第大章 检疫性细菌病害 植物检疫性病原细菌的检验方法 梨火疫病 Fire Blight 玉米细菌性枯萎病Stewart's bacterial wilt of corn 柑橘黄龙病 Citrus Yellow shoot 哪子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing 复习思考题
第六章 检疫性细菌病害 植物检疫性病原细菌的检验方法 梨火疫病 Fire Blight 玉米细菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn 柑橘黄龙病 Citrus Yellow shoot 椰子致死黄化病 Coconut Lethal Yellowing 复习思考题
植物病原细菌检疫检验技术 ·直接检测：直观检验和生长检验 间接检测 活菌检测 免疫吸附分离法 噬菌体检验 非活菌检测 血清学检测
植物病原细菌检疫检验技术 • 直接检测：直观检验和生长检验 • 间接检测 活菌检测 免疫吸附分离法 噬菌体检验 非活菌检测 血清学检测
1、活菌检测 ·分离培养法：营养培养基、选择培养基或鉴 别培养基分离纯化得到的细菌 ·浓缩接种及离体叶检测：提取液浓缩接种感 病植物，观测发病情况。 例如：浙江大学等在1%灭菌水琼脂中加 75×10一6的苯并咪唑，做平板，加感病植物 叶片，针刺十摩擦接种，培养（光、温、湿 度)，短期获得症状。主要应用于水稻细菌 性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测
1、活菌检测 • 分离培养法：营养培养基、选择培养基或鉴 别培养基分离纯化得到的细菌 • 浓缩接种及离体叶检测：提取液浓缩接种感 病植物，观测发病情况。 例如：浙江大学等在1％灭菌水琼脂中加 75×10－6的苯并咪唑，做平板，加感病植物 叶片，针刺＋摩擦接种，培养（光、温、湿 度），短期获得症状。主要应用于水稻细菌 性条斑病菌和小麦细菌性黑颖病菌的检测
2.免疫吸附分离法 原理：接合血清学与平板分离技术，利用 与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细 菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目 标细菌转移或释放到培养基上生长。 ·方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸 附稀释培养法 平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下：
2.免疫吸附分离法 • 原理：接合血清学与平板分离技术，利用 与抗原高度亲和性的抗体，来捕获目标细 菌，样本中其他细菌均被冲洗掉，再将目 标细菌转移或释放到培养基上生长。 • 方法：平皿免疫吸附评价测定法和免疫吸 附稀释培养法 平皿免疫吸附评价测定法简略流程如下：
常用溶入丙酮的硝酸纤 维素或指甲油作包被 ￥生 洗涤液使用包被缓冲液 R S2行合 728 A.用抗体包被样本的测定点；B用洗 涤液洗后的测定点，C.所测样本的孵 有：D.经洗涤后留下的免疫诱捕细菌 平皿免疫吸附评价测定 E,在45℃下加人营养隙脂；E,免 (immunosorption evaluation test 疫诱捕细茵在培养基中生长
常用溶入丙酮的硝酸纤 维素或指甲油作包被 洗涤液使用包被缓冲液
3.噬菌体检验 原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞， 在液体培养时，会使浑浊的细菌悬浮液变 清，在固体平板上培养，则出现许多边缘 整齐、透明光亮的噬菌斑。噬菌体具有专 化性，利用此特点，可鉴别细菌的种类
3.噬菌体检验 • 原理：噬菌体侵染细菌，裂解寄主细胞， 在液体培养时，会使浑浊的细菌悬浮液变 清，在固体平板上培养，则出现许多边缘 整齐、透明光亮的噬菌斑。噬菌体具有专 化性，利用此特点，可鉴别细菌的种类
4.非活菌检测 。 非活菌检测的方法很多，下表是检测病原 细菌常用的一些方法，前9种血清学方法， 均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定， 又能直接用于病种或病株，甚至是无症感 染组织的检测
4.非活菌检测 • 非活菌检测的方法很多，下表是检测病原 细菌常用的一些方法，前9种血清学方法， 均属非活菌检测。它们既能用于病原鉴定， 又能直接用于病种或病株，甚至是无症感 染组织的检测
用于植物病原细菌鉴定和检测的主要方法 (Duncan J.1992年基础上改编) 应用 测定所需 于 大范围 鉴定和检测方法 检测病株 检测无症 时间① 鉴定 应用 或病种子 感染组织 免疫扩散(Immunodiffusion) 1≈2d ++ 玻片凝集(Slide agglutination) 5~10min 乳胶凝集(Latex agglutination) 5~60min ++ A蛋白共凝集(Protein A agglutination) 10~60min ++ 十十 + 免疫荧光(Immunofluorescent,IF) 23h ++ 免疫荧光吸附(Immunosorbent-IF) 3~4h +十 +十 ++ 酶联免疫吸附试验(ELISA) 4~12h ++ 免疫荧光菌落染色(IF colony staining) 1~3d ++ 免疫放射试验(Immuno-radiometric assay) 4~8h ++ ++ 23d +十 ++ 免疫分离(Immunoisolation) 多聚酶链反应(PCR) 2~3h + ++ ++ ++ Biolog测定(Biolog test)? 4~24h 脂肪酸分析(Fatty acid profiles) 34h ++ 蛋白质分析(Protein profiles). 6-48h 营养试剂盒(Nutritional profile kits) 4~48h ①测定所需时间不包括分离和纯化： ②+十为好用但有一定局限性；十为应用中有很大局限性：一为不能直接应用。 窗有面厕
5.血清学检验 。原理： 。 方法：酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫 荧光抗体法 。 免疫荧光抗体法：将荧光染料（异硫氢酸荧 光黄或罗丹明)与抗体以化学方法接合，再 与抗体反应，形成有荧光标记的抗体一抗原 复合物，在荧光显微镜下，可观察到黄绿色 荧光
5.血清学检验 • 原理： • 方法：酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫 荧光抗体法 • 免疫荧光抗体法：将荧光染料（异硫氢酸荧 光黄或罗丹明）与抗体以化学方法接合，再 与抗体反应，形成有荧光标记的抗体—抗原 复合物，在荧光显微镜下，可观察到黄绿色 荧光
梨火疫病 Fire blight of pear ◆分布： 1878年首先由burrill描述，在纽约发生， 后由Erwin命名，是第一个被确定的植 物细菌病害。主要分布于北美洲于西 北欧，中欧、地中海、东南欧及大洋 州和亚洲也有分布。大约40多个国家
梨火疫病 Fire blight of pear ◆分布： 1878年首先由burrill描述，在纽约发生， 后由Erwin命名，是第一个被确定的植 物细菌病害。主要分布于北美洲于西 北欧，中欧、地中海、东南欧及大洋 州和亚洲也有分布。大约40多个国家