第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 第二节 第二章分光光度技术 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 实验五BCA 法测定蛋白质浓度 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术 第一节生物材料的选取与预处理 第二节生物大分子的沉淀分离技术 第三节生物大分子离心分离技术 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 实验九酪蛋白的制备 实验十动物肝脏中提取DNA 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提 第四章电泳技术 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 第五章层析技术 第一节 层析技术概述 吸附层析 第三节 分配层析 第四节 离子交换层析 第五节 凝胶层析 第六节亲和层析 第七节 高效液相层析 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶 实验十二离子交换层析分离氨基酸 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法 第六章 分子生物学基本技术 核酸分子杂交 聚合酶链反应 第三节分子克隆 实验二十二Southern杂交分析 实验二十三 Northern 杂交分析 实验二十四 PCR 基因扩增 验二十五质粒DNA的提取及酶切 实验二十六 DNA重组实验 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 附录一常用缓冲液的配制方法 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂 附录三一般化学试剂的分级 附录四 English words in the lab

第一章 蛋白质（酶）、核酸的分离纯化 第一节 引言 一、分离纯化的意义 二、分离纯化的要求 三、分离纯化的一般程序 第二节 蛋白质（酶）、核酸分离纯化的前处理 一、材料的选择与预处理 二、细胞的破碎 三、细胞器的分离 四、提取 第三节 分离纯化 一、 粗提纯 二、 精提纯 三、 纯度鉴定 第四节 生物大分子的浓缩、干燥及保存 第二章 离心技术 ▪ 离心技术概论 ▪ 一般制备离心 ▪ 超离心技术 第三章 层析技术 引言 层析法的基本原理 层析法的分类 第一节 吸附层析技术 第二节 分配层析技术 第三节 凝胶过滤层析技术 第四节 离子交换层析法 第五节 亲和层析法 第六节 高压液相层析（HPLC） 第四章 电泳技术 引言 第一节 电泳的基本原理 第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 第三节 琼脂糖凝胶电泳 第四节 免疫电泳 一、概述 二、聚丙烯酰胺凝胶的制备 三、凝胶浓度和交联度与孔径大小的关系 四、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验一 主要植物种子的形态和构造 实验二 种子平衡水分的测定 实验三 种子淀粉含量测定 实验四 直链淀粉含量的测定 实验五 脂肪含量测定 . 实验六 蛋白质含量测定 实验七 种子引发的效应 实验八 种子散落性测定 实验九 扦样 实验十 种子净度分析 实验十一 种子休眠特性鉴定 实验十二 种子发芽习性和幼苗主要构造观察 实验十三 种子发芽试验 实验十四 种子生活力的四唑染色测定 实验十五 种子活力测定 实验十六 棉花健籽率的检验 实验十七 大、小麦及大豆品种纯度室内鉴定方法 实验十八 小麦品种纯度田问检验 实验十五 玉米品种纯度检验 实验十七 ISTA 小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺. 凝胶电泳鉴定品种的标准程序 实验十八 玉米种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 实验十九 水稻和玉米种子聚丙烯酰胺凝胶同工酶电泳鉴定 实验二十一 品种真实性的 RAPD 分子标记分析 实验二十 种子水分测定

教学内容 备注 一、2DNA的组成、结构 二、2天然DA的制备、限制性核酸内切酶及DNA的片段化 三、2特异性DNA片段的PCR扩增 四、2DNA片段的化学合成及凝胶电泳检测

第一节 DNA的提取与纯化 第二节 核酸凝胶电泳技术 第三节 核酸的分子杂交 第四节 基因扩增技术——PCR 第五节 DNA序列分析

包括①凝胶电泳②细菌的转化和转染③核酸分子杂交④定点突变⑤PCR⑥RFLP⑦RAPD⑧DNA序列分析⑨目的基因的分离和转基因植物、转基因动物等技术

 掌握板状电泳分离血清蛋白的操作技术  熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理

研究了从紫金山铜矿生物堆浸矿堆中分离出来的浸矿菌群在不同温度下的氧化活性和对紫金山硫化铜矿石的浸出规律,并利用变性梯度凝胶电泳法研究了15℃和30℃的菌群组成情况.结果表明:所分离的细菌的最佳生长温度为30℃,浸出10d,铜浸出率为87.62%,在最佳生长温度以外铜浸出率都会降低;15℃和30℃的优势菌分别为Leptospirillum fer-riphilum和Acidithiobacillus thiooxidans,两个温度下均有同一种劣势菌Acidithiobacillus caldus;优势菌种随温度的变化是与菌种的性质相关的

生化大实验是一门综合性的实验课程，教学的目的在于通过对生命物质的分离制备，纯化，分析等综合性实验，在已掌握的基础生物化学理论知识和生化实验常用方法的基本原理、基本操作技术（如滴定、比色、层析、电泳等）的基础上，训练学生的综合实践动手能力，掌握蛋白质、酶、核酸等重要物质的分离、纯化等的测定技术。实验一蛋白质含量的测定实验二离子交换法血清纯化IgG实验三离子交换层析法分离血清白蛋白实验四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量实验五等电聚焦法测定样品的等电点实验六质粒的分离与纯化实验七PCR扩增目的基因片段实验八酶联免疫吸附实验

实验一：果蝇性状观察与雌雄鉴别 实验二：果蝇一对相对性状的遗传分析 实验三：果蝇两对相对性状的遗传分析 实验四：伴性遗传试验 实验五：西藏特色鱼类染色体观察与分析 实验六：西藏特色畜禽染色体观察与分析 实验七：果蝇唾腺染色体标本制备和观察 实验八：核酸的琼脂糖凝胶电泳 实验九：PCR技术与分析