第二部分生物化学基本实验 这部分内容为配合生物化学基本技术和技能训练，验证理论教学所设计的基本实验：内容 安排上以生物化学的理论系统为顺序，每个实验包括基本原理、 试剂、主要器材、操作步骤、结果、计算及正常值等，使学生能在实验前对实验有概括性的了解。 试剂部分介绍实验中所需用的全部试剂及配制保管方法，水溶液仅注明浓度，非水溶液均有注解。 在配制方法中所列出的量仅表示在配制过程中的数量关系，而非实验的实际需要量，实际的需要 量需按参加实验的人数，并考虑一定的耗损比例，按配制方法另行计算。器材部分仅列出需在实 验室配备和临时分发的主要器材设备，常用的仪器已在仪器单中列出，器材项内不再包括。操作 部分介绍进行实验的过程，计算方法。注意事项中所讨论的内容应在实验过程中随时注意，使实 验能顺利进行。 实验1铜的比色测定 原理」 氢氧化铵作为显色剂与Cu2*结合成深蓝色的铜氨络离子CuNH)HP,其颜色的深浅与Cu2+ 浓度呈正比关系，与同样处理的标准液进行比色，可求得待测液中C*的含量。 试剂 1.氢氧化铵溶液（氨水溶液）：2mo/L 2.标准Cu2*溶液(100mg%):称取3.927g化学纯CuS045H0置于100ml容量瓶中，加40ml 水溶解，再加入5ml浓HSO:防止铜盐水解，最后加水至刻度并充分混匀。 [主要器材 1.试管及试管架 2.刻度吸量管 3.721型分光光度计 [操作步骤剽
第二部分 生物化学基本实验 这部分内容为配合生物化学基本技术和技能训练，验证理论教学所设计的基本实验；内容 安排上以生物化学的理论系统为顺序，每个实验包括基本原理、 试剂、主要器材、操作步骤、结果、计算及正常值等，使学生能在实验前对实验有概括性的了解。 试剂部分介绍实验中所需用的全部试剂及配制保管方法，水溶液仅注明浓度，非水溶液均有注解。 在配制方法中所列出的量仅表示在配制过程中的数量关系，而非实验的实际需要量，实际的需要 量需按参加实验的人数，并考虑一定的耗损比例，按配制方法另行计算。器材部分仅列出需在实 验室配备和临时分发的主要器材设备，常用的仪器已在仪器单中列出，器材项内不再包括。操作 部分介绍进行实验的过程，计算方法。注意事项中所讨论的内容应在实验过程中随时注意，使实 验能顺利进行。 实验 1 铜的比色测定 [原理] 氢氧化铵作为显色剂与 Cu2+结合成深蓝色的铜氨络离子[Cu(NH3)4] 2+，其颜色的深浅与 Cu2+ 浓度呈正比关系，与同样处理的标准液进行比色，可求得待测液中 Cu2+的含量。 [试剂] 1. 氢氧化铵溶液（氨水溶液）： 2mol/L 2．标准 Cu2+溶液（100mg%）：称取 3.927g 化学纯 CuSO4 .5H2O 置于 100ml 容量瓶中，加 40ml 水溶解，再加入 5ml 浓 H2SO4 防止铜盐水解，最后加水至刻度并充分混匀。 [主要器材] 1. 试管及试管架 2. 刻度吸量管 3．721 型分光光度计 [操作步骤]
取试管3支，编号，按表4操作： 表4 试剂(ml) 空白(B)标准(S)测定(U 未知Cu2*溶液 0.5 标准Cu2*溶液(100mg%) 0.5 蒸馏水 2.5 2.0 2.0 NHOH (2mol/L) 2.0 2.0 2.0 室温充分混匀，在58Onm波长处，以空白管调零，读取各管OD值。 [结果计算 Cu2mg%测定管光密度 ×100 标准管光密度 [注意事项 1.测定用玻璃器皿必须用去离子水冲洗干净，不得有离子污染。 2.标准C+溶液有较强的酸性，而氢氧化铵溶液有较强的碱性，使用时应注意安全。 实验2肝组织中核酸的分离和核酸组分的鉴定 [原理] 动物肝组织中的核蛋白可用水提取，用酚破坏核酸与蛋白质之间的结合键，再用乙醚抽提除 去蛋白质及其杂质，最后用乙醇沉淀核酸。 核酸(DNA和RNA)可被酸水解成磷酸、有机碱（嘌呤碱和嘧啶碱）以及戊糖（核糖和脱 氧核糖)。它们分别可用下列方法鉴定： 1.磷酸的鉴定：磷酸能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂氨基茶酚磺酸钠的作用 下还原成蓝色的钼蓝。 H3PO4+12H2MoO4- 一HP04-12MoO312H20 磷酸钼酸 磷钼酸 2
2 取试管 3 支，编号，按表 4 操作： 表 4 试剂(ml) 空白(B) 标准(S) 测定(U) 未知 Cu2+溶液 — — 0.5 标准 Cu2+溶液（100mg%） — 0.5 — 蒸馏水 2.5 2.0 2.0 NH4OH（2mol/L） 2.0 2.0 2.0 室温充分混匀，在 580nm 波长处，以空白管调零，读取各管 OD 值。 [结果计算] Cu2+mg%= ×100 [注意事项] 1．测定用玻璃器皿必须用去离子水冲洗干净，不得有离子污染。 2．标准 Cu2+溶液有较强的酸性，而氢氧化铵溶液有较强的碱性，使用时应注意安全。 实验 2 肝组织中核酸的分离和核酸组分的鉴定 [原理] 动物肝组织中的核蛋白可用水提取，用酚破坏核酸与蛋白质之间的结合键，再用乙醚抽提除 去蛋白质及其杂质，最后用乙醇沉淀核酸。 核酸（DNA 和 RNA）可被酸水解成磷酸、有机碱（嘌呤碱和嘧啶碱）以及戊糖（核糖和脱 氧核糖）。它们分别可用下列方法鉴定： 1． 磷酸的鉴定： 磷酸能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂氨基萘酚磺酸钠的作用 下还原成蓝色的钼蓝。 H3PO4+12H2MoO4 H3PO4·12MoO3·12H2O 磷酸 钼酸 磷钼酸 标准管光密度 测定管光密度
6H+H3PO412MoO312H2O- -H3PO46MoO33MoOs-12H2O+3H2O 磷钼酸 还原剂 钼蓝 2.嘌吟碱的鉴定：嘌吟碱能与苦味酸作用形成针状结晶。 3.核糖的鉴定：核糖与强酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚(3,5.-二羟甲苯，orcinol)反应， 缩合成绿色化合物 H -OH HO- 浓硫酸 0 H-C-HC +3H0 △ OH OH H 核糖 OH OH 糠醛 3,5-二羟甲苯 绿色化合物 4.脱氧核糖的鉴定脱氧核糖在强酸中加热可生成。-羟基-Y-酮基戊醛，后者与二苯胺 作用生成蓝色化合物。 CHO CHO CH2 CHOH 强酸 CH2 +H2O △ CHOH C-0 CH2OH CH2OH 脱氧核糖 @羟基-Y酮基戊醛
3 6H+H3PO4·12MoO3·12H2O H3PO4·6MoO3·3MoO5·12H2O+3H2O 磷钼酸 钼蓝 2．嘌呤碱的鉴定： 嘌呤碱能与苦味酸作用形成针状结晶。 3．核糖的鉴定： 核糖与强酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚（3,5,-二羟甲苯，orcinol）反应， 缩合成绿色化合物。 4． 脱氧核糖的鉴定 脱氧核糖在强酸中加热可生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺 作用生成蓝色化合物。 还原剂 OH CH3 H HO O O —C H3C OH O CH3 O —C 糠醛 3,5-二羟甲苯 绿色化合物 + CH2 CHO CHOH CHOH CH2OH CH2 CHO CH2 C=O CH2OH +H2O 强酸 脱氧核糖 -羟基--酮基戊醛 OH OH H H HO—C C—OH H—C—H C—C H 核糖 O 浓硫酸 H O O —C +3H2O 糠醛 H
CHO CH2 《NC →蓝色化合物 0-0 CH2OH -羟基-Y酮基戊醛 二苯胺 试剂 (一)90%苯酚溶液。 (二)乙醚。 (三)95%乙醇 (四)5%疏酸 (五)钼酸试剂钼酸铵5g溶于100ml蒸馏水中，再加入浓硫酸15ml,冷却后加蒸馏水至 1000ml。冷处保存（一个月内稳定）。 (六)氨基萘酚磺酸钠溶液1,2,4氨基萘酚磺酸钠0.5g溶于195ml15%亚硫酸氢钠与5ml 20%亚硫酸钠溶液中，加塞振摇助溶。贮存于棕色瓶中，冰箱保存（可用4周）用时取上清液。 (七)饱和苦味酸溶液苦味酸约13g溶于100ml蒸馏水中，静置过夜。临用前取上清液。 (八)Bial试剂苔黑酚1.5g加入浓盐酸500ml中，再加10%氯化高铁20-30滴。临用前配 制，冰箱保存。 (九)二苯胺试剂取二苯胺1g溶于100ml冰醋酸中，加入浓硫酸2.75ml,临用前配制， 贮于棕色瓶中。 [主要器材打 (一)离心机 (二)沸水浴 (三)研钵 [操作步骤] (一)肝组织中核酸的提取：按以下流程操作：
4 [试剂] （一）90%苯酚溶液。 （二）乙醚。 （三）95%乙醇。 （四）5%硫酸 （五）钼酸试剂 钼酸铵 5g 溶于 100ml 蒸馏水中，再加入浓硫酸 15ml，冷却后加蒸馏水至 1000ml。冷处保存（一个月内稳定）。 （六）氨基萘酚磺酸钠溶液 1,2,4-氨基萘酚磺酸钠 0.5g 溶于 195ml 15%亚硫酸氢钠与 5ml 20%亚硫酸钠溶液中，加塞振摇助溶。贮存于棕色瓶中，冰箱保存（可用 4 周）用时取上清液。 （七）饱和苦味酸溶液 苦味酸约 1.3g 溶于 100ml 蒸馏水中，静置过夜。临用前取上清液。 （八）Bial 试剂 苔黑酚 1.5g 加入浓盐酸 500ml 中，再加 10%氯化高铁 20~30 滴。临用前配 制，冰箱保存。 （九）二苯胺试剂 取二苯胺 1g 溶于 100ml 冰醋酸中，加入浓硫酸 2.75ml，临用前配制， 贮于棕色瓶中。 [主要器材] （一）离心机 （二）沸水浴 （三）研钵 [操作步骤] （一） 肝组织中核酸的提取：按以下流程操作： CH2 CHO CH2 C=O CH2OH N H -羟基--酮基戊醛 二苯胺 + 蓝色化合物
肝润（约1g,置研体中） 加少量净沙研磨至糊状 加蒸馏水3ml,研磨3min 加90%苯酚5ml,研磨10min(移入玻璃小试管) 离心5min(3000r/min,) 上层液（移至塑料小试管） 下层液 加乙酰2ml,试管口覆盖聚乙烯膜、用拇指将管口 按住，用力振摇1-2min(或用玻棒搅拌) 离心5min(3000r/min) 上清液 中层液 下层液（全部移至塑料小试管） 加95%乙醇2ml(用玻棒搅拌约2min) 离心3min(3000r/min） 上清液 阮淀 |加5%H2S044ml (二)核酸水解： !(移至玻璃大试管)置沸水浴15min 核酸水解液 (三)核酸组分的鉴定 核酸水解液用流水冷却后进行定性鉴定。 1.磷酸的鉴定：试管2支、标号，按表5操作： 表5 试剂（滴） 测定管对照管 核酸水解液 10 5%陆移 10 钼酸试剂 氨基萘酚磺酸钠溶液 4 4
5 肝脏（约 1g，置研钵中） 加少量净沙研磨至糊状 加蒸馏水 3ml，研磨 3min 加 90%苯酚 5ml，研磨 10 min（移入玻璃小试管） 离心 5min（3000r/min，） 上层液 （移至塑料小试管） 下层液 加乙醚 2ml，试管口覆盖聚乙烯膜、用拇指将管口 按住，用力振摇 1-2 min（或用玻棒搅拌） 离心 5min（3000r/min） 上清液 中层液 下层液（全部移至塑料小试管） 加 95%乙醇 2ml（用玻棒搅拌约 2 min） 离心 3min（3000r/min） 上清液 沉淀 加 5%H2SO44ml （二）核酸水解： （移至玻璃大试管）置沸水浴 15min 核酸水解液 （三）核酸组分的鉴定 核酸水解液用流水冷却后进行定性鉴定。 1． 磷酸的鉴定：试管 2 支、标号，按表 5 操作： 表 5 试 剂（滴） 测定管 对照管 核酸水解液 10 — 5%硫酸 — 10 钼酸试剂 5 5 氨基萘酚磺酸钠溶液 4 4
摇匀，置沸水浴中2~3分钟，观察两管颜色变化。 2.嘌呤碱的鉴定：试管1支，加入饱和苦味酸约2l,再加入核酸水解液46滴，摇匀，静 止室温中，观察有无针状结晶出现。 3.核糖的鉴定：试管2支、标号，按表6操作： 表6 试剂（滴） 测定管 对照管 核酸水解液 6 5%硫酸 6 Bial试剂 9 9 摇匀，置沸水浴中5分钟后观察两管颜色变化 4.脱氧核糖的鉴定：试管2支、标号，按表7操作： 老7 试剂（滴） 测定管对照管 核酸水解液 20 5%硫酸 20 二苯胺试剂 40 摇匀，置沸水浴中15分钟后观察两管颜色变化。 [结果 记录上述各管实验结果，并加以解释。 [注意事项] 1.用新鲜肝组织（可取自小鼠、兔和猪等）制备肝匀浆时，必须充分研磨肝组织。 2.苯酚有腐蚀性，切勿与皮肤接触，注意安全。 3.该实验为定性实验，需记录实验结果并加以解释。 4.正确使用离心机（掌握离心过程中离心管的对称和平衡）。 5.为充分利用时间，可先做脱氧核糖鉴定的实验，若延长沸水浴中的反应时间，其结果更 明显
6 摇匀，置沸水浴中 2~3 分钟，观察两管颜色变化。 2．嘌呤碱的鉴定：试管 1 支，加入饱和苦味酸约 2ml，再加入核酸水解液 4~6 滴，摇匀，静 止室温中，观察有无针状结晶出现。 3．核糖的鉴定：试管 2 支、标号，按表 6 操作： 表 6 试 剂（滴） 测定管 对照管 核酸水解液 6 — 5%硫酸 — 6 Bial 试剂 9 9 摇匀，置沸水浴中 5 分钟后观察两管颜色变化。 4．脱氧核糖的鉴定：试管 2 支、标号，按表 7 操作： 表 7 试 剂（滴） 测定管 对照管 核酸水解液 20 — 5%硫酸 — 20 二苯胺试剂 40 40 摇匀，置沸水浴中 15 分钟后观察两管颜色变化。 [结果] 记录上述各管实验结果，并加以解释。 [注意事项] 1．用新鲜肝组织（可取自小鼠、兔和猪等）制备肝匀浆时，必须充分研磨肝组织。 2．苯酚有腐蚀性，切勿与皮肤接触，注意安全。 3．该实验为定性实验，需记录实验结果并加以解释。 4．正确使用离心机（掌握离心过程中离心管的对称和平衡）。 5．为充分利用时间，可先做脱氧核糖鉴定的实验，若延长沸水浴中的反应时间，其结果更 明显
实验3邻甲苯胺法测定血清（浆）葡萄糖 [原理]在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合、脱水，生成希夫氏碱(Sch近 bas©)，经分子重排生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。 CHOH-CHOH ●H CHOH CHOH-CHO 酸，△ -CHO HO-CH2 3H2O OH-CH2 葡萄糖 甲基糠醛 CH HC -CH OH-CH2 O OH-CH2 O 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝绿色） [试剂] 1.邻甲苯胺试剂称取硫脲(AR)2.5g,溶于冰醋酸(AR)750ml中。将此液转入1L容量瓶内， 加邻甲苯胺150ml,2.4%硼酸溶液100ml,用冰醋酸定容至刻度。此溶液应置棕色瓶内室温保存， 至少可应用2个月。新配制试剂应放置24h后待“老化”使用，否则反应产物的吸光度低。 2.100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g,溶于12mmol/L苯 甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。 3.5.0mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用 12 nmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 4.0.3molL三氯醋酸溶液称取三氯醋酸5g,溶于蒸馏水70ml中，然后用蒸馏水定容至 100ml,混匀即可。 [主要器材] 1,试管及试管架 2.刻度吸量管
7 实验 3 邻甲苯胺法测定血清（浆）葡萄糖 [原理] 在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合、脱水，生成希夫氏碱（Schiff base），经分子重排生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。 [试剂] 1．邻甲苯胺试剂 称取硫脲(AR)2.5g，溶于冰醋酸(AR)750ml 中。将此液转入 1 L 容量瓶内， 加邻甲苯胺 150ml，2.4%硼酸溶液 100ml，用冰醋酸定容至刻度。此溶液应置棕色瓶内室温保存， 至少可应用 2 个月。新配制试剂应放置 24h 后待“老化”使用，否则反应产物的吸光度低。 2．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g，溶于 12mmol/L 苯 甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml。2h 以后方可使用。 3．5.0mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 4．0.3mol/L 三氯醋酸溶液 称取三氯醋酸 5g，溶于蒸馏水 70ml 中，然后用蒸馏水定容至 100ml，混匀即可。 [主要器材] 1．试管及试管架 2．刻度吸量管 CHOH—CHOH CHOH CHOH—CHO HO—CH2 葡萄糖 羟甲基糠醛 HC CH O C C—CHO OH—CH2 酸， 3H2O 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝绿色） HC CH O C C—CHO OH—CH2 CH3 HC CH O C C—CH= OH—CH2 N— CH3 + H2N—
3.721型分光光度计 [操作步骤] 1.血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水按表8操作。 表8 加入物(ml) 空白管 标准管测定管 蒸馏水 0.1 葡萄糖标准应用液(5.0mmol/L) 0.1 血清（血浆、脑脊液） 0.1 邻甲苯胺试剂 3.0 3.0 30 混匀，置沸水中煮沸12min,取出置冷水中冷却3min,在630nm处比色，以空白管调零 读取各管吸光度。 2.严重黄疸、溶血及乳糜样血清制备无蛋白血滤液：取血清0.2ml,加入0.3molL三氯醋 酸溶液l.8ml,混匀，静置5min,离心5min,取上清液按表9操作。 表9 加入物(ml)） 空白管标准管测定管 三氯醋酸溶液 1.0 0.9 葡萄糖标准应用液(5.0mmo1/L) 0.1 无蛋白血滤液 1.0 邻甲苯胺试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中煮沸12min,取出置自米水中冷却3min,在波长630nm处比色，以空白 管调零，读取各管吸光度。 [结果计算] 血糖浓度(mmol/L):测定管光密度 ×5.0 标准管光密度 1参考范围13.89~6.11 nmol/L [注意事项] 1.邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易氧化。配制前宜重蒸馏，收集199~201℃的馏出部分 此部分馏出液应为无色或浅黄色，然后加入盐酸精胺(1gL)防止氧化，置棕色瓶密封避光保存
8 3．721 型分光光度计 [操作步骤] 1． 血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水按表 8 操作。 表 8 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 0.1 － － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L） － 0.1 － 血清(血浆、脑脊液) － － 0.1 邻甲苯胺试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，置沸水中煮沸 12min，取出置冷水中冷却 3min，在 630nm 处比色，以空白管调零， 读取各管吸光度。 2． 严重黄疸、溶血及乳糜样血清制备无蛋白血滤液：取血清 0.2ml，加入 0.3mol/L 三氯醋 酸溶液 l.8ml，混匀，静置 5min，离心 5min，取上清液按表 9 操作。 表 9 加入物(ml) 空白管 标准管 测定管 三氯醋酸溶液 1.0 0.9 － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L） － 0.1 － 无蛋白血滤液 － － 1.0 邻甲苯胺试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中煮沸 12min，取出置自来水中冷却 3min，在波长 630nm 处比色，以空白 管调零，读取各管吸光度。 [结果计算] 血糖浓度（mmol/L）= ×5.0 [参考范围] 3.89 ～6.11mmol/L [注意事项] 1．邻甲苯胺为浅黄色油状液体，易氧化。配制前宜重蒸馏，收集 199～201℃的馏出部分， 此部分馏出液应为无色或浅黄色，然后加入盐酸精胺(1g/L)防止氧化，置棕色瓶密封避光保存。 测定管光密度 标准管光密度
2.邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物质而干扰比色，故在邻甲苯胺试 剂中加入硫脲，使试剂有抗氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空白管的吸光度， 并有一定的增色效应 3.硼酸与ā一葡萄糖的羟基结合，能促进葡萄糖转变醛式构型，增加反应的活性。 4.沸水浴时沸水一定要盖过管内的液面，否则温度不均匀，影响显色。 5.此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影响。一般不宜以校正曲线法进行 计算，故每次应同时作标准管。 6.最终反应液偶尔会产生混浊，最常见原因是高脂血症：此时，可向显色液3ml中加入异 丙醇1.5ml,充分混匀：溶解脂质可消除混浊，所测吸光度乘以1.5。注射右旋糖酐时，由于右 旋糖酐不溶于邻甲苯胺试剂而产生混浊：冷水浴太冷时亦会出现混浊。 实验4酪氨酸酶的催化作用 原理」 酪氨酸酶是一种以铜为辅基的结合蛋白酶，这种氧化酶可直接作用于底物多巴生成多巴醌， 然后经过一系列的反应，最终生成黑色素。在多巴转变为多巴醌的反应中，酪氨酸酶使多巴中的 氢原子的两个电子传递给分子氧，使后者转变为氧离子，游离在溶液中的两个质子与氧离子化合 生成水。其催化的主要反应及电子传递过程如下： CH:CHCOOH CH2CHCOOH ,NH酪氨酸羟化酶 NH2 酪氨酸码 NH2 [O](黑色素细胞) OH (2e OH 0 OH 2Cu 2C 酪氨酸 多巴 2H 多巴醒 1/20 黑色素 H2O
9 2．邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物质而干扰比色，故在邻甲苯胺试 剂中加入硫脲，使试剂有抗氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空白管的吸光度， 并有一定的增色效应。 3．硼酸与α-葡萄糖的羟基结合，能促进葡萄糖转变醛式构型，增加反应的活性。 4．沸水浴时沸水一定要盖过管内的液面，否则温度不均匀，影响显色。 5．此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影响。一般不宜以校正曲线法进行 计算，故每次应同时作标准管。 6．最终反应液偶尔会产生混浊，最常见原因是高脂血症；此时，可向显色液 3ml 中加入异 丙醇 1.5ml，充分混匀；溶解脂质可消除混浊，所测吸光度乘以 1.5 。注射右旋糖酐时，由于右 旋糖酐不溶于邻甲苯胺试剂而产生混浊；冷水浴太冷时亦会出现混浊。 实验 4 酪氨酸酶的催化作用 [原理] 酪氨酸酶是一种以铜为辅基的结合蛋白酶，这种氧化酶可直接作用于底物多巴生成多巴醌， 然后经过一系列的反应，最终生成黑色素。在多巴转变为多巴醌的反应中，酪氨酸酶使多巴中的 氢原子的两个电子传递给分子氧，使后者转变为氧离子，游离在溶液中的两个质子与氧离子化合 生成水。其催化的主要反应及电子传递过程如下： 酪氨酸羟化酶 [O]（黑色素细胞） OH CH2CHCOOH NH2 O CH2CHCOOH NH2 酪氨酸 OH CH2CHCOOH NH2 OH 酪氨酸酶 2H+ 2e 2H O 1/2O2 2- H2O 多巴 多巴醌 聚 合 黑色素 2Cu2+ 2Cu+ O
酪氨酸是甲状腺素、肾上腺素和黑色素的前体。人类皮肤、毛发和眼睛虹膜的黑色素是酪氨 酸在酪氨酸羟化酶催化作用下生成了3,4二羟苯丙氨酸（简称多巴，DOPA),后者在酪氨酸酶的 作用下生成多巴醌，而后经过一系列中间反应，最后聚合成黑色素。白化病(albunism)是一种 表现为皮肤、毛发和虹膜变白，因为缺乏酪氨酸酶而不能合成黑色素的先天性代谢缺陷性疾病。 酪氨酸酶也广泛分布于植物界，例如新鲜蘑菇、马铃薯（外层含量尤多）和谷物等。 试剂 1.酪氨酸溶液0.1g酪氨酸溶于100ml0.1%碳酸钠溶液中。 2.马铃薯抽提液切碎马铃薯约6g置于研体中，加少量净砂，研成匀浆，再加蒸馏水10ml 充分研磨；最后通过棉花过滤，即可获得含有酪氨酸酶的马铃薯抽提液。 3.煮沸过的马铃薯滤液取2ml试剂2于试管内，在酒精灯上加热至沸以破坏酶的活性。 4.液体石蜡 【主要器材 研体、恒温水浴箱 [操作步骤 取试管3支按表10进行操作 表10 试剂（滴） 3 者沸过的马铃薯液 20 马铃薯抽提液 20 20 酪氨酸液 20 20 20 充分混匀各管 液体石蜡 5 置35℃~40℃水浴约30分钟，观察并记录各管颜色，试解释所得的结果。 注意事项 1.煮沸马铃薯液时，小心勿使液体溅出。 2,加液体石蜡时宜斜执试管，沿管壁缓缓加入，不要产生气泡：加入的液体石蜡必需完全 覆盖液面，以隔绝空气
10 酪氨酸是甲状腺素、肾上腺素和黑色素的前体。人类皮肤、毛发和眼睛虹膜的黑色素是酪氨 酸在酪氨酸羟化酶催化作用下生成了 3,4-二羟苯丙氨酸（简称多巴，DOPA），后者在酪氨酸酶的 作用下生成多巴醌，而后经过一系列中间反应，最后聚合成黑色素。白化病（albunism）是一种 表现为皮肤、毛发和虹膜变白，因为缺乏酪氨酸酶而不能合成黑色素的先天性代谢缺陷性疾病。 酪氨酸酶也广泛分布于植物界，例如新鲜蘑菇、马铃薯（外层含量尤多）和谷物等。 [试剂] 1．酪氨酸溶液 0.1g 酪氨酸溶于 100ml 0.1%碳酸钠溶液中。 2．马铃薯抽提液 切碎马铃薯约 6g 置于研钵中，加少量净砂，研成匀浆，再加蒸馏水 l0ml 充分研磨；最后通过棉花过滤，即可获得含有酪氨酸酶的马铃薯抽提液。 3．煮沸过的马铃薯滤液 取 2ml 试剂 2 于试管内，在酒精灯上加热至沸以破坏酶的活性。 4．液体石蜡 [主要器材] 研钵、恒温水浴箱 [操作步骤] 取试管 3 支按表 10 进行操作 表 10 试剂（滴） 1 2 3 煮沸过的马铃薯液 20 — — 马铃薯抽提液 — 20 20 酪氨酸液 20 20 20 充分混匀各管 液体石蜡 — — 5 置 35℃~40℃水浴约 30 分钟，观察并记录各管颜色，试解释所得的结果。 [注意事项] 1．煮沸马铃薯液时，小心勿使液体溅出。 2．加液体石蜡时宜斜执试管，沿管壁缓缓加入，不要产生气泡；加入的液体石蜡必需完全 覆盖液面，以隔绝空气