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第一章蛋白质(酶)、核酸的分离纯化 第二章离心技术 第三章层析技术 第四章申泳技术
第一章 蛋白质（酶）、核酸的分离纯化 第三章 层析技术 第二章 离心技术 第四章 电泳技术
第一章蛋白质(酶)、核酸的分离纯化 第一节引宣 、分离纯化的意义 分离纯化的要求 、分离纯化的一般程序 第二节蛋白质(醢)、核酸分离纯化的前处理 、材料的选择与预处理 细胞的破碎 三、细胞器的分离 四、提取 第三节分离纯化 、粗提纯 精提纯 纯度鉴定 第四节生物大分子的浓缩、干燥及保存
第一章 蛋白质（酶）、核酸的分离纯化 第一节 引言 一、分离纯化的意义 二、分离纯化的要求 三、分离纯化的一般程序 第二节 蛋白质（酶）、核酸分离纯化的前处理 一、材料的选择与预处理 二、细胞的破碎 三、细胞器的分离 四、提取 第三节 分离纯化 一、 粗提纯 二、 精提纯 三、 纯度鉴定 第四节 生物大分子的浓缩、干燥及保存
第一节引言 ■蛋白质(酶)、核酸存在于一切生物体中, 是非常重要的生物大分子; ■蛋白质是生物功能的执行者,担负着生物催 化、物质运输、运动、防御、调控及记忆、 识别等多种生理功能; 核酸是遗传信息的携带者,在生物体中指导 各种蛋白质的合成
第一节 引言 ◼ 蛋白质（酶）、核酸存在于一切生物体中， 是非常重要的生物大分子； ◼ 蛋白质是生物功能的执行者，担负着生物催 化、物质运输、运动、防御、调控及记忆、 识别等多种生理功能； ◼ 核酸是遗传信息的携带者，在生物体中指导 各种蛋白质的合成
生物大分子的分离纯化的方法很多,主要是根据分子之间特异 性的差异,如分子大小、溶解度、电荷等建立起来的。 性质 方法 分子大小透析、超滤、差速离心、凝胶过滤 溶解度 等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀 电荷 电泳、离子交换层析 吸附性质吸附层析 对配体分子 的生物亲和力亲和层析
性质 方法 ❖分子大小 透析、超滤、差速离心、凝胶过滤 ❖溶解度 等电点沉淀、盐析、有机溶剂沉淀 ❖电荷 电泳、离子交换层析 ❖吸附性质 吸附层析 ❖对配体分子 的生物亲和力 亲和层析 生物大分子的分离纯化的方法很多，主要是根据分子之间特异 性的差异，如分子大小 、溶解度、电荷等建立起来的
分离纯化的意义 ①从生物材料中分离制备蛋白质、核酸,研究其 结构与功能,对于了解生命活动的规律,阐明 生命现象的本质有重大意义; ②工业生产的需要:食品、发酵、纺织、制革等 工业,需要大量的高活性的酶制剂; (如用流粉酶制造葡萄糖、麦芽糖、糊精以及糖浆等) ③医疗的需要:如用猪胰岛素治疗糖尿病 ④基因工程的需要
一、分离纯化的意义 ①从生物材料中分离制备蛋白质、核酸，研究其 结构与功能，对于了解生命活动的规律，阐明 生命现象的本质有重大意义； ②工业生产的需要：食品、发酵、纺织、制革等 工业，需要大量的高活性的酶制剂； （如用淀粉酶制造葡萄糖、麦芽糖、糊精以及糖浆等） ③医疗的需要：如用猪胰岛素治疗糖尿病； ④基因工程的需要
二、分离纯化的要求 1、纯度:主要取决于研究的目的和应用上的要求。如作 为研究其一级结构和空间结构的蛋白、一级结构与功 能的关系的蛋白质制剂、工具酶和标准蛋白、酶法分 析的酶制剂,都要求均一;工业、医药方面应用的酶 和蛋白质制剂,达到一定纯度即可,不要求均一。 2、活性:要求大分子保持天然构象状态,有高度的生物 活性 3、收率:希望收率越高越好,但在分离纯化过程中总有 不少损失,而且提纯步骤越多,损失越大
二、分离纯化的要求 1、纯度：主要取决于研究的目的和应用上的要求。如作 为研究其一级结构和空间结构的蛋白、一级结构与功 能的关系的蛋白质制剂、工具酶和标准蛋白、酶法分 析的酶制剂，都要求均一；工业、医药方面应用的酶 和蛋白质制剂，达到一定纯度即可，不要求均一。 2、活性：要求大分子保持天然构象状态，有高度的生物 活性。 3、收率：希望收率越高越好，但在分离纯化过程中总有 不少损失，而且提纯步骤越多，损失越大
、分离纯化的一般程序 生物大分子的分离纯化一般可分为以下几个阶段 ①材料的选择和预处理; ②破碎细胞及提取(有时还需要进行细胞器的分离) 分离纯化:包括粗分级分离和细分级分离。 其中前两个阶段为生物大分子分离纯化的前处理。 bac
三、分离纯化的一般程序 ▪ 生物大分子的分离纯化一般可分为以下几个阶段： ①材料的选择和预处理； ②破碎细胞及提取（有时还需要进行细胞器的分离）； ③分离纯化：包括粗分级分离和细分级分离。 ▪ 其中前两个阶段为生物大分子分离纯化的前处理
第二节蛋白质(酶)、核酸 分离纯化的前处理 材料的选择与预处理 ■选择材料主要根据实验目的而定。工业生产上注意选 择含量高、来源丰富、易获得、制备工艺简单、成本 低的动植物组织或微生物做原料。科研选材则无需考 虑上述问题,只要能达到实验目的即可。 ■实验材料选定后,常常需要进行预处理,如动物材料 需要除去一些与实验无关的结缔组织、脂肪组织;植 物种子需要除壳;微生物需要将菌体与发酵液分开 另外,必须尽可能保持材料的新鲜,尽快加工处理, 若不立即进行实验或加工,应冷冻保存
第二节 蛋白质（酶）、核酸 分离纯化的前处理 一、材料的选择与预处理 ◼ 选择材料主要根据实验目的而定。工业生产上注意选 择含量高、来源丰富、易获得、制备工艺简单、成本 低的动植物组织或微生物做原料。科研选材则无需考 虑上述问题，只要能达到实验目的即可。 ◼ 实验材料选定后，常常需要进行预处理，如动物材料 需要除去一些与实验无关的结缔组织、脂肪组织；植 物种子需要除壳；微生物需要将菌体与发酵液分开。 另外，必须尽可能保持材料的新鲜，尽快加工处理， 若不立即进行实验或加工，应冷冻保存