第四章生物免疫分析技术
第四章 生物免疫分析技术
免疫学方法在食品分析中正得到越来越广泛的 运用，其中酶联免疫吸附法(ELISA)已经在 食品工业中广泛应用，它能够用于测定人们希 望含有的物质，以及不希望含有的物质。例如 现在人们所关注的食品安全性问题中一些物质 的检测：杀虫剂、药物残留物、激素、生长素、 微生物毒素、真菌毒素或肠毒素、天然毒素， 以及一些添加剂。 免疫分析法具备有效的灵敏度、特异性、快速 和低成本的优点；可对大量的样品进行常规分 析；能够用于样品的定性筛选，也能够对样品 进行定量测定以确定样品中待测组分的含量
➢ 免疫学方法在食品分析中正得到越来越广泛的 运用，其中酶联免疫吸附法（ELISA）已经在 食品工业中广泛应用，它能够用于测定人们希 望含有的物质，以及不希望含有的物质。例如 现在人们所关注的食品安全性问题中一些物质 的检测：杀虫剂、药物残留物、激素、生长素、 微生物毒素、真菌毒素或肠毒素、天然毒素， 以及一些添加剂。 ➢ 免疫分析法具备有效的灵敏度、特异性、快速 和低成本的优点；可对大量的样品进行常规分 析；能够用于样品的定性筛选，也能够对样品 进行定量测定以确定样品中待测组分的含量
4.1免疫的原理 Ag Ab Ag-Ab 特异性、灵敏性 在Ag,Ab反应中，用容易示踪的化学物 质标记一种反应物，以了解反应是否发 生，发生部位，以及发生的程度（即对 未知成分的样品进行定性、定位及定量 分析)
4.1 免疫的原理 Ag + Ab Ag－Ab 特异性、灵敏性 在Ag，Ab反应中，用容易示踪的化学物 质标记一种反应物，以了解反应是否发 生，发生部位，以及发生的程度（即对 未知成分的样品进行定性、定位及定量 分析）
4.2酶联免疫法 免疫酶技术：把抗原抗体的免疫反应和酶 的高效催化作用原理有机地结合起来。它 具有免疫荧光试验和放射免疫试验的优点， 并克服上述两种方法的缺点。 酶标记试剂制备容易、稳定、有效期长， 免疫酶技术的敏感性接近放射免疫试验， 可直接肉眼观察也可借助简单的仪器作定 量测定，所得结果比较客观
4.2 酶联免疫法 ◼ 免疫酶技术：把抗原抗体的免疫反应和酶 的高效催化作用原理有机地结合起来。它 具有免疫荧光试验和放射免疫试验的优点， 并克服上述两种方法的缺点。 ◼ 酶标记试剂制备容易、稳定、有效期长， 免疫酶技术的敏感性接近放射免疫试验， 可直接肉眼观察也可借助简单的仪器作定 量测定，所得结果比较客观
酶免疫测定或免疫酶技术是指酶标记抗体或酶 标记抗体进行的抗原抗体反应。它主要包括两 个方面： 免疫过氧化物酶法：以过氧化物酶作为标记， 与抗原或抗体结合，然后根据酶与其底物间所 产生的不溶性颜色产物，借助于光学或电子显 微镜观察细胞及亚细胞水平的抗原或抗体。 酶联免疫吸附法：根据可溶性抗原或抗体与不 溶性固相载体结合后，还保留其免疫活性，结 合了作为标记的酶催化作用
◼ 酶免疫测定或免疫酶技术是指酶标记抗体或酶 标记抗体进行的抗原抗体反应。它主要包括两 个方面： ◼ 免疫过氧化物酶法：以过氧化物酶作为标记， 与抗原或抗体结合，然后根据酶与其底物间所 产生的不溶性颜色产物，借助于光学或电子显 微镜观察细胞及亚细胞水平的抗原或抗体。 ◼ 酶联免疫吸附法：根据可溶性抗原或抗体与不 溶性固相载体结合后，还保留其免疫活性，结 合了作为标记的酶催化作用
ELISA @ELISA的基本原理和方法 @ELISA的种类和变化 @ELISA的特点 @ELISA的应用实例
ELISA的基本原理和方法 ELISA的种类和变化 ELISA的特点 ELISA的应用实例 ELISA
4.2.1基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接， 然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂）
4.2.1 基本原理 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接， 然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 测定的对象可以是抗体也可以是抗原。 在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂）
测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上， 但仍保留其免疫活性， 然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物 (标记物)，此偶联物仍保留其原免疫活性与 酶活性， 当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应 结合后，再加上 ELISA REAGENTS 酶的相应底物， Substrate (color reaction) 即起催化水解或 Enzyme-conjugated anti-FeLV antibody 2 氧化还原反应而 呈颜色。 FeLV in serum Anti-FeLV antibody 1 (capture antibody)
• 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上， 但仍保留其免疫活性， • 然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物 （标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与 酶活性， • 当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应 结合后，再加上 酶的相应底物， 即起催化水解或 氧化还原反应而 呈颜色
颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正 比，因此可借助于颜色反应的深浅来定量抗 体或抗原。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子 显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪） 加以测定。 其方法简单，方便迅速，特异性强
➢ 颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正 比，因此可借助于颜色反应的深浅来定量抗 体或抗原。 ➢ 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子 显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪） 加以测定。 ➢ 其方法简单，方便迅速，特异性强
4.2.2酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原，半抗原在交联剂作 用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它 不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促 反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不 同的底物，将得到不同的颜色反应
4.2.2 酶及其底物 酶结合物是酶与抗体或抗原, 半抗原在交联剂作 用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它 不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促 反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不 同的底物 ，将得到不同的颜色反应