最广泛使用的不连续缓冲系统最早是由 Ornstein(1964) 和 Davis(1964) 设计的, 样品和 浓缩胶 中含 Tris-HCl(pH 6.8), 上下槽缓冲 液含 Tris- 甘氨酸(pH 8.3), 分离胶中含 Tris-HCl(pH 8.8)。系统中所有组分都含有 0.1% 的 SDS(Laemmli, 1970)。样品和浓缩胶中的 氯离子形成移动界面的先导边界而甘氨酸分子则组成尾随边界，在移动界面的两边界之间是 一电导较低而电位滴度较陡的区域, 它推动样品中的蛋白质前移并在分离胶前沿积聚

第一章 蛋白质（酶）、核酸的分离纯化 第一节 引言 一、分离纯化的意义 二、分离纯化的要求 三、分离纯化的一般程序 第二节 蛋白质（酶）、核酸分离纯化的前处理 一、材料的选择与预处理 二、细胞的破碎 三、细胞器的分离 四、提取 第三节 分离纯化 一、 粗提纯 二、 精提纯 三、 纯度鉴定 第四节 生物大分子的浓缩、干燥及保存 第二章 离心技术 ▪ 离心技术概论 ▪ 一般制备离心 ▪ 超离心技术 第三章 层析技术 引言 层析法的基本原理 层析法的分类 第一节 吸附层析技术 第二节 分配层析技术 第三节 凝胶过滤层析技术 第四节 离子交换层析法 第五节 亲和层析法 第六节 高压液相层析（HPLC） 第四章 电泳技术 引言 第一节 电泳的基本原理 第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 第三节 琼脂糖凝胶电泳 第四节 免疫电泳 一、概述 二、聚丙烯酰胺凝胶的制备 三、凝胶浓度和交联度与孔径大小的关系 四、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳

第一节 预处理（细胞破碎方法及其原理） 第二节 酶的提取 第三节 酶的分离纯化（沉淀分离） 第四节 酶的分离纯化（离心分离） 第三节 酶的分离纯化（过滤与膜分离）

第三节 酶的分离纯化（第六节 层析分离） 第七节 酶的分离纯化（电泳分离） 第八节萃取分离

实验室一些常用知识介绍 3 实验一：离子交换法分离氨基酸 7 实验二：垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 9 实验三：马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验13 实验四：碱性蛋白酶活力的测定 16 实验五: 植物组织中 DNA 和 RNA 的提取和鉴定 19 实验六：糖酵解中间产物的鉴定22 实验七：综合设计实验—蛋白质的制备及其含量测定24 实验八：还原糖和总糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） 35 实验九：发酵过程中无机磷的利用37 实验十：氨基酸的分离鉴定—纸层析法39 实验十一：细菌血栓溶解酶活性测定41 实验十二：可溶性糖的硅胶 G 薄层层析43 实验十三：植物材料中总黄酮的提纯与鉴定44 实验十四 ： IEF/SDS-PAGE双向电泳分离鉴定蛋白质

一 重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 二 常用的分离方法 三 基因重组蛋白包涵体的分离和复性 四 重组蛋白质的鉴定

核酸的结构与功能-核酸的化学组成 核酸的结构与功能 The Structure and Function of Nucleic Acic 1868年,瑞士的内科医生 Friedrich Miescher从外科医院包扎伤口的绷带上的脓 细胞核中提取到一种富含磷元素的酸性化合物,将其称为核质(nuclein);后来 他又从鲭鱼精子中分离出类似的物质,并指出它是由一种碱性蛋白质与一种酸 性物质组成的,此酸性物质即是现在所知的核酸(nucleic acid)1944年 Oswalo Avery, Colin Macleod和 Maclyn McCarty发现,一种有夹膜

一、选择题(选择一个确切的答案) 1、高效液相色谱分离效果好的一个主要原因是( ): A、压力高 B、吸附剂的颗粒小 C、流速快 D、有自动记录 2、蛋白质等高分子化合物在水中形成( ): A、真溶液 B、胶体溶液 C、悬浊液 D、乳状液

离子交换色谱 (Ion Exchange Chromatography) 是利用离子交换原理和液相色谱技术 的结合来测定溶液种阳离子和阴离子的一 种分离分析方法． 凡是在溶液中能够电离的物质，通常 都可以用离子交换色谱法进行分离 无机离子，有机物（氨基酸＼核酸＼蛋白质）等

22.1 色谱的基本概念 22.2 色谱分离方法的分类 22.3 各类色谱技术及应用 凝胶过滤色谱 离子交换色谱 疏水色谱 聚焦色谱 反相色谱 超临界流体色谱 羟基磷灰石色谱 灌注色谱 应用 22.4 蛋白质分离常用的色谱方法 22.5 色谱系统