《医学病毒学概论》 病毒感染的检测和防治 谢幼华 复旦大学基础医学院 分子病毒学教育部/卫计委重点实验室 医学院治道楼403室 hxie@fudan.edu.cn
病毒感染的检测和防治 《医学病毒学概论》 谢幼华 复旦大学基础医学院 分子病毒学教育部/卫计委重点实验室 医学院治道楼403室 yhxie@fudan.edu.cn
生物安全 安全等级 试验微生物 代表病毒 BsSL-1(危害程非感染性物质;证明对人健康无灭活病毒、病毒基因 度第四类) 害的感染性物质 组片段、少数感染动 物的活病毒 BSL-2(危害程与人类疾病相关的中等危险度的大多数常见病毒(腺 度第三类) 感染性物质,多具有有效的预防病毒、肝炎病毒、巨 和/或治疗措施(临床检测必备)细胞病毒、BB病毒、 EV71等) BSL-3(危害程可引起严重的或致死性疾病的感艾滋病毒、狂犬病毒、 度第二类,少染性物质,有一定的预防和/或日本脑炎、黄热病毒 数第一类) 治疗措施 BSL-4(危害程具有高度危险性,严重威胁人生天花病毒、埃博拉病 度第一类) 命的感染性物质,没有预防和/毒 或治疗方法
生物安全 安全等级 试验微生物 代表病毒 BSL-1（危害程 度第四类） 非感染性物质；证明对人健康无 害的感染性物质 灭活病毒、病毒基因 组片段、少数感染动 物的活病毒 BSL-2（危害程 度第三类） 与人类疾病相关的中等危险度的 感染性物质，多具有有效的预防 和/或治疗措施（临床检测必备） 大多数常见病毒（腺 病毒、肝炎病毒、巨 细胞病毒、EB病毒、 EV71等） BSL-3（危害程 度第二类，少 数第一类） 可引起严重的或致死性疾病的感 染性物质，有一定的预防和/或 治疗措施 艾滋病毒、狂犬病毒、 日本脑炎、黄热病毒 BSL-4（危害程 度第一类） 具有高度危险性，严重威胁人生 命的感染性物质，没有预防和/ 或治疗方法 天花病毒、埃博拉病 毒
样品的选择 ●选择适当的样品是保证病毒检测正确性的关键之 疾病类型 对病因病毒感染的估计 季节性病毒感染(如冬春季:腹泻、流感;夏秋: 虫媒病毒)
样品的选择 选择适当的样品是保证病毒检测正确性的关键之一 疾病类型 对病因病毒感染的估计 季节性病毒感染（如冬春季：腹泻、流感；夏秋： 虫媒病毒）
样品的选择 呼吸道皮肤眼神经胃肠道血液肝炎 粘膜 脑 淋巴 Throat/ 十十 ++十 Nasopharynx (EV) Stoo 十十 CSF 十十 (HSV) Urine +++(EV +十 CMV) (EV) Serum(acute and 十十 convalescent) Brain biopsy Conjunctival swab +十 Vesicle fluid +十十 EV: enteroviruses
样品的选择 呼吸道 皮肤 粘膜 眼 神经 脑 胃肠道 血液 淋巴 肝炎 Throat/ Nasopharynx +++ ++ (EV) ++ (EV) Stool +++ CSF +++ (HSV) Urine +++(EV, CMV) +++ (EV) Serum (acute and convalescent) ++ ++ +++ +++ Brain biopsy ++ Conjunctival swab +++ Vesicle fluid +++ EV: enteroviruses
样品的获取和保存 样品的获取 样品应在症状出现后尽快获取 选择的试验材料(如拭子、容器、抗凝物质等)应不含可能影响 后续病毒检测的物质 对含有其它微生物或易受污染的样品,在病毒分离时适当加入抗 生素 样品应当明确标记来源和时间,具有检测所需的样品量 样品的保存 尽快处理(取样后12-24小时内) 样品在运输中应置于4°C ≤5天,保存在4°C;>5天,保存在-20°C或-70°C
样品的获取和保存 样品的获取 样品应在症状出现后尽快获取 选择的试验材料（如拭子、容器、抗凝物质等）应不含可能影响 后续病毒检测的物质 对含有其它微生物或易受污染的样品，在病毒分离时适当加入抗 生素 样品应当明确标记来源和时间，具有检测所需的样品量 样品的保存 尽快处理（取样后12-24小时内） 样品在运输中应置于4°C ≤5天，保存在4°C；＞5天，保存在-20°C或-70°C
病毒的检测方法 病毒的分离 组织学和形态学检查 病毒感染性的测定 分子检测
病毒的分离 组织学和形态学检查 病毒感染性的测定 分子检测 病毒的检测方法
病毒的分高和培养 ●细胞培养 原代细胞(PMK、PBMC,etc.) 二倍体细胞(HDF,etc) 连续传代细胞(HEK,Vero,MDCK,BHK,HeLa,etc.) 动物实验 乳鼠 >鸡胚( embryonated chicken eggs)
病毒的分离和培养 细胞培养 原代细胞（PMK、PBMC, etc.） 二倍体细胞（HDF, etc.） 连续传代细胞（HEK, Vero, MDCK, BHK, HeLa, etc.） 动物实验 乳鼠 鸡胚（embryonated chicken eggs）
利用鸡胚培养病毒 Air sac Injection into chorioallantoic membrane 绒毛尿囊膜 牛痘病毒( vaccinia virus) Injection into 羊膜 Injection into 卵黄囊 ction into 鸡新城疫病毒 Microbiology with Diseases by Taxonomy, 4th Edition
Microbiology with Diseases by Taxonomy, 4th Edition 羊膜 卵黄囊 绒毛尿囊膜 牛痘病毒（vaccinia virus） 鸡新城疫病毒 利用鸡胚培养病毒
组织学和形庵学检查 病毒颗粒的观察(电子显微镜) 细胞病变效应(CPE) 包涵体
组织学和形态学检查 病毒颗粒的观察（电子显微镜） 细胞病变效应（CPE） 包涵体
电子显微镜观 Column of transmission electron microscope Electron gun Condenser lens Specime Objective lens naane Projector lens Rotavirus Adenovirus Coronavirus Final image fluorescent screen Bailey scott' s diagnostic microbiology 13th
Rotavirus Adenovirus Coronavirus Bailey Scott's Diagnostic Microbiology 13th 电子显微镜观察