蛋白酶 一.概念:催化蛋白质肽键水解的一类酶。 二.用途: 三.蛋白酶的分类: 四.蛋白酶的性质: 五.蛋白酶的生产工艺: 六.蛋白酶活性测定方法:

一、肺损伤 (一)引起肺损伤的炎性介质 1、蛋白酶中性粒细胞溶酶体中贮存有预先合成的蛋白酶,时刻准备在脱颗粒反应中释放。受到刺激的中性粒细胞可释放不同的蛋白酶,如中性粒弹性酶,能降解弹性蛋白和其它结构分子并破坏正常肺结构。已有几个研究发现,在ARDS患者BAL中弹性酶和其它蛋白酶含量异常

1.分析意义 蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化。 它们的水解产物是高等植物的氮源之一。土壤蛋白酶在剖面中的分布与蔗糖酶相似,酶活 性随剖面深度而减弱。并与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关

3.1蛋白质表达系统 3.1.1 E. coli蛋白表达系统 3.1.2哺乳动物表达系统 3.1.3昆虫表达系统 3.1.4硒代蛋白表达 3.2蛋白纯化技术 3.2.1 AKTA使用规则及使用实例 3.2.2蛋白纯化柱子的介绍及清洁方法 3.2.3透析袋的使用 3.2.4浓缩管的使用 3.2.5 TEV蛋白酶的使用 3.2.6金属螯合层析 3.2.7分子筛 3.2.8疏水作用层析 3.2.9离子交换层析 3.2.10 Protein A/G 纯化抗体 3.2.11谷胱甘肽转移酶 (GST) 亲和层析 3.2.12 Fab的蛋白表达 3.2.13植物种子蛋白的提取方案 3.2.14包涵体复性 3.2.15 SDS-PAGE凝胶电泳 3.2.16 GraphPad Prism软件的使用 3.3筛选与蛋白互作的分子 3.3.1酵母双杂交技术从文库中筛选与蛋白X结合的蛋白 3.3.2噬菌体展示 3.3.3配体指数富集的系统进化技术筛选核酸适配体 3.4检测蛋白与互作分子的互作 3.4.1酵母双杂交 Yeast two hybrid 3.4.2双分子荧光互补Bimolecular fluorescence complementation 3.4.3 Western Blotting 3.4.4免疫共沉淀Co-Immunoprecipitation 3.4.5差示扫描荧光技术Differential Scanning Fluorimetry 3.4.6荧光偏振Fluorescence polarization 3.4.7等温滴定微量热Isothermal Titration Calorimetry 3.4.8表面等离子共振技术Biacore 3.4.9蛋白质交联Crosslink 3.4.10 Native-PAGE 3.4.11静态光散射Static light scattering 3.4.12凝胶阻滞实验EMSA-electrophoretic mobility shift assay 3.5蛋白生化实验技术 3.5.1蛋白酶活性检测 3.5.2 ATP酶活检测 3.5.3解旋酶活性检测 3.5.4体外转录实验

5.1 蛋白酶 5.2 溶菌酶

第一部分 啤酒工艺综合实验 实验一 还原糖的测定 3 实验二 α-氨基氮的测定（茚三酮法） 4 实验三 双乙酰（紫外分光光度法） 5 实验四 总酸（电位滴定法） 6 实验五 酒精度 7 实验六 原麦汁浓度（蒸馏——密度法） 9 实验七 真正发酵度(实际发酵度) 10 实验八 协定法糖化和外加酶糖化法 11 第二部分 通风发酵综合实验 实验一 淀粉质原料的水分测定 12 实验二 原料中粗淀粉的测定 13 实验三 还原糖的测定 17 实验四 蛋白酶活力的测定方法 19 实验五 糖化酶的测定方法 22 实验六 玉米淀粉液化及糖化 24 实验七 面包酵母流加培养与分批培养试验 27 实验八 糖化酶的发酵和提取实验 31 实验九 酸性蛋白酶固态发酵实验 34

1培养基的组成及配制 1.2种子培养基 培养基组成: 200ml:豆粉6g,饴糖1g,酵母膏0.2g,MSO40.4g,KH2P40.4g.放入高压灭菌锅,121℃,20min灭菌。 灭菌操作完毕,将上述物品并洗耳球转入超净台,接种前20min进行紫外空气灭菌。 1.3产酶培养基 培养基组成:

• 酶的研究简史 • 秸秆变糖的秘密-糖苷酶 • 洗衣剂和嫩肉粉中的神奇分子-蛋白酶 • 美丽伴你行-护肤品中的酶 • 手性制药和手性酶-高效低毒药物的奥秘

9.1 蛋白酶催化基本上非常难于发生的化学反应 9.2 碳酸脱水酶使快速反应的速度更快 9.3 限制性内切酶高度特异性断裂 DNA 分子 9.4 核苷单磷酸激酶激酶催化磷酸转移但不促进水解

实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化 实验二 碱变性法提取质粒 DNA 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 实验五 DNA 的回收与连接 实验六 基因的 PCR 扩增 实验七 用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因 实验八 基因组合生物合成新化合物 实验九 药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价 实验十 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备 实验十一 固定化细胞法生产 L-天冬氨酸和 L-丙氨 实验十二 重组水蛭素Ⅲ的制备 实验十三 酸醇提取法制备猪胰岛素 实验十四 多肽缩宫素的 Fmoc 固相合成 实验十五 酵母 RNA 的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析 实验十六 单核苷酸衍生物制备 实验十七 胰弹性蛋白酶的制备及活力测定 实验十八 超氧化物歧化酶的分离纯化 实验十九 重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析