1.质粒DNA的小量快速制备 2.质粒DNA的限制性内切酶酶切 3.DA的琼脂糖凝胶电泳

1.鉴定。鉴定所培养的单菌落中是否含有重组质粒,或仅含有自身环化的质粒。如 前所述,前者电泳后会出现大小不等的两条DNA条带,一条为线性质粒载体的DNA,另 条为插入的目的基因;后者仅有一条载体的DNA条带。比如 DDPCR、 RACEPCR、细 胞库筛选、基因重组,等

上海中医药大学：《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教学资源（PPT实验课件）酶切电泳回收（酶切重组质粒电泳分离所插入的DNA）

实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化 实验二 碱变性法提取质粒 DNA 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 实验五 DNA 的回收与连接 实验六 基因的 PCR 扩增 实验七 用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因 实验八 基因组合生物合成新化合物 实验九 药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价 实验十 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备 实验十一 固定化细胞法生产 L-天冬氨酸和 L-丙氨 实验十二 重组水蛭素Ⅲ的制备 实验十三 酸醇提取法制备猪胰岛素 实验十四 多肽缩宫素的 Fmoc 固相合成 实验十五 酵母 RNA 的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析 实验十六 单核苷酸衍生物制备 实验十七 胰弹性蛋白酶的制备及活力测定 实验十八 超氧化物歧化酶的分离纯化 实验十九 重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析

第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 第二节 第二章分光光度技术 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 实验五BCA 法测定蛋白质浓度 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术 第一节生物材料的选取与预处理 第二节生物大分子的沉淀分离技术 第三节生物大分子离心分离技术 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 实验九酪蛋白的制备 实验十动物肝脏中提取DNA 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提 第四章电泳技术 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 第五章层析技术 第一节 层析技术概述 吸附层析 第三节 分配层析 第四节 离子交换层析 第五节 凝胶层析 第六节亲和层析 第七节 高效液相层析 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶 实验十二离子交换层析分离氨基酸 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法 第六章 分子生物学基本技术 核酸分子杂交 聚合酶链反应 第三节分子克隆 实验二十二Southern杂交分析 实验二十三 Northern 杂交分析 实验二十四 PCR 基因扩增 验二十五质粒DNA的提取及酶切 实验二十六 DNA重组实验 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 附录一常用缓冲液的配制方法 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂 附录三一般化学试剂的分级 附录四 English words in the lab

上海中医药大学：《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教学资源（PPT实验课件）重组质粒

复旦大学：《分子生物学理论与实验》教学课件_实验二 重组质粒的提取及鉴定

1.放大某一基因片段,用于探针、基因功能检测、报道基因研究等。方法是:把某 DNA片段插入到相应的载体(比如质粒、噬菌体、哺乳类细胞表达载体等),给予扩 增,用以标记探针、测序、cDNA库建立、基因功能检测等多种分子生物学实验

1.重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后,通常会发生质粒的重组失 败,包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选,把重组成功的质粒找出来。在目前常用的 质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因,一旦重组成功,质粒环化(包括自身环 化),抗生素抗性基因表达,被转化的大肠杆菌便具备抗相应抗生素的能力,可以含该抗生 素的培养基中生长传代,不然,重组失败,大肠杆菌便不能抵抗该抗生素而死亡

利用插入突变的方式获得了一株衣藻不运动突变体ift81,该突变体表现出鞭毛缺失或者短鞭毛的性状.基因序列分析表明,外源基因aphⅧ插入了突变体中IFT81(intraflagellar transport,IFT)基因的第五个外显子内,并导致该外显子原有的52个碱基对被替换.把含有完整IFT81基因的重组质粒导入突变体ift81后,其鞭毛恢复为野生型且可以检测到IFT81-HA融合蛋白的表达,这证明突变体的鞭毛缺陷确实是由于IFT81基因突变所导致.电镜观察显示突变体中鞭毛的显微结构发生改变,免疫荧光实验证实IFT81蛋白主要定位于基体和鞭毛部位.上述结果表明:IFT81蛋白缺失会导致衣藻鞭毛组装缺陷,在鞭毛组装所需蛋白的运输过程中,IFT81蛋白是必不可少的