擦干。如镜头沾上 较顽固的污物也用同样的方法拭抹。 （5）收镜时将镜头旋在一侧，将聚光镜旋落，避免两镜头相撞。把亮度调节柄推 至最低位置，把光源调至最小，关上电源。最后加上镜罩（或置镜箱内）放 回原处
吸虫 (trematode) 华支睾吸虫( Clonorchis sinensis) 目的和要求 1.以华支睾吸虫为代表,掌握吸虫基本形态和生活史的基本特点。 2.了解感染途径、感染方式、寄生部位与致病作用及防治要点。 3.掌握虫卵形态特征和病原学诊断方法 4.学习绘制虫卵形态图的基本技能 实验内容 (一)成虫 1.观察液浸标本(示教):注意虫体大小、外观 2.观察染色标本(操作) 先用肉眼作一般观察,然后在低倍镜下观察下列器官的位置、排列方式和 形态特征: (1)附着器官:口吸盘、腹吸盘,并比较两者的大小 (2)消化器官:肠支分两支,末端是盲端。 (3)排泄器官:排泄囊和排泄孔 (4)生殖器官:雌雄同体
5 吸 虫 (trematode) 一、华支睾吸虫（Clonorchis sinensis） 目的和要求 1．以华支睾吸虫为代表，掌握吸虫基本形态和生活史的基本特点。 2．了解感染途径、感染方式、寄生部位与致病作用及防治要点。 3．掌握虫卵形态特征和病原学诊断方法。 4．学习绘制虫卵形态图的基本技能。 实验内容 （一） 成虫 1．观察液浸标本（示教）：注意虫体大小、外观。 2．观察染色标本（操作）： 先用肉眼作一般观察，然后在低倍镜下观察下列器官的位置、排列方式和 形态特征： （1）附着器官：口吸盘、腹吸盘，并比较两者的大小。 （2）消化器官：肠支分两支，末端是盲端。 （3）排泄器官：排泄囊和排泄孔。 （4）生殖器官：雌雄同体
雄性生殖器官:睾丸的数目、形态、位置、排列方式等 雌性生殖器官:卵巢、受精囊、卵黄腺、梅氏腺、子宫(其内充满虫卵) (二)中间宿主和幼虫(示教) 1.第一中间宿主:纹沼螺、长角涵螺。 2.观察尾蚴染色标本。 第二中间宿主:淡水鱼(鲤科鱼)、淡水虾 4.囊蚴形态特点:椭圆形,平均大小为0.138mm×0.115mm,囊壁两层,内含幼 虫,可见口、腹吸盘及含有黑色颗粒的排泄囊。 (三)虫卵 (1)虫卵形态(固定标本)(操作) 从大小、形态、颜色、卵壳结构和内含物等五个方面详细观察。 虫卵很小,平均为27~35μm×12~20μm,形似旧式灯泡或芝麻状, 黄褐色,顶端有突起的卵盖,卵盖和卵壳镶嵌处稍向外突起形成肩峰,另 端有一小疣,卵内有一毛蚴 (2)虫卵扫描电镜照片(示教)。 (四)病理标本 1.成虫在肝胆道内的大体标本(示教)。 2.成虫在肝胆道内的病理组织切片(示教)。 胆道内可见华支睾吸虫成虫横切面,大量虫卵散布在子宫腔内,胆管上皮 细胞增生,呈乳头状突向管腔,胆管周围纤维组织增生,压迫肝实质
6 雄性生殖器官：睾丸的数目、形态、位置、排列方式等。 雌性生殖器官：卵巢、受精囊、卵黄腺、梅氏腺、子宫（其内充满虫卵） 等。 （二）中间宿主和幼虫（示教） 1．第一中间宿主：纹沼螺、长角涵螺。 2．观察尾蚴染色标本。 3．第二中间宿主：淡水鱼（鲤科鱼）、淡水虾。 4．囊蚴形态特点：椭圆形，平均大小为 0.138mm×0.115mm，囊壁两层，内含幼 虫，可见口、腹吸盘及含有黑色颗粒的排泄囊。 （三） 虫卵 (1) 虫卵形态（固定标本）（操作） 从大小、形态、颜色、卵壳结构和内含物等五个方面详细观察。 虫卵很小，平均为 27~35μm×12～20μm，形似旧式灯泡或芝麻状， 黄褐色，顶端有突起的卵盖，卵盖和卵壳镶嵌处稍向外突起形成肩峰，另一 端有一小疣，卵内有一毛蚴。 (2) 虫卵扫描电镜照片（示教）。 （四） 病理标本 1. 成虫在肝胆道内的大体标本（示教）。 2. 成虫在肝胆道内的病理组织切片（示教）。 胆道内可见华支睾吸虫成虫横切面，大量虫卵散布在子宫腔内，胆管上皮 细胞增生，呈乳头状突向管腔，胆管周围纤维组织增生，压迫肝实质
(五)作业 绘作业:绘虫卵形态图 用铅笔描绘,以点和线构成轮廓图,线条要平滑,不涂阴影,不涂彩色, 注意用铅笔描形态和大小的比例,绘出特征,力求真实准确 2.标注成虫形态图(用平行线标注各部位的名称)。 3.用简图(如箭头)描述华支睾吸虫的生活史过程。(概述该虫的终宿主、保虫宿 主、成虫寄生部位及其主要损害器官,虫卵排出途径和病原学诊断方法,第一、 第二中间宿主及其幼虫在宿主体内的发育过程,感染期、感染方式和途径等。) 思考 食入未煮熟的淡水鱼可能会感染什么寄生虫病? 参考资料 受精过程和虫卵形成:精子产生后,经雄性生殖孔进入雌性生殖孔内,到达受 精囊。受精通常在输卵管内进行。受精卵进入卵模,来自卵黄腺的卵黄细胞亦 随之而入,同时也有来自梅氏腺和卵黄球分泌的卵壳前体物进入卵模。当输卵 管末端收缩时卵模成关闭状态,随后卵模收缩形成卵壳的特殊形状。卵壳形成 时先从中间部分开始、末端部分跟着出现,最后配上卵盖。 吸虫亦可进行异体受精:即一方的精子经生殖孔或劳氏管(退化的阴道)进 入另一方体内 2.华支睾吸虫第二中间宿主淡水鱼调查 在鱼塘、水沟内捕捉或市场等处购买各种淡水鱼,经种属鉴定后,取鱼肌 肉等不同组织,切成小块置玻片下压片检查囊蚴 3.华支睾吸虫囊蚴分离法
7 （五） 作业 1. 绘作业： 绘虫卵形态图。 用铅笔描绘，以点和线构成轮廓图，线条要平滑，不涂阴影，不涂彩色， 注意用铅笔描形态和大小的比例，绘出特征，力求真实准确。 2. 标注成虫形态图（用平行线标注各部位的名称）。 3. 用简图（如箭头）描述华支睾吸虫的生活史过程。（概述该虫的终宿主、保虫宿 主、成虫寄生部位及其主要损害器官，虫卵排出途径和病原学诊断方法，第一、 第二中间宿主及其幼虫在宿主体内的发育过程，感染期、感染方式和途径等。） 思考： 食入未煮熟的淡水鱼可能会感染什么寄生虫病？ 参考资料 1. 受精过程和虫卵形成：精子产生后，经雄性生殖孔进入雌性生殖孔内，到达受 精囊。受精通常在输卵管内进行。受精卵进入卵模，来自卵黄腺的卵黄细胞亦 随之而入，同时也有来自梅氏腺和卵黄球分泌的卵壳前体物进入卵模。当输卵 管末端收缩时卵模成关闭状态，随后卵模收缩形成卵壳的特殊形状。卵壳形成 时先从中间部分开始、末端部分跟着出现，最后配上卵盖。 吸虫亦可进行异体受精：即一方的精子经生殖孔或劳氏管（退化的阴道）进 入另一方体内。 2. 华支睾吸虫第二中间宿主淡水鱼调查 在鱼塘、水沟内捕捉或市场等处购买各种淡水鱼，经种属鉴定后，取鱼肌 肉等不同组织，切成小块置玻片下压片检查囊蚴。 3. 华支睾吸虫囊蚴分离法
将华支睾吸虫第二中间宿主——一淡水鱼置搅肉机内搅碎(亦可用手工剁 碎)。每10克鱼肉用250毫升消化液(配方:胃蛋白酶98克,IN盐酸164 毫升,氯化钠17克,加水至2000毫升)消化4~12小时,用铜筛过滤去掉粗 渣,滤液经反复多次生理盐水换水沉淀,最后吸取沉淀物置培养皿内在双目镜 下检查囊蚴 动物感染方法 将分离出的形态不同的各种囊蚴按号分别置于培养皿内,取实验动物豚鼠 或家兔,用吸管吸取50或200个囊蚴分别经食道喂给豚鼠或家兔,标记实验动 物,同等条件下饲养,40天后麻醉致死,剖开腹腔,取出肝胆器官,沿胆总管 至胆囊剪开,寻找成虫,然后检查肝内的小胆管,把组织剪成数块,向剪开处 轻轻挤压,把成虫挤出。见有成虫即取出置盛有生理盐水的器皿中进行观察鉴 定,必要时可染色鉴别 、布氏姜片虫( fasciolopsis bushi) 目的和要求 了解成虫的基本形态和生活史的基本特点。 2.从成虫的体积和腹吸盘的大小理解其机械致病作用。 3.掌握虫卵特征和病原学诊断方法 4.熟识植物媒介,掌握防治要点。 实验内容 )成虫 1.成虫液浸标本(示教) 2.成虫染色标本(操作) 注意虫体大小,背腹扁平肥厚,腹吸盘较口吸盘大4~5倍,肌肉相当发达
8 将华支睾吸虫第二中间宿主——淡水鱼置搅肉机内搅碎（亦可用手工剁 碎）。 每 10 克鱼肉用 250 毫升消化液（配方：胃蛋白酶 9.8 克，1N 盐酸 164 毫升，氯化钠 17 克，加水至 2 000 毫升）消化 4～12 小时，用铜筛过滤去掉粗 渣，滤液经反复多次生理盐水换水沉淀，最后吸取沉淀物置培养皿内在双目镜 下检查囊蚴。 4. 动物感染方法 将分离出的形态不同的各种囊蚴按号分别置于培养皿内，取实验动物豚鼠 或家兔，用吸管吸取 50 或 200 个囊蚴分别经食道喂给豚鼠或家兔，标记实验动 物，同等条件下饲养，40 天后麻醉致死，剖开腹腔，取出肝胆器官，沿胆总管 至胆囊剪开，寻找成虫，然后检查肝内的小胆管，把组织剪成数块，向剪开处 轻轻挤压，把成虫挤出。见有成虫即取出置盛有生理盐水的器皿中进行观察鉴 定，必要时可染色鉴别。 二、 布氏姜片虫（Fasciolopsis buski） 目的和要求 1. 了解成虫的基本形态和生活史的基本特点。 2. 从成虫的体积和腹吸盘的大小理解其机械致病作用。 3. 掌握虫卵特征和病原学诊断方法。 4. 熟识植物媒介，掌握防治要点。 实验内容 （一） 成虫 1．成虫液浸标本（示教） 2．成虫染色标本（操作） 注意虫体大小，背腹扁平肥厚，腹吸盘较口吸盘大 4～5 倍，肌肉相当发达
(二)中间宿主、幼虫和媒介(示教) 1.中间宿主:扁卷螺 尾蚴染色标本 3.囊蚴染色标本 4.媒介:菱角、荸荠(马蹄)等 三)虫卵 1.虫卵形态(操作) 虫卵大小约130~140μm×80-85μm,椭圆形,淡黄色,卵壳薄,卵盖小(不 明显),卵内含一个卵细胞和数十个卵黄细胞。 2.虫卵扫描电镜照片(示教) (四)作业:1.绘虫卵形态图。 2标注成虫形态图 并殖吸虫( Paragonimus) 目的和要求 1.了解卫氏并殖吸虫的形态特征和生活史 2.了解并殖吸虫寄生部位和主要致病作用。 掌握卫氏并殖吸虫虫卵的形态特征和病原学诊断方法。 实验内容
9 （二）中间宿主、幼虫和媒介（示教） 1．中间宿主：扁卷螺 2．尾蚴染色标本 3．囊蚴染色标本 4．媒介：菱角、荸荠（马蹄）等。 （三）虫卵 1. 虫卵形态（操作） 虫卵大小约 130~140μm×80~85μm，椭圆形，淡黄色，卵壳薄，卵盖小（不 明显） ，卵内含一个卵细胞和数十个卵黄细胞。 2. 虫卵扫描电镜照片（示教） （四）作业：1. 绘虫卵形态图。 2.标注成虫形态图 三、并殖吸虫(Paragonimus) 目的和要求 1．了解卫氏并殖吸虫的形态特征和生活史。 2．了解并殖吸虫寄生部位和主要致病作用。 3．掌握卫氏并殖吸虫虫卵的形态特征和病原学诊断方法。 实验内容