前言 随着植物种子学的发展和教学内容的不断丰富，植物种子学的实 验也在不断更新与提高，为适应我校的教学需要，根据现行教学大纲， 对实验内容进行修改和补充，即收录了一些植物种子学的经典实验， 又增加了一些当前植物种子学成熟的新办法，力求将基础与创新结合， 并减少与其它实验课程的重复。本实验教材共计个实验，内容覆 盖了当今植物种子学常用的方法和技术，它适用于农学院的本、专科 教学、并可做为研究生、老师和有关科研工作着的参考用书。 实验是由魏凌基、艾尼瓦尔、孔广超、杨新军老师编写，教研室 和其它教师对该书的编写给予了很多支持，在此我们一并表示谢意。 由于本书编写时间仓促，加之作者水平有限、书中的缺点和错误 再所难免，敬请广大读着批评指正，以使再版时做的更好。 编著者 2007年11月
前 言 随着植物种子学的发展和教学内容的不断丰富，植物种子学的实 验也在不断更新与提高，为适应我校的教学需要，根据现行教学大纲， 对实验内容进行修改和补充，即收录了一些植物种子学的经典实验， 又增加了一些当前植物种子学成熟的新办法，力求将基础与创新结合， 并减少与其它实验课程的重复。本实验教材共计 个实验，内容覆 盖了当今植物种子学常用的方法和技术，它适用于农学院的本、专科 教学、并可做为研究生、老师和有关科研工作着的参考用书。 实验是由魏凌基、艾尼瓦尔、孔广超、杨新军老师编写，教研室 和其它教师对该书的编写给予了很多支持，在此我们一并表示谢意。 由于本书编写时间仓促，加之作者水平有限、书中的缺点和错误 再所难免，敬请广大读着批评指正，以使再版时做的更好。 编著者 2007 年 11 月
目 录 实验一 主要植物种子的形态和构造 实验 种子平衡水分的测定 实验三 种子淀粉含量测定 实验四 直链淀粉含量的测定 实验五 脂肪含量测定 实验六、 蛋白质含量测定」 实验七、 种子引发的效应 实验八 种子散落性测定」 实验九、 扦样. 实验十 种子净度分析 实验十一 种子休眠特性鉴定 实验十二 种子发芽习性和幼苗主要构造观察。 实验十三种子发芽试验 实验十四种子生活力的四唑染色测定， 实验十五种子活力测定 实验十六棉花健籽率的检验 实验十七大、小麦及大豆品种纯度室内鉴定方法……… 实验十八小麦品种纯度田问检验 实验十五玉米品种纯度检验。 实验十七1STA小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺 凝胶电泳鉴定品种的标准程序 实验十八玉米种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 实验十九水稻和玉米种子聚丙烯酰胺凝胶同工酶电泳鉴定 实验二十一品种真实性的RAPD分子标记分析 实验二十种子水分测定
目 录 实验一 主要植物种子的形态和构造………………………………………………… 实验二 种子平衡水分的测定………………………………………………………… 实验三 种子淀粉含量测定…………………………………………………………… 实验四 直链淀粉含量的测定…………………………………. ……………………… 实验五 脂肪含量测定 ……………………………………….. ……………………… 实验六、 蛋白质含量测定……………………………………………………………… 实验七、 种子引发的效应……………………………………………………………… 实验八 种子散落性测定………………………………................ ……………………… 实验九、 扦 样…………………………………………………………………………… 实验十 种子净度分析…………………………………………………………………… 实验十一 种子休眠特性鉴定…………………………………………………………… 实验十二 种子发芽习性和幼苗主要构造观察………………….. ……………………… 实验十三 种子发芽试验………………………………………….. ……………………… 实验十四 种子生活力的四唑染色测定…………………………. ……………………… 实验十五 种子活力测定…………………………………………. ……………………… 实验十六 棉花健籽率的检验…………………………………………………………… 实验十七 大、小麦及大豆品种纯度室内鉴定方法……………. ……………………… 实验十八 小麦品种纯度田问检验……………………………………………………… 实验十五 玉米品种纯度检验……………………………………. ……………………… 实验十七 ISTA 小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺………….. ……………………… 凝胶电泳鉴定品种的标准程序 实验十八 玉米种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定……………………………… 实验十九 水稻和玉米种子聚丙烯酰胺凝胶同工酶电泳鉴定………………………… 实验二十一 品种真实性的 RAPD 分子标记分析…………….. ……………………… 实验二十 种子水分测定…………………………………………. ……………………
实验一主要植物种子的形态和构造 一、目的要求 1.认识主要农作物、蔬菜和牧草种子的外部形态特征及内部构造特点。 2.了解主要农作物、蔬菜和牧草种子主要果实和种子类型。 二、材料和器具 1.种子材料 (需准备干种子和吸胀种子)。 (1)农作物种子 水稻、小麦、大麦、玉米、大豆、棉花、油菜、黄麻、蓖麻、向日葵、甜菜等。 (2)蔬菜种子 甘蓝、洋葱、菜豆、番茄、黄瓜、西瓜、辣椒、芹菜、胡萝卜、菠菜等。 (3)牧草种子 黑麦草、早熟禾、羊茅、红三叶、紫首蓿等。 2.器具 手执放大镜、解剖镜、立体显微镜、解剖针、镊子、刀片、种子长宽度测量器和盘子或 数码摄像系统。 三、方法和步骤 1.果实和种子类型观察 观察以上作物的果实和种子类型，检索各作物在植物学上所属的科，并查明其果实的种 类和种子类型。农业种子在植物形态学上可分为五个类型：包括果实和外部附属物、果实、 包括种子和部分果实、种子、种子的主要部分。 2.种子外部形态观察 取主要作物的干种子，利用放大镜和立体显微镜，详细观察其外部形态，特别是各类种 子的主要特征，并绘简图，各部分用文字标明。如大麦种子应标明内外稃、腹沟、小基刺以 及浆片所在部位：大豆、菜豆、三叶草种子应标明种皮、种脐、脐条、内脐以及种孔所在部 位。 3.种子内部构造观察取吸胀软化的作物种子，用刀片将种子纵切（大豆、油菜、西瓜、 种子只需剥去种皮就可观察；蓖麻种子首先用镊子剥去坚硬的种皮，再进行纵剖)。 观察切面果皮、种皮的层次：胚乳是否存在：胚与胚乳的形状、位置和比例：种胚所分 化的各个部分。并绘简图标明各部分。 4.种子长度和宽度的测量各种作物种子随机取10粒种子，依其长度或宽度方向将种 子逐粒排列在种子长宽度测量尺上（排列的方向一致，如小麦籽粒腹沟朝下），测量种子的长 度和宽度。每种种子的测量重复四次，求其平均数，以毫米表示。 四、作业 (1)绘画主要种子外部形态和内部构造图，并注明各部分名称。 (2)写注明主要种子的构造类型，以及所属科
实验一 主要植物种子的形态和构造 一、目的要求 1.认识主要农作物、蔬菜和牧草种子的外部形态特征及内部构造特点。 2.了解主要农作物、蔬菜和牧草种子主要果实和种子类型。 二、材料和器具 1．种子材料 （需准备干种子和吸胀种子）。 (1)农作物种子 水稻、小麦、大麦、玉米、大豆、棉花、油菜、黄麻、蓖麻、向日葵、甜菜等 。 (2)蔬菜种子 甘蓝、洋葱、菜豆、番茄、黄瓜、西瓜、辣椒、芹菜、胡萝卜、菠菜等。 (3)牧草种子 黑麦草、早熟禾、羊茅、红三叶、紫苜蓿等。 2．器具 手执放大镜、解剖镜、立体显微镜、解剖针、镊子、刀片、种子长宽度测量器和盘子或 数码摄像系统。 三、方法和步骤 1．果实和种子类型观察 观察以上作物的果实和种子类型，检索各作物在植物学上所属的科，并查明其果实的种 类和种子类型。农业种子在植物形态学上可分为五个类型：包括果实和外部附属物、果实、 包括种子和部分果实、种子、种子的主要部分。 2．种子外部形态观察 取主要作物的干种子，利用放大镜和立体显微镜，详细观察其外部形态，特别是各类种 子的主要特征，并绘简图，各部分用文字标明。如大麦种子应标明内外稃、腹沟、小基刺以 及浆片所在部位；大豆、菜豆、三叶草种子应标明种皮、种脐、脐条、内脐以及种孔所在部 位。 3．种子内部构造观察 取吸胀软化的作物种子，用刀片将种子纵切(大豆、油菜、西瓜、 种子只需剥去种皮就可观察；蓖麻种子首先用镊子剥去坚硬的种皮，再进行纵剖)。 观察切面果皮、种皮的层次；胚乳是否存在；胚与胚乳的形状、位置和比例；种胚所分 化的各个部分。并绘简图标明各部分。 4．种子长度和宽度的测量 各种作物种子随机取 10 粒种子，依其长度或宽度方向将种 子逐粒排列在种子长宽度测量尺上(排列的方向一致，如小麦籽粒腹沟朝下)，测量种子的长 度和宽度。每种种子的测量重复四次，求其平均数，以毫米表示。 四、作业 (1)绘画主要种子外部形态和内部构造图，并注明各部分名称。 (2)写注明主要种子的构造类型，以及所属科
实验二种子平衡水分的测定 一、目的和要求 1.通过测定种子平衡水分，以了解各种作物种子在不同的相对湿度条件下和不同种类种子 在同一相对湿度条件下的种子平衡水分特性。 2通过测定平衡水分，可以求得某种种子的临界水分。 二、材料和用具 1.材料水稻、小麦、玉米、油菜和大豆等种子。 2.用具和药品恒温箱（室）、1000ml广口瓶、小型铁丝筐、量筒、硫酸、 氯化锂、醋酸钾、硫酸钾等。 三、方法和步骤 ()称取种子40g,装入小筐中，共9份。 (2)配制浓度为29.25%、26.25%、23.50%、20.25%、17.75%、11.75%的硫酸溶液和氯 化锂、醋酸钾、硫酸钾饱和溶液。 (3)在广口瓶内分别放置各种不同溶液250ml,以便调配不同相对湿度。 (4)把存有种子的小筐挂在瓶塞的钩上并密封，然后将瓶置于20℃的恒温箱（室）中定期观 察，1周后称重，以后每隔1周称重，直至恒重。表附-1为20℃时 不同溶液的相对湿度。 表附1为20℃时不同溶液的相对湿度 溶液 相对湿 饱和溶液：氯化锂(LiC1.H2O) 12.4 醋酸钾(KC2HO) 23.2 硫酸钾(K2S04) 97.2 硫酸溶液(%)：2925 35 26.25 47 23.50 20.25 68 17.75 76 11.75 88 (⑤)用105℃烘箱法测定种子水分，然后将种子水分和相对湿度划成坐标曲线图。 四、作业 画出各种种子的吸水平衡曲线，并求出临界水分（图1）
实验二 种子平衡水分的测定 一、目的和要求 1.通过测定种子平衡水分，以了解各种作物种子在不同的相对湿度条件下和不同种类种子 在同一相对湿度条件下的种子平衡水分特性。 2.通过测定平衡水分，可以求得某种种子的临界水分。 二、材料和用具 1．材料 水稻、小麦、玉米、油菜和大豆等种子。 2．用具和药品 恒温箱(室)、1000ml 广口瓶、小型铁丝筐、量筒、硫酸、 氯化锂、醋酸钾、硫酸钾等。 三、方法和步骤 (1) 称取种子 40g，装入小筐中，共 9 份。 (2) 配制浓度为 29.25％、26.25％、23.50％、20.25％、17.75％、11.75％的硫酸溶液和氯 化锂、醋酸钾、硫酸钾饱和溶液。 (3) 在广口瓶内分别放置各种不同溶液 250ml，以便调配不同相对湿度。 (4) 把存有种子的小筐挂在瓶塞的钩上并密封，然后将瓶置于 20℃的恒温箱(室)中定期观 察，1 周后称重，以后每隔 1 周称重，直至恒重。表附-1 为 20℃时 不同溶液的相对湿度。 表附-1 为 20℃时不同溶液的相对湿度 溶 液 相 对 湿 饱和溶液：氯化锂（LiCI.H2O） 醋酸钾 (KC2H3O) 硫酸钾 (K2SO4) 12.4 23.2 97.2 硫酸溶液（%）：29.25 26.25 23.50 20.25 17.75 11.75 35 47 57 68 76 88 (5) 用 105℃烘箱法测定种子水分，然后将种子水分和相对湿度划成坐标曲线图。 四、作业 画出各种种子的吸水平衡曲线，并求出临界水分(图 1)
15 。1000060为初相对度（行 图酸1种子的吸水平衡图 实验三种子淀粉含量测定 一、实验目的学习利用酶解法测定种子中淀粉含量的测定方法。 二、实验原理淀粉经淀粉酶充分水解后，转化为还原糖，利用费林试剂测定还原糖含量。 三、实验设备 古氏坩埚25ml:滴定管25ml:抽滤瓶500ml:真空泵或水泵：电炉；雏形瓶：100ml 250ml、500ml:移液管20ml:容量瓶100ml、250ml、500ml:回流冷凝管；漏斗6cm:烧瓶 150ml:研钵、温度计、显微镜等。 四、试剂和用品 (1)0.5%淀粉酶溶液或麦芽汁 取大麦粒加水湿润浸泡12h,在搪瓷盘内平铺约lcm厚，使其发芽数日。待幼芽长约lcm 时，取发芽粒50g,磨碎，加水400ml,在常温下浸渍3h,过滤备用（保存时加氯仿或甲苯数 滴，防止生霉) (2)碘溶液称碘化钾3.6g,溶于20ml水中，加碘1.3g,溶解后再加水至100ml。 (3)0.1mol/L高锰酸钾标准溶液。 (4)lmol/L氢氧化钠溶液。取氢氮化钠4g加水溶解至100ml。 (5)硫酸铁溶液取硫酸铁50g,加水200ml溶解后，慢慢加入硫酸100ml,冷后加水至 1000ml。 (6)3mol/L盐酸取盐酸25ml,加水到100ml (7)6mol/L盐酸取盐酸100ml,加水至200ml。 (⑧)20%氢氧化钠溶液。 (9)甲基红指示液0.1%甲基红乙醇溶液。 (10)费林氏溶液。 (1)碱性酒石酸铜甲液
实验三 种子淀粉含量测定 一、实验目的 学习利用酶解法测定种子中淀粉含量的测定方法。 二、实验原理 淀粉经淀粉酶充分水解后，转化为还原糖，利用费林试剂测定还原糖含量。 三、实验设备 古氏坩埚 25ml；滴定管 25ml；抽滤瓶 500 ml；真空泵或水泵；电炉；锥形瓶：l00ml、 250ml、500ml；移液管 20ml；容量瓶 l00ml、250ml、500ml；回流冷凝管；漏斗 6cm；烧瓶 150ml；研钵、温度计、显微镜等。 四、试剂和用品 (1) 0.5％淀粉酶溶液或麦芽汁 取大麦粒加水湿润浸泡 12h，在搪瓷盘内平铺约 lcm 厚，使其发芽数日。待幼芽长约 1cm 时，取发芽粒 50g，磨碎，加水 400ml，在常温下浸渍 3h，过滤备用(保存时加氯仿或甲苯数 滴，防止生霉)。 (2) 碘溶液 称碘化钾 3.6g，溶于 20ml 水中，加碘 1.3g，溶解后再加水至 l00ml。 (3) 0.1mol／L 高锰酸钾标准溶液。 (4) lmol／L 氢氧化钠溶液 。取氢氮化钠 4g 加水溶解至 l00ml。 (5) 硫酸铁溶液 取硫酸铁 50g，加水 200ml 溶解后，慢慢加入硫酸 l00ml，冷后加水至 1000ml。 (6) 3mol／L 盐酸 取盐酸 25ml，加水到 l00ml。 (7) 6mol／L 盐酸 取盐酸 l00ml，加水至 200ml。 (8) 20％氢氧化钠溶液。 (9) 甲基红指示液 0.1％甲基红乙醇溶液。 (10) 费林氏溶液。 (11) 碱性酒石酸铜甲液
取硫酸铜结晶34.69g,加适量水溶解，加硫酸0.5ml,再加水至500ml,用精制石棉过滤。 (12)碱性酒石酸铜乙液 取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g,加适量水溶解，稀释至500ml,用精制石棉过滤 贮存于具有橡皮塞的玻瓶内。使用时甲液和乙液等体积混合。 (13)精制石棉 先用3m0l/L盐豫将石棉浔泡2一3d后，用水洗净。再加10%氢氧化钠落液浔泡2一3d, 倾去溶液，用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。再以3mol/L盐酸浸泡数小时， 用水洗至不呈酸性，使之成为微细的软纤维，用水浸泡贮存于玻璃瓶内，作填充古氏坩埚用。 五、实验步骤 ()还原糖标准曲线制作取7支试管，依次在试管中分别加入0.1%葡萄糖标准液0,1， 2,3,4,5,6ml,并分别加蒸馏水补足到6ml,再分别加入4ml斐林试剂，混合后加盖（塞）， 于沸水中水浴15min,取出于流水中冷却，再经1500r/min离心5mim,取上清液在590nm 下比色，以蒸留水调零，以光密度值为纵坐标，葡萄糖相对含量为横坐标。绘制标准曲线或 建立回归方程。 (2)样品还原糖提取称试样2~5g,置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用乙醚50ml分5 次洗除脂肪，再用85%乙醇洗去可溶性糖类，将残留物移人250ml烧杯内：用水约50ml分 几次将滤纸上残渣洗人烧杯中，放到沸水浴中加热15mi,使淀粉糊化，冷却至60℃，加淀 粉酶溶液（或麦芽汁）20m,维持55~60℃水解1h,经常搅拌。然后取加碘液1滴，如显蓝色， 再加热潮化，并加淀粉尊溶液（或麦芽汁）20，水解至碘液不呈蓝色为止。加热至沸腾，冷 后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀。过滤液，弃去初滤液，取50ml注入100ml 容量瓶中，加6mol/L盐酸5ml,在68~70℃水浴中加热15min,冷后加甲基红指示液2滴， 用20%氢氧化钠溶液中和，加水至刻度，混匀，用以测定还原糖。同时取水50ml和同量的 淀粉酶溶液（或麦芽汁）作试剂空白试验。 (3)样品测定取6ml提取液按标准曲线制作的方式测定光密度值。 六、结果计算 淀粉干基含量按下列公式计算： V×稀释倍数X0.9(A-B) 淀粉（干基%）= W×(100-M0 式中： A一一转化后测得的还原糖（以葡萄糖计）重量(mg): B一一试剂空白相当于还原糖（以葡萄糖计）重量(mg): 一提取液体积(ml): 一一试样重量(g: M一一试样水分百分率(%)： 0.9一一还原糖（以葡萄糖计）换算为淀粉的因数
取硫酸铜结晶 34.69g，加适量水溶解，加硫酸 0.5ml，再加水至 500 ml，用精制石棉过滤。 (12) 碱性酒石酸铜乙液 取酒石酸钾钠 173g 与氢氧化钠 50g，加适量水溶解，稀释至 500ml，用精制石棉过滤， 贮存于具有橡皮塞的玻瓶内。使用时甲液和乙液等体积混合。 (13) 精制石棉 先用 3mol／L 盐酸将石棉浸泡 2～3d 后，用水洗净。再加 10％氢氧化钠溶液浸泡 2～3d， 倾去溶液，用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。再以 3mol／L 盐酸浸泡数小时， 用水洗至不呈酸性，使之成为微细的软纤维，用水浸泡贮存于玻璃瓶内，作填充古氏坩埚用。 五、实验步骤 (1) 还原糖标准曲线制作 取 7 支试管，依次在试管中分别加入 0.1％葡萄糖标准液 0，1， 2，3，4，5，6ml，并分别加蒸馏水补足到 6ml，再分别加入 4ml 斐林试剂，混合后加盖(塞)， 于沸水中水浴 15min，取出于流水中冷却，再经 1500r／min 离心 5mim，取上清液在 590nm 下比色，以蒸留水调零，以光密度值为纵坐标，葡萄糖相对含量为横坐标。绘制标准曲线或 建立回归方程。 (2) 样品还原糖提取 称试样 2～5g，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用乙醚 50m1 分 5 次洗除脂肪，再用 85％乙醇洗去可溶性糖类，将残留物移人 250ml 烧杯内；用水约 50m1 分 几次将滤纸上残渣洗人烧杯中，放到沸水浴中加热 15min，使淀粉糊化，冷却至 60℃，加淀 粉酶溶液(或麦芽汁)20m!，维持 55～60℃水解 1h，经常搅拌。然后取加碘液 1 滴，如显蓝色， 再加热糊化，并加淀粉酶溶液(或麦芽汁)20ml，水解至碘液不呈蓝色为止。加热至沸腾，冷 后移入 250ml 容量瓶中，并加水至刻度，混匀。过滤液，弃去初滤液，取 50ml 注入 l00ml 容量瓶中，加 6mol／L 盐酸 5ml，在 68～70℃水浴中加热 15min，冷后加甲基红指示液 2 滴， 用 20％氢氧化钠溶液中和，加水至刻度，混匀，用以测定还原糖。同时取水 50ml 和同量的 淀粉酶溶液(或麦芽汁)作试剂空白试验。 (3) 样品测定 取 6ml 提取液按标准曲线制作的方式测定光密度值。 六、结果计算 淀粉干基含量按下列公式计算： V×稀释倍数×0.9(A- B) 淀粉（干基%）= ---------------------------------- W×(100- M) 式中： A——转化后测得的还原糖(以葡萄糖计)重量(mg)； B——试剂空白相当于还原糖(以葡萄糖计)重量(mg)； V——提取液体积(m1)； W——试样重量(g)； M——试样水分百分率(％)； 0.9——还原糖(以葡萄糖计)换算为淀粉的因数
双实验结果允许差不超过平均值的1%，取平均值作为测定结果。测定结果取小数点后第 “位。 实验四直链淀粉含量的测定 1·实验目的学习利用碘法测定淀粉中直链淀粉含量的方法。 2,实验原理淀粉与碘形成碘一淀粉配合物，并且有特殊的颜色反应。支链淀粉 与碘生成综红色配合物，直链淀粉碘生成深蓝色配合物。在淀粉总量不变的条件下，将 这两种淀粉分散液按不同比例混合，在一定条件下与碘作用，生成由红至深蓝一系列颜 色，代表其不同的直链淀粉与支链淀粉比例。根据在620m处的吸光度与直链淀粉含量 呈线性关系，可用分光光度计测定。 3.实验设备 (1)粉碎机 (2)分光光度计21型分光光度计或具有相同性能的其它型号 (3)分析天平感量0.0001g (④)玻璃仪器50ml具塞刻度试管：100ml容量瓶。 4.试剂 ()氢氧化钠 lmol/L,0.09mol/L(0Hr),用邻苯甲酸氢钾法标定。 (2)乙酸 lmol/L(H,准确标定。 (3)碘贮备溶液及碘试剂 称2g碘和20g碘化钾用水溶解并稀释至100ml,即为碘贮备液。取10ml碘贮备液稀释 至100ml,即为碘试剂。 (4)马铃薯直链淀粉标准溶液 lmg/ml,取烘千(55~56℃真空干燥)的马铃薯直链淀粉纯品，称取质量相当于含0.1000g 淀粉，放入100ml容量瓶中，加入lml无水乙醇湿润样品，加9 mllmol/I。氢氧化钠溶液， 于沸水浴分散l0min,迅速冷却后，用水定容。 (⑤)支链淀粉标准溶液 mg/ml,选择与待测谷物样品相应的蜡质谷物标准品，称取质量相当于含0.1000g粗 淀粉，放人100ml容量瓶中，加lml无水乙醇，再加9 mllmol/L氢氧化钠溶液。于沸水浴加 热10min,迅速冷却后，用水定容。 (6)石油醚(HG3-1003-76)沸程60~90℃。 5,实验步骤 ()样品制备 将样品挑选干净（谷子脱壳，稻米制成国家标一精米），按四分法缩分，取样20g。用粉碎
双实验结果允许差不超过平均值的 1％，取平均值作为测定结果。测定结果取小数点后第 一位。 实验四 直链淀粉含量的测定 １．实验目的 学习利用碘法测定淀粉中直链淀粉含量的方法。 ２．实验原理 淀粉与碘形成碘一淀粉配合物，并且有特殊的颜色反应。支链淀粉 与碘生成综红色配合物，直链淀粉碘生成深蓝色配合物。在淀粉总量不变的条件下，将 这两种淀粉分散液按不同比例混合，在一定条件下与碘作用，生成由红至深蓝一系列颜 色，代表其不同的直链淀粉与支链淀粉比例。根据在 620nm 处的吸光度与直链淀粉含量 呈线性关系，可用分光光度计测定。 ３．实验设备 (1) 粉碎机 (2) 分光光度计 721 型分光光度计或具有相同性能的其它型号， (3) 分析天平 感量 0.0001g (4) 玻璃仪器 50ml 具塞刻度试管；100ml 容量瓶。 ４．试剂 (1) 氢氧化钠 lmol／L，0.09mol／L(0H- )，用邻苯甲酸氢钾法标定。 (2) 乙酸 lmol／L(H+ )，准确标定。 (3) 碘贮备溶液及碘试剂 称 2g 碘和 20g 碘化钾用水溶解并稀释至 100ml，即为碘贮备液。取 10ml 碘贮备液稀释 至 100ml，即为碘试剂。 (4) 马铃薯直链淀粉标准溶液 lmg／ml，取烘干(55～56℃真空干燥)的马铃薯直链淀粉纯品，称取质量相当于含 0.1000g 淀粉，放入 100ml 容量瓶中，加入 lml 无水乙醇湿润样品，加 9mllmol／I。氢氧化钠溶液， 于沸水浴分散 10min，迅速冷却后，用水定容。 (5) 支链淀粉标准溶液 lmg／ml，选择与待测谷物样品相应的蜡质谷物标准品，称取质量相当于含 0．1000g 粗 淀粉，放人 100ml 容量瓶中，加 lml 无水乙醇，再加 9mllmol／L 氢氧化钠溶液。于沸水浴加 热 10min，迅速冷却后，用水定容。 (6) 石油醚(HG3-1003-76) 沸程 60～90℃。 ５．实验步骤 (1) 样品制备 将样品挑选干净(谷子脱壳，稻米制成国家标一精米)，按四分法缩分，取样 20g。用粉碎
机将样品粉碎，全部通过0.177mm(80号)筛，混匀装入磨口瓶备用。 (2)标准曲线制作取6个100ml容量瓶，分别加入lg/ml马铃薯直链淀粉标准溶液0、 0.25、0.50、1.00、1.50、2.00ml,再依次加入lmg/m1支链淀粉标准溶液5.00、4.75、4.50 4.00、3.50、3.00ml,总量为5ml。另取一个100ml容量瓶，加入0.09mol/L氢氧化钠溶液 5ml作空白。然后各瓶中依次加入约50ml水，Iml Imol/L醋酸及lml碘试剂。用水定容后显 色10min,在620nm处读取吸光度。以直链淀粉毫克数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校 准曲线或建立回归方程。 (3)样品测定 ①按GB5006-85《谷物籽粒粗淀粉测定法》和GB2523一83《谷类、油料作物种子水分 测定法》，测定样品的粗淀粉含量和水分。 ②样品分散。称取相当于0.1000g粗淀粉的样品（如按样品干重计算直链淀粉时，称取样 品100mg)于100mi容量瓶中，加lml无水乙醇，充分湿润样品，再加入9ml1mol/L氢氧化 钠溶液，于沸水浴中分散10rain,迅速冷却，用水定容。 ③脱脂。取20ml分散液于50ml具塞度试管中，加人7~10ml石油醚，间歇摇动（或放 旋混器上)10min,静止l5min,分层后用连接在水泵上的吸管抽吸，吸去上部石油醚层。重 复以上操作2~3次（精米脱脂2次，玉米、谷子、高粱须脱脂3次） ④测定。吸取脱脂后的碱分散液5.00ml于100ml容量瓶中，加水50ral,再加入lmol/L 醋酸溶液lml及碘试剂1ml,用水定容。显色10min后，在620nm处读取吸光度。 6.结果计算 C×100 直链淀粉（占淀粉总量)= ×100% (1) m1×5 直链淀粉（占样品干重）= X100% (2) m×5(1-H) 式中： C一从相应的混合校准曲线或回归方程求出的直链淀粉质量(mg): m1--称取样品中所含粗淀粉的质量(100mg): m2.-称取样品的质量(100mg): H--水分含量。 两个平行测定的结果，用算术平均值表示。保留小数点后两位。两个平行测定值的相对 相差不得超过2%。 实验五 脂肪含量测定
机将样品粉碎，全部通过 0．177mm(80 号)筛，混匀装入磨口瓶备用。 (2) 标准曲线制作 取 6 个 100rnl容量瓶，分别加入 lmg／ml马铃薯直链淀粉标准溶液 0、 0.25、0.50、1.00、1.50、2.00ml，再依次加入 lmg／m1 支链淀粉标准溶液 5.00、4.75、4.50、 4.00、3.50、3.00ml，总量为 5ml。另取一个 100ml 容量瓶，加入 0.09mol／L 氢氧化钠溶液 5ml 作空白。然后各瓶中依次加入约 50ml 水，lml lmol／L 醋酸及 lml 碘试剂。用水定容后显 色 10min，在 620nm 处读取吸光度。以直链淀粉毫克数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校 准曲线或建立回归方程。 (3) 样品测定 ① 按 GB5006-85《谷物籽粒粗淀粉测定法》和 GB2523—83《谷类、油料作物种子水分 测定法》，测定样品的粗淀粉含量和水分。 ② 样品分散。称取相当于 0.1000g 粗淀粉的样品(如按样品干重计算直链淀粉时，称取样 品 100mg)于 100mi 容量瓶中，加 lml 无水乙醇，充分湿润样品，再加入 9ml lmol／L 氢氧化 钠溶液，于沸水浴中分散 10rain，迅速冷却，用水定容。 ③ 脱脂。取 20m1 分散液于 50ml 具塞度试管中，加人 7～10ml 石油醚，间歇摇动(或放 旋混器上)10min，静止 15min，分层后用连接在水泵上的吸管抽吸，吸去上部石油醚层。重 复以上操作 2～3 次(精米脱脂 2 次，玉米、谷子、高粱须脱脂 3 次) ④ 测定。吸取脱脂后的碱分散液 5.00ml 于 l00ml 容量瓶中，加水 50ral，再加入 lmol／L 醋酸溶液 lml 及碘试剂 lml，用水定容。显色 l0min 后，在 620nm 处读取吸光度。 ６．结果计算 C×100 直链淀粉（占淀粉总量）= ------------- ×100% （1） m1×5 直链淀粉（占样品干重）= ------------------------×100% （2） m2×5 （1- H） 式中： C------从相应的混合校准曲线或回归方程求出的直链淀粉质量(mg)； m1-----称取样品中所含粗淀粉的质量(100mg)； m2------称取样品的质量(100mg)； H------水分含量。 两个平行测定的结果，用算术平均值表示。保留小数点后两位.。两个平行测定值的相对 相差不得超过 2％。 实验五 脂肪含量测定
1·实验目的学习利用索氏抽提法和直滴式抽提法测定种子的粗脂肪含量，并比较两 种方法的差异性。 2,实验原理植物体内的脂肪在高温条件下转化为液体，利用乙醚有机溶剂将液体脂 肪洗涤出来，然后测定脂肪含量。 3,实验设备感量0.0001g:电热恒温箱：电热恒温水浴锅：粉碎机、研钵：滤纸简： 备有变色硅胶的干燥器：广口瓶、脱脂线、脱脂棉、脱脂细砂。索氏抽提器一套（各部件必须 洗净，用105℃温度烘干，其中抽提瓶烘至恒重)：直滴式抽提器。 4,试剂无水乙醚（分析纯）。 5.实验步骤 (1)样品制备 禾谷类粮食和豆类（花生除外）分取除去杂质的净试样30~50g,磨碎通过直径1.0mm圆 孔筛装入广口瓶内备用。 小粒油料如芝麻、油菜籽、亚麻籽等分取除去杂质的净试样20g,装入广口瓶内备用。 大粒油料如花生果、蓖麻籽、葵花籽、茶籽等分取30~50g样品，除杂后，逐粒剥壳， 仁、壳分别称重，计算出仁总量百分率。然后将仁剪碎或切片，装人广口瓶内备用。 (2)脂肪提抽 ①索氏抽取法。 试样包扎：从备用的样品中，用烘盒称取2~5g试样，在105℃温度下烘30min,趁热倒 入研钵中，加入约2g脱脂细砂一同研磨。将试样和细砂研出油状后，干净地转入滤纸筒内（筒 底塞一层脱脂棉，并在105℃温度下烘30min),用脱脂棉蘸少量乙醚揩净研钵上的试样和脂 肪，并入滤纸筒内，最后再用脱脂棉塞人上部，压住试样。 抽提与烘干：将抽提器安装妥当，然后将装有试样的滤纸筒置于抽提筒内，同时注入乙 醚至虹吸管高度以上待乙醚流净后，再加入乙醚至虹吸管高度23处。用一小块脱脂棉轻轻 地塞入冷凝管上口，打开冷凝管进水器，开始加热抽提。加热的温度以每分钟回流的乙醚在 120~150滴，每小时回流7次以上。抽提的时间须视试样含油量而定，一般在8h以上，抽 提至抽提管内的乙醚用玻璃片检查（点滴实验）无油迹为止。 抽净脂肪后，用长柄镊子取出滤纸箱，再加热使乙醚回流2次，然后收回乙醚，取下冷 凝管和抽提筒，加热除尽抽提瓶中残余的乙醚，用脱脂棉蘸乙醚揩净抽提瓶外部，然后将抽 提瓶在105℃温度下先烘90min,再烘20mim,烘至恒重为止（前后两次重量差在0.0002g以内 即视为恒重)。抽提瓶增加的重量即为粗脂肪的重量。 ②直滴式提取法。操作方法基本同上，使用时，将试样包投入抽提管中，用乙醚抽提脂 肪，脂肪抽净后，取出试样包，关上回流的玻璃活塞，继续加热即可收回乙醚。 6.结果计算 粗脂肪湿基含量、干基含量和标准水杂下含量分别按公式1)、(2)和(3)计算： 粗脂肪（湿基）= -×100% (1)
１．实验目的 学习利用索氏抽提法和直滴式抽提法测定种子的粗脂肪含量，并比较两 种方法的差异性。 ２．实验原理 植物体内的脂肪在高温条件下转化为液体，利用乙醚有机溶剂将液体脂 肪洗涤出来，然后测定脂肪含量。 ３．实验设备 感量 0.0001g；电热恒温箱；电热恒温水浴锅；粉碎机、研钵；滤纸筒； 备有变色硅胶的干燥器；广口瓶、脱脂线、脱脂棉、脱脂细砂。索氏抽提器一套(各部件必须 洗净，用 105℃温度烘干，其中抽提瓶烘至恒重)；直滴式抽提器。 ４．试剂 无水乙醚(分析纯)。 ５．实验步骤 (1) 样品制备 禾谷类粮食和豆类(花生除外)分取除去杂质的净试样 30～50g，磨碎通过直径 1.0mm 圆 孔筛装入广口瓶内备用。 小粒油料如芝麻、油菜籽、亚麻籽等分取除去杂质的净试样 20g，装入广口瓶内备用。 大粒油料如花生果、蓖麻籽、葵花籽、茶籽等分取 30～50g 样品，除杂后，逐粒剥壳， 仁、壳分别称重，计算出仁总量百分率。然后将仁剪碎或切片，装人广口瓶内备用。 (2)脂肪提抽 ①索氏抽取法。 试样包扎：从备用的样品中，用烘盒称取 2～5g 试样，在 105℃温度下烘 30min，趁热倒 入研钵中，加入约 2g 脱脂细砂一同研磨。将试样和细砂研出油状后，干净地转入滤纸筒内(筒 底塞一层脱脂棉，并在 105℃温度下烘 30min)，用脱脂棉蘸少量乙醚揩净研钵上的试样和脂 肪，并入滤纸筒内，最后再用脱脂棉塞人上部，压住试样。 抽提与烘干：将抽提器安装妥当，然后将装有试样的滤纸筒置于抽提筒内，同时注入乙 醚至虹吸管高度以上.待乙醚流净后，再加入乙醚至虹吸管高度 2/3 处。用一小块脱脂棉轻轻 地塞入冷凝管上口，打开冷凝管进水器，开始加热抽提。加热的温度以每分钟回流的乙醚在 120～150 滴，每小时回流 7 次以上。抽提的时间须视试样含油量而定，一般在 8h 以上，抽 提至抽提管内的乙醚用玻璃片检查(点滴实验)无油迹为止。 抽净脂肪后，用长柄镊子取出滤纸箱，再加热使乙醚回流 2 次，然后收回乙醚，取下冷 凝管和抽提筒，加热除尽抽提瓶中残余的乙醚，用脱脂棉蘸乙醚揩净抽提瓶外部，然后将抽 提瓶在 105℃温度下先烘 90min，再烘 20min，烘至恒重为止(前后两次重量差在 0.0002g 以内 即视为恒重)。抽提瓶增加的重量即为粗脂肪的重量。 ②直滴式提取法。操作方法基本同上，使用时，将试样包投入抽提管中，用乙醚抽提脂 肪，脂肪抽净后，取出试样包，关上回流的玻璃活塞，继续加热即可收回乙醚。 ６．结果计算 粗脂肪湿基含量、干基含量和标准水杂下含量分别按公式(1)、(2)和(3)计算： W1 粗脂肪（湿基）= ——— ×100% （1）
免 粗脂肪（干基）= -×100% (2) W(100-MD W1(100-M标) 粗脂肪（标准水杂下）= -×100% (3) (100-M) 式中： W1--粗脂肪重量(g): W--式样重量(g: M- 一式样水分百分率(%)： M-式样标准水分、标准杂质之和(%)。 双实验结果允许差；粮食、油料不超过0.4%，大豆不超过0.2%，求其平均数，既为测 定结果。测定结果取小数点后第一位。 如测定带壳油料粗脂肪含量，则必须分别公式(4)和公式(5)进行换算。 NX A 带壳油料粗脂肪（湿基%）=· 100 NXA 带壳油料粗脂肪（干基%）= 100.M 式中：N一一带壳油料子仁粗脂肪湿基含量百分率(%)： A一一带壳油料出仁总量百分率(%)： M一一带壳油料水分百分率(%)。 实验六、蛋白质含量测定 一.实验目的学习利用微量凯氏定氮法测定种子中蛋白质含量的方法。 二.实验原理在强酸和高温作用下，植物样品中的含氮化合物被消化为氨气，氨气经
W W1 粗脂肪（干基）= ——————×100% （2） W（100- M） W1（100- M 标） 粗脂肪（标准水杂下）= ——————— ×100% （3） （100- M） 式中： W1--------粗脂肪重量（g）； W---------式样重量（g）； M---------式样水分百分率（%）； M 标--------式样标准水分、标准杂质之和（%）。 双实验结果允许差；粮食、油料不超过 0.4%，大豆不超过 0.2%，求其平均数，既为测 定结果。测定结果取小数点后第一位。 如测定带壳油料粗脂肪含量，则必须分别公式（4）和公式（5）进行换算。 N × A 带壳油料粗脂肪（湿基%）= ——— 100 N × A 带壳油料粗脂肪（干基%）= ————— 100 - M 式中： N——带壳油料子仁粗脂肪湿基含量百分率(％)； A——带壳油料出仁总量百分率(％)； M——带壳油料水分百分率(％)。 实验六、 蛋白质含量测定 一．实验目的 学习利用微量凯氏定氮法测定种子中蛋白质含量的方法。 二．实验原理 在强酸和高温作用下，植物样品中的含氮化合物被消化为氨气，氨气经