第五章 检疫性真菌病害 ①小麦矮腥黑穗病Wheat dwarf bunt 2小麦印度腥黑穗病Wheat karnal bunt 3烟草霜霉病Tobacco blue mold ④马铃薯癌肿病Potato wart ⑤榆树枯萎病Dutch elm disease 复习思考题
第五章 检疫性真菌病害 小麦矮腥黑穗病 Wheat dwarf bunt 小麦印度腥黑穗病 Wheat karnal bunt 烟草霜霉病Tobacco blue mold 马铃薯癌肿病Potato wart 榆树枯萎病Dutch elm disease 复习思考题
植物检疫性真菌常见检疫检验技术 直接检验 ■染色检验 ■洗涤检验 ■保湿萌芽检验 ■分离培养检验
植物检疫性真菌常见检疫检验技术 ◼ 直接检验 ◼ 染色检验 ◼ 洗涤检验 ◼ 保湿萌芽检验 ◼ 分离培养检验
1.直接检验 ■适用范围：具明显症状的植物材料 主要工具：放大镜或解剖镜，主要是利用 肉眼现场快速初检
1.直接检验 ◼ 适用范围：具明显症状的植物材料 ◼ 主要工具：放大镜或解剖镜，主要是利用 肉眼现场快速初检
2.染色检验法 原理：染病的组织，或病原菌本身，经特 殊的化学药品处理后，可带有特殊的颜色 例如：马铃薯癌肿病(Synchytrium endobioticum)薯块上癌瘤不明显时，可做 徒手切片，加1滴1%的“藏花红”染色液， 健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞 壁呈暗红色
2.染色检验法 ◼ 原理：染病的组织，或病原菌本身，经特 殊的化学药品处理后，可带有特殊的颜色 ◼ 例如：马铃薯癌肿病（Synchytrium endobioticum）薯块上癌瘤不明显时，可做 徒手切片，加1滴1％的“藏花红”染色液， 健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞 壁呈暗红色
3.洗涤检验法 原理：种子表面常附着真菌孢子，将一定 量的样品放入容器内，加一定量的无菌水， 充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后 离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种 类和数量。 ■ 主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微 镜、0.1%吐温溶液等 ■ 主要试验流程如下：
3.洗涤检验法 ◼ 原理：种子表面常附着真菌孢子，将一定 量的样品放入容器内，加一定量的无菌水， 充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后 离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种 类和数量。 ◼ 主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微 镜、0.1％吐温溶液等 ◼ 主要试验流程如下：
称取样品 洗脱孢子（振荡〉 离心富集 镜检计数
称取样品 洗脱孢子（振荡） 离心富集 镜检计数
影响检验结果的因素： ① 种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下 来 ② 离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉 降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子： ③ 将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀， 造成一些视野间孢子分布极不均匀； ④ 操作不够严格，造成人为误差
◼ 影响检验结果的因素： ① 种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下 来； ② 离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉 降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子； ③ 将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀， 造成一些视野间孢子分布极不均匀； ④ 操作不够严格，造成人为误差
4.保湿萌芽检验 原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还 是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始 侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出 病菌。 主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培 养箱等。 ■ 主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和土内 萌芽检验等三种方法，其中保湿培养检验法 是国内外最常用的一种方法
4.保湿萌芽检验 ◼ 原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还 是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始 侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出 病菌。 ◼ 主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培 养箱等。 ◼ 主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和土内 萌芽检验等三种方法，其中保湿培养检验法 是国内外最常用的一种方法
■吸水纸法 吸水 无菌吸水纸(3层 灭菌培养皿 1-1.5cm 恒温 12h光照黑暗交替 培养、观察 所观察到的结果示意图如下
◼ 吸水纸法 无菌吸水纸（3层） 灭菌培养皿 ○ ○ ○ ○ ○ 吸水 1－1.5cm 培养、观察 恒温 12h光照黑暗交替 所观察到的结果示意图如下
黑麦草4种种传真菌在吸水纸上培养的形态 1.Drechslera siccans 2.D.tetramera 3.D.dictyoides f.sp.perennis 4.Biporlaris sorkinianum