0有机化学实验 从牛奶中分离酪蛋白 复旦大学化学教学实验中心
从牛奶中分离酪蛋白 有机化学实验 复旦大学化学教学实验中心
实验目的 1.了解等电点概念 2掌握通过调节pH值实现蛋白质分离的方法 3.了解缩二脲反应鉴定蛋白质(多肽)
实验目的 1.了解等电点概念 2.掌握通过调节pH值实现蛋白质分离的方法 3.了解缩二脲反应鉴定蛋白质（多肽）
NIV 角实验背景 酪蛋白 NH/HO GOLD STANDARD CASEIN Ho.∠NH 等电点是一个分子或者表面不带电荷时的pH值 p =4.8
实验背景 pI=4.8 酪蛋白 等电点是一个分子或者表面不带电荷时的pH值
实脸原理 1.酪蛋白是含磷蛋白质的复杂混合物,为两性化合物 溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。当调节 牛奶的pH值达到酪蛋白的等电点(pⅠ)4.8左右时,蛋 白质所带正负电荷相等,呈电中性,此时酪蛋白的溶解 度最小,以沉淀形式从牛奶中析出。通过离心的方法将 酪蛋白和乳糖分离。 OH 盐(溶解度高) 溶解度低 盐(溶解度髙) 沉淀析出
实验原理 1.酪蛋白是含磷蛋白质的复杂混合物，为两性化合物， 溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。当调节 牛奶的pH值达到酪蛋白的等电点（pI）4.8左右时，蛋 白质所带正负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解 度最小，以沉淀形式从牛奶中析出。通过离心的方法将 酪蛋白和乳糖分离。 盐 （溶解度高） 溶解度低 盐 （溶解度高） 沉淀析出
NIV 实验原理 2缩二脲反应原理:具有两个或两个以上肽键的化 合物在碱性条件下与Cu2反应,生成红紫色的络合物。 A"9人° 蛋白质或多肽 紫红色络合物
2.缩二脲反应原理：具有两个或两个以上肽键的化 合物在碱性条件下与Cu2+反应,生成红紫色的络合物。 实验原理 蛋白质或多肽 紫红色络合物
0看角实验药品 去脂牛奶 稀醋酸(1:9)溶液 乙醇 乙醚 1%硫酸铜溶液 04M氢氧化钠生理盐水溶液
实验药品 去脂牛奶 稀醋酸（1:9）溶液 乙醇 乙醚 1%硫酸铜溶液 0.4 M 氢氧化钠生理盐水溶液
0看角实验药品 M. p b p 乙醚 74.12 116 35 0.713 乙醇 46.07 114 78 0.789
乙醚 74.12 -116 35 0.713 乙醇 46.07 -114 78 0.789 M.w. m.p. b.p. d. 实验药品
实验内容 1.50mL去脂牛奶100m烧杯40° 稀醋酸(1:9)2mL 2.冷却10min,3000r/min离心15min 3.倾析取沉淀,95%乙醇20mL搅匀,布氏漏斗抽滤 4.10m乙醇:乙醚〓1:1洗涤两次,5mL乙醚洗涤,抽滤 5.烘干,称重 6.去0.5g产物于5mL0.4 MNaoH溶液,颜色反应
实验内容 1. 50 mL去脂牛奶 100 mL烧杯 40 oC 稀醋酸（ 1:9 ） 2 mL 2. 冷却10 min， 3000 r/min离心15 min 3. 倾析取沉淀， 95%乙醇 20 mL 搅匀，布氏漏斗抽滤 4. 10 mL 乙醇：乙醚 = 1:1 洗涤两次， 5 mL乙醚洗涤，抽滤 5. 烘干，称重 6. 去0.5 g产物于5 mL 0.4 M NaOH溶液， 颜色反应
注意事项 1.牛奶在实验前不能放置很久,时间过长会使其中的乳糖变为乳酸 影响分离。 2.加入的醋酸不可过量,过量酸会促使牛奶中的乳糖水解为半乳糖 和葡萄糖
注意事项 1. 牛奶在实验前不能放置很久，时间过长会使其中的乳糖变为乳酸 影响分离。 2. 加入的醋酸不可过量，过量酸会促使牛奶中的乳糖水解为半乳糖 和葡萄糖