遗传学实验教案授课内容：实验一植物细胞的有丝分裂的观察（第六周星期一、星期二）实验二细胞的减数分裂的观察（第七周星期一、星期二）实验三果蝇的唾腺染色体观察（第八周星期一、星期二）实验四植物核DNA的提取（第九周星期一、星期二）实验五DNA浓度的测定（第十周星期一、星期二）实验六果蝇单因子遗传实验（第十一周星期一、星期二）实验七果蝇双因子遗传实验（第十二周星期一、星期二）实验八聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（第十三周星期一、星期二）实验九DNA的体外扩增实验（ISSR）（第十四周星期一、星期二）实验十植物多倍体的诱导和鉴定（第十五周星期一、星期二）
遗传学实验教案 授课内容： 实验一 植物细胞的有丝分裂的观察（第六周星期一、星期二）实 验二 细胞的减数分裂的观察（第七周星期一、星期二） 实验三 果蝇的唾腺染色体观察（第八周星期一、星期二） 实验四 植物核 DNA 的提取（第九周星期一、星期二） 实验五 DNA 浓度的测定（第十周星期一、星期二） 实验六 果蝇单因子遗传实验（第十一周星期一、星期二） 实验七 果蝇双因子遗传实验（第十二周星期一、星期二） 实验八 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（第十三周星期一、星期二）实 验九 DNA 的体外扩增实验（ISSR）（第十四周星期一、星期二） 实验十 植物多倍体的诱导和鉴定（第十五周星期一、星期二）
实验一植物细胞的有丝分裂的观察一、实验原理：细胞有丝分裂是真核生物体细胞增殖的主要方式之一，它对于生物体维持生命活动和延续种族的意义。在有丝分裂过程中，经过分裂间期、前期、中期、后期和末期，染色体复制一次，而后平分给两个子细胞，伴随着胞质分裂，形成新的细胞。二、实验目的：1.使学生了解细胞增殖的基本方式，细胞分裂对于生物体维持生命活动和延续种族的意义。理解细胞周期的概念、有丝分裂的过程、特征和意义。掌握有丝分裂各期的特点，尤其要重点掌握染色体规律性的变化。2.通过观察植物细胞有丝分裂的实验，培养学生的实验操作能力、观察能力以及学习使用高倍显微镜和绘生物图的基本技能3.通过观察植物细胞有丝分裂实验的操作、记录，培养学生实事求是的科学态度和认真严谨的科学精神。三、实验材料：洋葱根尖四、实验器具和药品1、用具：显微镜、染色液、石蜡、玻片、刀片、镊子、酒精灯、培养血、烧杯2、药品：卡诺固定液：3份95%酒精与1份冰醋酸配制而成。把根尖投入盛有固定液的容器内，盖上盖子固定12～24小时，然后从固定液中取出，用90%酒精漂洗最后放入70%酒精中保存，备用。碱性染料：碱性染料的显色基团含有阳离子或本身为阳离子，能与组织或细胞中呈酸性的结构（如细胞核）发生化学结合或吸附作用，使其染上一定颜色的染料。常用于植物细胞核染色的碱性染料有：龙胆紫洋红等。龙胆紫溶液：将0.5克龙胆紫溶解在100毫升，2%醋酸溶液中配制成0.5%龙胆紫溶液。醋酸洋红溶液：将1克洋红与100毫升冰醋酸混合后煮沸，煮时可加锈铁钉一枚，略具铁质的1%醋酸洋红染液能增强染色效果。五、实验步骤：
实验一 植物细胞的有丝分裂的观察 一、实验原理： 细胞有丝分裂是真核生物体细胞增殖的主要方式之一，它对于生物体维持生 命活动和延续种族的意义。在有丝分裂过程中，经过分裂间期、前期、中期、后 期和末期，染色体复制一次，而后平分给两个子细胞，伴随着胞质分裂，形成新 的细胞。 二、实验目的： 1．使学生了解细胞增殖的基本方式，细胞分裂对于生物体维持生命活动和 延续种族的意义。理解细胞周期的概念、有丝分裂的过程、特征和意义。掌握有 丝分裂各期的特点，尤其要重点掌握染色体规律性的变化。 2．通过观察植物细胞有丝分裂的实验，培养学生的实验操作能力、观察能 力以及学习使用高倍显微镜和绘生物图的基本技能。 3．通过观察植物细胞有丝分裂实验的操作、记录，培养学生实事求是的科 学态度和认真严谨的科学精神。 三、实验材料： 洋葱根尖 四、实验器具和药品 1、用具：显微镜、染色液、石蜡、玻片、刀片、镊子、酒精灯、培养皿、烧杯 2、药品： 卡诺固定液：3 份 95％酒精与 1 份冰醋酸配制而成。把根尖投入盛有固定液 的容器内，盖上盖子固定 12～24 小时，然后从固定液中取出，用 90％酒精漂洗， 最后放入 70％酒精中保存，备用。 碱性染料：碱性染料的显色基团含有阳离子或本身为阳离子，能与组织或细 胞中呈酸性的结构(如细胞核)发生化学结合或吸附作用，使其染上一定颜色的染 料。常用于植物细胞核染色的碱性染料有：龙胆紫洋红等。 龙胆紫溶液：将 0.5 克龙胆紫溶解在 100 毫升，2％醋酸溶液中配制成 0.5％ 龙胆紫溶液。 醋酸洋红溶液：将 1 克洋红与 100 毫升冰醋酸混合后煮沸，煮时可加锈铁钉 一枚，略具铁质的 1％醋酸洋红染液能增强染色效果。 五、实验步骤：
程序操作方法注意问题思考分析下午2时是洋葱有丝分因洋葱品种，温度等条①本实验欲观察的是根尖（分生）裂高峰期，剪取根尖件不同，分裂高峰期的区的细胞，切取长度一般为1~2～3mm，立即放入盛具体时间，各地有差异。2mm②为什么要解离？为的是用有质量分数为10%盐为保证在实验课上能观 药液盐酸溶液可以水解细胞壁及解离酸的玻璃血中室温下解察到较多的有丝分裂各细胞间质的多糖使组织中细胞相离 10 分钟。期分裂相，须选择分裂互分开来，用镊子尖轻压，感觉根高峰期剪取，这是实验尖变得（酥软）为宜。成功重要因素之一。将解离根尖，放入盛清漂洗要充分，可换清水为什么要漂洗这么长时间？目的1~2次。水的玻璃血中漂洗10在于使细胞内的盐酸尽量洗尽因漂洗分钟。为染色剂龙胆紫是碱性染料以免影响对细胞的（染色体）染色。将漂洗后的根尖放入为染色适度，是实验成功染色时间要适宜，时间太短，分生10.01g/ml的龙胆紫溶的又一关键。如用醋酸区细胞，特别是没有着色影响观液（或醋酸洋红液）的玻洋红染色，时间应比龙察：若时间过长，细胞着色太深，染色胆紫染色时间长3～5不易区分染色体与其它物质。璃血中染色3~5分钟。分钟。将根尖移到载玻片上，若细胞未充分散开，可为什么要使细胞充分散开成雾加一滴清水，用镊子尖用一带橡皮头铅笔的橡状？在高倍显微镜下由于物镜头将根尖弄碎。在盖玻片皮头轻轻敲击根尖区小，通光量少，所看到的细胞个体域，使其散成雾状。制片上再加一载玻片，用手（少），光线较（暗），只能看清轻压，载玻片使细胞分一层细胞结构，细胞散开成雾状，散开，使细胞散成雾状，便于观察，若重叠则观察不清。取下上面的载玻片
前期D分裂间期中心粒中心体染色质核若丝点核膜e前中期染色单体染色体-d 中期正在解离的膜后期Af后期B名 末期图14-7染色体在有丝分裂过程中的组织和分离的几个时期六、本实验教学应注意的问题：1.注意让学生把握有丝分裂最根本特征。细胞分裂是生物体生长、发育、繁殖的基础，是生物特有的生命现象。生物的生长发育主要通过有丝分裂增殖体细胞的数目。有丝分裂知识又是学习后面章节如细胞的减数分裂、生物生殖和发育、遗传基本规律的知识基础，因此要扎实抓好细胞有丝分裂基础知识教学。抓住染色体“复制、均分”的特点和染色质-染色体规律性变化，使学生理解和掌握有丝分裂各期的特点和最重要的特征：保持亲子代体细胞中染色体数目恒定。2.注意以动态观点讲授细胞有丝分裂。让学生理解和掌握细胞周期概念和各分裂期、分裂问期的特点。应强调，有丝分裂是连续变化的动态过程，各期之间并没有明显的界限。同时应注意先讲清楚有丝分裂过程中细胞内染色体、纺锤体如何变化的科学事实，最后总结概括细胞有丝分裂的概念、特征和意义等。3.实验中，可将植物细胞有丝分裂的各个时期的固定装片，放在示范镜下，让学生轮流去观察。可将上述固定装片发给学生，让他们自己去观察，并对照自己制作的临时装片，以使实验效果更好。4.实验后要求学生认真填写实验报告和完成实验作业。此项要求完成后，如时间允许应该结合实验预习报告中提出的问题，让学生进一步明确实验的目的、方法步骤和原理。还可提出新的问题让学生思考，如：在实验中观察到的细胞，处于哪个时期的细胞比较多？为什么？
六、本实验教学应注意的问题： 1．注意让学生把握有丝分裂最根本特征。 细胞分裂是生物体生长、发育、繁殖的基础，是生物特有的生命现象。生物 的生长发育主要通过有丝分裂增殖体细胞的数目。有丝分裂知识又是学习后面章 节如细胞的减数分裂、生物生殖和发育、遗传基本规律的知识基础，因此要扎实 抓好细胞有丝分裂基础知识教学。抓住染色体“复制、均分”的特点和染色质— 染色体规律性变化，使学生理解和掌握有丝分裂各期的特点和最重要的特征：保 持亲子代体细胞中染色体数目恒定。 2．注意以动态观点讲授细胞有丝分裂。 让学生理解和掌握细胞周期概念和各分裂期、分裂问期的特点。应强调，有 丝分裂是连续变化的动态过程，各期之间并没有明显的界限。同时应注意先讲清 楚有丝分裂过程中细胞内染色体、纺锤体如何变化的科学事实，最后总结概括细 胞有丝分裂的概念、特征和意义等。 3．实验中，可将植物细胞有丝分裂的各个时期的固定装片，放在示范镜下， 让学生轮流去观察。可将上述固定装片发给学生，让他们自己去观察，并对照自 己制作的临时装片，以使实验效果更好。 4．实验后要求学生认真填写实验报告和完成实验作业。此项要求完成后， 如时间允许应该结合实验预习报告中提出的问题，让学生进一步明确实验的目 的、方法步骤和原理。还可提出新的问题让学生思考，如：在实验中观察到的细 胞，处于哪个时期的细胞比较多？为什么？
实验二细胞的减数分裂的观察一、实验原理：减数分裂是一种特殊方式的细胞分裂，仅在配子形成过程中发生。它对于生物体延续种族具有重要意义。在减数分裂过程中，染色体复制一次，连续进行两次核分裂，形成四个配子，每个配子含单倍的染色体。减数分裂的前期较长，出现同源染色体的配对、交换和分离。二、实验目的：1.使学生了解动植物的生殖细胞的形成过程。2.通过观察动物细胞减数分裂的实验，培养学生的实验操作能力、观察能力以及学习使用高倍显微镜和绘生物图的基本技能。3.通过观察植物细胞有丝分裂实验的操作、记录，培养学生实事求是的科学态度和认真严谨的科学精神。三、实验材料：短角斑腿蝗精巢。四、实验器具和药品3、用具：显微镜、染色液、石蜡、玻片、刀片、镊子、酒精灯、培养皿、烧杯4、药品：无水乙醇、冰醋酸、洋红、甘油、松香、石蜡卡诺固定液：3份95%酒精与1份冰醋酸配制而成。把根尖投入盛有固定液的容器内，盖上盖子固定12～24小时，然后从固定液中取出，用90%酒精漂洗，最后放入70%酒精中保存，备用。龙胆紫溶液：将0.5克龙胆紫溶解在100毫升，2%醋酸溶液中配制成0.5%龙胆紫溶液。醋酸洋红溶液：将1克洋红与100毫升冰醋酸混合后煮沸，煮时可加锈铁钉一枚，略具铁质的1%醋酸洋红染液能增强染色效果。五、实验步骤：1、安装和调节普通光学显微镜、教学显微镜2、精母细胞、四分体（？）、精子细胞的取材和制做临时装片3、减数分裂各时期的观察描述和汇图减数分裂间期第一次减数分裂前期细线期：染色质浓缩为细长的线；偶线期：同源染色体配对；粗线期：形成双价体：双线期：同源染色体开始分开，有交叉；终变期：交叉向染色体端部移动，染色体更短粗，核膜消失）第一次减数分裂中期：双价体排在赤道板上，纺锤体形成第一次减数分裂后期：同源染色体分开，每一极染色体数目减半第一次减数分裂末期：染色体解旋，呈丝状，核膜形成
实验二 细胞的减数分裂的观察 一、实验原理： 减数分裂是一种特殊方式的细胞分裂，仅在配子形成过程中发生。它对于生 物体延续种族具有重要意义。在减数分裂过程中，染色体复制一次，连续进行两 次核分裂，形成四个配子，每个配子含单倍的染色体。减数分裂的前期较长，出 现同源染色体的配对、交换和分离。 二、实验目的： 1．使学生了解动植物的生殖细胞的形成过程。 2．通过观察动物细胞减数分裂的实验，培养学生的实验操作能力、观察能 力以及学习使用高倍显微镜和绘生物图的基本技能。 3．通过观察植物细胞有丝分裂实验的操作、记录，培养学生实事求是的科 学态度和认真严谨的科学精神。 三、实验材料： 短角斑腿蝗精巢。 四、实验器具和药品 3、用具：显微镜、染色液、石蜡、玻片、刀片、镊子、酒精灯、培养皿、烧杯 4、药品：无水乙醇、冰醋酸、洋红、甘油、松香、石蜡 卡诺固定液：3 份 95％酒精与 1 份冰醋酸配制而成。把根尖投入盛有固定液 的容器内，盖上盖子固定 12～24 小时，然后从固定液中取出，用 90％酒精漂洗， 最后放入 70％酒精中保存，备用。 龙胆紫溶液：将 0.5 克龙胆紫溶解在 100 毫升，2％醋酸溶液中配制成 0.5％ 龙胆紫溶液。 醋酸洋红溶液：将 1 克洋红与 100 毫升冰醋酸混合后煮沸，煮时可加锈铁钉 一枚，略具铁质的 1％醋酸洋红染液能增强染色效果。 五、实验步骤： 1、安装和调节普通光学显微镜、教学显微镜 2、精母细胞、四分体（？）、精子细胞的取材和制做临时装片 3、减数分裂各时期的观察描述和汇图 减数分裂间期 第一次减数分裂前期 细线期：染色质浓缩为细长的线； 偶线期：同源染色体配对； 粗线期：形成双价体； 双线期：同源染色体开始分开，有交叉； 终变期：交叉向染色体端部移动，染色体更短粗，核膜消失） 第一次减数分裂中期：双价体排在赤道板上，纺锤体形成 第一次减数分裂后期：同源染色体分开，每一极染色体数目减半 第一次减数分裂末期：染色体解旋，呈丝状，核膜形成
间期：第二次减数分裂前期：染色体缩短变粗，开始变清晰，核膜消失第二次减数分裂中期：染色体排在赤道面上第二次减数分裂后期：两条染色单体分离，移向两极第二次减数分裂未期：染色体解旋，呈丝状，核膜形成，胞质分裂，各形成2个子细胞（每一精母细胞共形成四个子细胞）六、思考问题：1、减数分裂各时期的染色体数目变化2、不同物种中减数分裂的过程（四分体、二分体等）并不完全相同3、伴随核分裂的胞质分裂过程4、减数分裂和有丝分裂的异同七、布置作业撰写一份短角斑腿蝗精母细胞减数分裂的观察研究报告实验三果蝇的睡腺染色体观察三、实验原理：双翅目类昆虫的幼虫期的睡腺染色体很大，宽约5u，长约400u，相当于普通染色体的100-150倍。睡腺染色体经过多次复制而不分开，大约有1000-4000根染色体丝的拷贝，又称多线染色体，经染色后出现深浅不同、疏密各别的横纹。果蝇4对睡腺染色体上已确定了6000多条染色带，它们宽窄、疏密、顺序、数目恒定，有种的特异性，同种个体的是相同的，不同的种则不一样，因此果蝇多线染色体可以建立染色带及间带分布图，它们的表现和遗传学图大致平行，多数遗传学家认为这些横纹与基因有对应关系，所以果蝇睡腺染色体是研究染色体结构畸变，基因定位及基因表达（mRNA合成）的良好材料。四、实验目的1.使学生学会取出果蝇睡腺的技术和制作睡腺染色体标本的技术方法。2．观察睡腺染色体的特征：巨大、异染色质多的染色中心、横纹。3.绘多线染色体图三、实验材料：果蝇的三龄幼虫。四、实验器具和药品5、用具：显微镜、染色液、石蜡、玻片、刀片、镊子、酒精灯、培养血、烧杯6、药品：1%醋酸洋红、无水乙醇、冰醋酸、洋红、甘油、松香、石蜡、生理盐水
间期： 第二次减数分裂前期：染色体缩短变粗，开始变清晰，核膜消失 第二次减数分裂中期：染色体排在赤道面上 第二次减数分裂后期：两条染色单体分离，移向两极 第二次减数分裂末期：染色体解旋，呈丝状，核膜形成，胞质分裂，各形成 2 个子细胞（每一精母细胞共形成四个子细胞） 六、思考问题： 1、减数分裂各时期的染色体数目变化 2、不同物种中减数分裂的过程（四分体、二分体等）并不完全相同 3、伴随核分裂的胞质分裂过程 4、减数分裂和有丝分裂的异同 七、布置作业 撰写一份短角斑腿蝗精母细胞减数分裂的观察研究报告 实验三 果蝇的唾腺染色体观察 三、实验原理： 双翅目类昆虫的幼虫期的唾腺染色体很大，宽约 5u，长约 400u，相当于普 通染色体的 100-150 倍。唾腺染色体经过多次复制而不分开，大约有 1000-4000 根染色体丝的拷贝，又称多线染色体，经染色后出现深浅不同、疏密各别的横纹。 果蝇 4 对唾腺染色体上已确定了 6000 多条染色带，它们宽窄、疏密、顺序、数 目恒定，有种的特异性，同种个体的是相同的，不同的种则不一样，因此果蝇多 线染色体可以建立染色带及间带分布图，它们的表现和遗传学图大致平行，多数 遗传学家认为这些横纹与基因有对应关系，所以果蝇唾腺染色体是研究染色体结 构畸变，基因定位及基因表达(mRNA 合成)的良好材料。 四、实验目的： 1．使学生学会取出果蝇唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的技术方法。 2．观察唾腺染色体的特征：巨大、异染色质多的染色中心、横纹。 3．绘多线染色体图。 三、实验材料： 果蝇的三龄幼虫。 四、实验器具和药品 5、用具：显微镜、染色液、石蜡、玻片、刀片、镊子、酒精灯、培养皿、烧杯 6、药品：1%醋酸洋红、无水乙醇、冰醋酸、洋红、甘油、松香、石蜡、生理盐 水
五、实验步骤：1、实验准备：实验前6、7天在培养瓶中引入果蝇6对，实验前移出成虫（以后如子代有羽化成虫时，隔1一2天移出一次），酵母粉可隔几天补充一点，幼虫密度较小和营养丰富易获得睡液腺较大的幼虫。15℃一18℃温度下培养，或培养在20℃—25℃下。2、睡腺示范：这是不起眼但有时确是实验顺利进行至关重要的一步。多数学生没有见过果蝇睡腺，光凭书本和老师介绍不易建立准确形象，容易把白色脂肪体或胃腺体甚至消化道片段误认为是睡液腺。应把睡腺放在解剖镜下进行示范，由于剖取完整的唾液腺（包括两个腺体、两条分泌管及它们汇合的总管）是比较麻烦的，实验时学生可分成几组先后几次分别实验。制作了睡腺的永久制片，树胶封藏，睡腺几乎透明，轮廓不如在生理盐水中清晰可见。用石蜡沿盖片四周密封水装片，可以保存几个星期以上，只要准备一次，就能满足前后几次实验的示范要求。3、唾腺剖取：选取果蝇三龄幼虫放在载片上，加一滴0.7%生理盐求，幼虫以体型大、虫龄长的为好。将载片置双筒解剖镜下，因为虫体乳白色半透明，应使用解剖镜黑色载物台一面，利于观察操作。解剖针不宜过于尖锐，避免用力时刺破头部，拉不出睡腺，反而不便第二次拉取了。左手持解部针按在虫体后1/3处，右手持解剖针按在头部黑点状口器的后侧，下按不宜太重，主要是平稳往外用力拉，撕下头部并带出睡腺，它是位于消化道前端两侧的两个半透明的长囊状腺体。如唾腺被拉断或未被拉出，可用解剖针在虫体前部1/3处向前轻压出来。如学生辨认感到实在困难，也可滴一滴染色液，稍待几分钟在低倍显微镜下可看到较大型的细胞和核，染色时间稍长些还可看到盘曲在圆型核内的带状多线染色体，再结合睡腺外观长囊形，便可辨认。4、解离：在睡腺上加一滴INHC1，处理3分钟，这样粘附在睡腺上的脂肪体容易剔除，也有利于细胞分离和染色体伸展。之后反复用清水把HC1洗净，以免影响染色。5、染色：改良苯酚品红或蜡酸洋红染色液均可，我们用的是1%蜡酸地衣红染色液。使用时，染色20一30分钟，注意根据情况滴加染色液，勿使干燥。我们在使用过程中感觉到地衣红染液存放了1年比刚配制时效果为好。6、压片：加上盖片，在酒精灯上微热几次，覆上吸水纸，用解剖针柄轻敲几下，再以拇指垂直向下压片，用力力度可以试着掌握，以细胞核被压破，染色体伸展而不破碎为限。为了避免一次压片失败又需重新剖取和染色，可将两条染色的睡腺用解部针共分成4份分装在几个载片上。压片后在低倍显微镜下检查，如染色体已破碎就需要重新压制；如核未破，染色体仍包裹核内，可重新用力压片或用左手姆、食指按住盖片的两角，再用右手食指指端垂直向下敲击盖片。用手指敲击容易感觉和掌握力度。注意压片过程中盖片不可搓动。制好装片就可以进行观察了。五、布置作业绘制果蝇睡腺染色体图
五、实验步骤： 1、实验准备：实验前 6、7 天在培养瓶中引入果蝇 6 对，实验前移出成虫(以 后如子代有羽化成虫时，隔 1—2 天移出一次)，酵母粉可隔几天补充一点，幼虫 密度较小和营养丰富易获得唾液腺较大的幼虫。15 ℃—18 ℃温度下培养，或培 养在 20℃—25℃下。 2、唾腺示范：这是不起眼但有时确是实验顺利进行至关重要的一步。多数 学生没有见过果蝇唾腺，光凭书本和老师介绍不易建立准确形象，容易把白色脂 肪体或胃腺体甚至消化道片段误认为是唾液腺。应把唾腺放在解剖镜下进行示 范，由于剖取完整的唾液腺(包括两个腺体、两条分泌管及它们汇合的总管)是比 较麻烦的，实验时学生可分成几组先后几次分别实验。制作了唾腺的永久制片， 树胶封藏，唾腺几乎透明，轮廓不如在生理盐水中清晰可见。用石蜡沿盖片四周 密封水装片，可以保存几个星期以上，只要准备一次，就能满足前后几次实验的 示范要求。 3、唾腺剖取：选取果蝇三龄幼虫放在载片上，加一滴 0.7％生理盐求，幼 虫以体型大、虫龄长的为好。将载片置双筒解剖镜下，因为虫体乳白色半透明， 应使用解剖镜黑色载物台一面，利于观察操作。解剖针不宜过于尖锐，避免用力 时刺破头部，拉不出唾腺，反而不便第二次拉取了。左手持解剖针按在虫体后 1/3 处，右手持解剖针按在头部黑点状口器的后侧，下按不宜太重，主要是平稳 往外用力拉，撕下头部并带出唾腺，它是位于消化道前端两侧的两个半透明的长 囊状腺体。如唾腺被拉断或未被拉出，可用解剖针在虫体前部 1/3 处向前轻压出 来。如学生辨认感到实在困难，也可滴一滴染色液，稍待几分钟在低倍显微镜下 可看到较大型的细胞和核，染色时间稍长些还可看到盘曲在圆型核内的带状多线 染色体，再结合唾腺外观长囊形，便可辨认。 4、解离：在唾腺上加一滴 INHCl，处理 3 分钟，这样粘附在唾腺上的脂肪 体容易剔除，也有利于细胞分离和染色体伸展。之后反复用清水把 HCl 洗净，以 免影响染色。 5、染色：改良苯酚品红或蜡酸洋红染色液均可，我们用的是 1％蜡酸地衣 红染色液。使用时，染色 20—30 分钟，注意根据情况滴加染色液，勿使干燥。 我们在使用过程中感觉到地衣红染液存放了 1 年比刚配制时效果为好。 6、压片：加上盖片，在酒精灯上微热几次，覆上吸水纸，用解剖针柄轻敲 几下，再以拇指垂直向下压片，用力力度可以试着掌握，以细胞核被压破，染色 体伸展而不破碎为限。为了避免一次压片失败又需重新剖取和染色，可将两条染 色的唾腺用解剖针共分成 4 份分装在几个载片上。压片后在低倍显微镜下检查， 如染色体已破碎就需要重新压制；如核未破，染色体仍包裹核内，可重新用力压 片或用左手姆、食指按住盖片的两角，再用右手食指指端垂直向下敲击盖片。用 手指敲击容易感觉和掌握力度。注意压片过程中盖片不可搓动。制好装片就可以 进行观察了。 五、布置作业 绘制果蝇唾腺染色体图
实验四植物DNA的提取实验原理植物细胞经温和裂解后，去污剂CTAB（十六烷剂三甲基溴化铵）可以和DNA结合，溶解于高盐溶液中。然后用氯仿异戊醇抽提和离心，可以除去蛋白质等杂质。再用异丙醇在低盐溶液中可以将DNA沉淀析出。实验目的二1．使学生学会分子生物学的一些基本操作2.使学生学会DNA的分离提纯技术3．使学生学会缓冲溶液的配制及离心机等实验仪器的使用实验材料三、水稻幼苗、玉米种子萌芽的胚四、实验仪器和药品1.仪器：离心机、水浴锅、endorph管、枪头、手套、取样器、高压灭菌锅、PH计、烧杯2.药品：液氮、SDS、CTAB、氯仿、异丙醇、无水酒精、RNA酶、EDTA2XCTAB提取缓冲液：2%(W/v）CTAB,100mMTris-HC1(pH8.0)，20mMEDTA(pH8.0)，1.4MNaC1,1%(W/v)PVP-400,40mMB-巯基乙醇。TE缓冲液（pH8.0）：10mMTris-HC1,1mMEDTA。五、技术路线0.1克植物材料（用液氮研磨）加800ul2XCTAB提取液研磨，转入2.0ml离心管65℃，温育10-60min★冷却至室温，加等体积（600ul)氯仿异戊醇10000转/分，10min取上清液，加0.7体积异丙醇（约600ul)★6000转/分，3min★沉淀为DNA，加1ml70%乙醇清洗中倒去乙醇，待干后加200ulTE缓冲液溶解，-20℃保存六、操作步骤1.取1-2粒玉米胚，用蒸馏水洗净，放研钵中加800ul65℃预热的2XCTAB提取液，充分研磨
实验四 植物 DNA 的提取 一、 实验原理 植物细胞经温和裂解后，去污剂 CTAB（十六烷剂三甲基溴化铵）可以和 DNA 结合，溶解于高盐溶液中。然后用氯仿异戊醇抽提和离心，可以除去蛋白质等杂 质。再用异丙醇在低盐溶液中可以将 DNA 沉淀析出。 二、 实验目的 1．使学生学会分子生物学的一些基本操作 2．使学生学会 DNA 的分离提纯技术 3．使学生学会缓冲溶液的配制及离心机等实验仪器的使用 三、 实验材料 水稻幼苗、玉米种子萌芽的胚 四、实验仪器和药品 1．仪器：离心机、水浴锅、endorph 管、枪头、手套、取样器、高压灭菌 锅、PH 计、烧杯 2．药品：液氮、SDS、CTAB、氯仿、异丙醇、无水酒精、RNA 酶、EDTA 2X CTAB 提取缓冲液：2%(W/v) CTAB,100mM Tris-HCl(pH8.0),20mM EDTA(pH8.0),1.4M NaCl,1%(W/v)PVP-400,40mM ß-巯基乙醇。 TE 缓冲液（pH8.0）:10mM Tris-HCl,1mM EDTA。 五、技术路线 0.1 克植物材料(用液氮研磨) 加 800ul 2XCTAB 提取液 研磨,转入 2.0ml 离心管 65 oC,温育 10-60min 冷却至室温,加等体积(600ul)氯仿异戊醇 10000 转/分,10min 取上清液,加 0.7 体积异丙醇(约 600ul) 6000 转/分,3min 沉淀为 DNA,加 1ml 70%乙醇清洗 倒去乙醇,待干后加 200ul TE 缓冲液溶解,-20 OC 保存 六、操作步骤 1. 取 1-2 粒玉米胚，用蒸馏水洗净，放研钵中加 800ul 65 oC 预热的 2XCTAB 提取液，充分研磨
2．将粗提液装入2.0ml的离心管中，置65℃水浴锅中温育10-60min，间或轻摇离心管。3.将离心管取出，冷却至室温，加入等体积（约800ul）氯仿：异戊醇（24：1）（氯仿是有机溶剂，有毒，小心，不要弄到桌面或枪上）。4.将离心管上下颠倒几次，装入离心机中（注意平衡，再低速启动，慢慢加速），10000转/分，10分钟。5．缓慢吸取上清夜（不要吸到中间层的杂质），转入另一离心管（如杂质较多，可重复第3-4步骤）。再加入0.7体积（约600ul）异丙醇，轻轻颠倒几次，可见白色的DNA絮状沉淀。6.将离心管在6000转/分，离心3min。弃上清液。7.将离心管中加入1m170%的乙醇清洗，然后倒出乙醇。8.待DNA在室温中干后，加200u1TE或双蒸水，-20℃冰箱中保存。主要参考文献：《精编分子生物学实验指南》，颜子颖和王海林译，P37-38实验五DNA浓度的测定五、实验原理：测定DNA浓度的方法有两种，即利用分光光度计法测定DNA的紫外光吸收值；另一种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的强度来计算核酸的含量。紫外光吸收法：因为组成核酸的碱基（G，A，T,C）在260nm处具有强吸收峰，所以通过测定260Onm的吸收峰即可对DNA进行定量。但有时也会因为所处溶液的pH值不同而导致吸光系数的不同。因此，一般在中性pH值左右的环境中进行测定。这种方法常用于测定比较纯的样品。溴化乙锭荧光强度法：当DNA含量很低以及样品中杂质含量高时，会影响紫外光吸收值的测定，这时，可以采用测定嵌入DNA中漠化乙锭分子受紫外光激发而发射出的荧光强度，因为这种荧光的强度与DNA总质量数成正比。0六、实验目的：通过DNA的提取、测定，学习用碱变性法提取质粒DNA，了解用分光光度计测定DNA含量的方法。三、实验材料：上次（实验四）提取的玉米DNA母液。四、实验器具和药品1.用具：7522紫外分光光度计、取样器2.药品：双蒸馏水、TE五、实验步骤：
2. 将粗提液装入 2.0ml 的离心管中，置 65 oC 水浴锅中温育 10-60min,间或 轻摇离心管。 3. 将离心管取出，冷却至室温，加入等体积（约 800ul）氯仿：异戊醇（24： 1）（氯仿是有机溶剂，有毒，小心，不要弄到桌面或枪上）。 4. 将离心管上下颠倒几次，装入离心机中（注意平衡，再低速启动，慢慢 加速），10000 转/分，10 分钟。 5. 缓慢吸取上清夜（不要吸到中间层的杂质），转入另一离心管（如杂质较 多，可重复第 3-4 步骤）。再加入 0.7 体积（约 600ul）异丙醇，轻轻颠 倒几次，可见白色的 DNA 絮状沉淀。 6. 将离心管在 6000 转/分，离心 3min。弃上清液。 7. 将离心管中加入 1ml70%的乙醇清洗，然后倒出乙醇。 8. 待 DNA 在室温中干后，加 200ulTE 或双蒸水，-20 oC 冰箱中保存。 主要参考文献：《精编分子生物学实验指南》，颜子颖和王海林译，P37-38. 实验五 DNA 浓度的测定 五、实验原理： 测定DNA浓度的方法有两种，即利用分光光度计法测定DNA的紫外光吸收值； 另一种方法是测定样品中溴化乙锭发射的荧光的强度来计算核酸的含量。 紫外光吸收法：因为组成核酸的碱基(G,A,T,C）在 260nm 处具有强吸收峰， 所以通过测定 260nm 的吸收峰即可对 DNA 进行定量。但有时也会因为所处溶液的 pH 值不同而导致吸光系数的不同。因此，一般在中性 pH 值左右的环境中进行测 定。这种方法常用于测定比较纯的样品。 溴化乙锭荧光强度法：当 DNA 含量很低以及样品中杂质含量高时，会影响紫 外光吸收值的测定，这时，可以采用测定嵌入 DNA 中溴化乙锭分子受紫外光激发 而发射出的荧光强度，因为这种荧光的强度与 DNA 总质量数成正比。 。 六、实验目的： 通过 DNA 的提取、测定，学习用碱变性法提取质粒 DNA， 了解用分光光度 计测定 DNA 含量的方法。 三、实验材料： 上次（实验四）提取的玉米 DNA 母液。 四、实验器具和药品 1．用具：7522 紫外分光光度计、取样器 2．药品：双蒸馏水、TE 五、实验步骤：
1.讲解和练习分光光度计的使用方法2.取20ul提取的核DNA，加入1980u1蒸馏水对待测DNA样品做1:100（或更高倍数的稀释）；3.蒸馏水作为空白，在波长260nm、280nm处调节紫外分光光度计读数至零。4.加入DNA稀释液，测定260nm及280nm的吸收值。260nm读数用于计算样品中核酸的浓度，OD260值为1相当于约50μg/ml双链DNA，33ug/ml单链。可根据在260nm以及在280nm的读数的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度。一般DNA的纯品，其比值为1.8，低于此值说明有蛋白质或其它杂质的污染。5.记录OD值，通过计算确定DNA浓度或纯度，公式如下：dsDNA（μg/ml）=50×（OD260）×稀释倍数六、布置作业计算出你所提取的DNA的浓度，并分析其纯度如何，为什么？实验六果蝇单因子遗传实验七、实验原理：-对基因在杂合状态中保持相对的独立性，在配子形成时，等位基因分离到不同的配子中去。理论上配子分离比是1：1，F2基因型分离比是1：2：1，若完全显性，则F2表型分离比是3：1。这就是分离定律。八、实验目的：1.理解分离定律的原理。2.掌握果蝇的杂交技术。3.记录交配结果和掌握统计处理方法。三、实验材料：黑腹果蝇（Drosophilamelanogaster）品系1.长翅果蝇+／+2.残翅果蝇vg/vg四、实验器具和药品1.用具：麻醉瓶、白瓷板、海绵、放大镜、毛笔、镊子、培养瓶。2.药品：乙醚、玉米粉、琼脂、蔗糖、酵母粉、丙酸。五、实验步骤：1.性状特征：野生型果蝇的双翅是长翅，长翅对残翅完全显性。选野生型果蝇为亲本，做正交和反交组合，雌蝇在实验前2一3天收集处女蝇。雌雄各挑出5－6只，放入杂交瓶中杂交2．交配方式：选野生型果蝇为亲本，做正交和反交组合，雌蝇在实验前2
1．讲解和练习分光光度计的使用方法 2．取 20l 提取的核 DNA，加入 1980l 蒸馏水对待测 DNA 样品做 1:100(或 更高倍数的稀释); 3．蒸馏水作为空白,在波长 260nm、280nm 处调节紫外分光光度计读数至零。 4．加入 DNA 稀释液，测定 260nm 及 280nm 的吸收值。260nm 读数用于计算 样品中核酸的浓度，OD260 值为 1 相当于约 50g /ml 双链 DNA，33g /ml 单链。 可根据在 260nm 以及在 280nm 的读数的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度。 一般 DNA 的纯品，其比值为 1.8，低于此值说明有蛋白质或其它杂质的污染。 5．记录 OD 值，通过计算确定 DNA 浓度或纯度，公式如下: dsDNA（g /ml）=50×(OD260) × 稀释倍数 六、布置作业 计算出你所提取的 DNA 的浓度，并分析其纯度如何，为什么？ 实验六 果蝇单因子遗传实验 七、实验原理： 一对基因在杂合状态中保持相对的独立性，在配子形成时，等位基因分离到 不同的配子中去。理论上配子分离比是 1：1，F2 基因型分离比是 1：2：1，若 完全显性，则 F2 表型分离比是 3：1。这就是分离定律。 八、实验目的： 1．理解分离定律的原理。 2．掌握果蝇的杂交技术。 3．记录交配结果和掌握统计处理方法。 三、实验材料： 黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）品系 １．长翅果蝇 ＋／＋ ２．残翅果蝇 vg/vg 四、实验器具和药品 1．用具：麻醉瓶、白瓷板、海绵、放大镜、毛笔、镊子、培养瓶。 2．药品：乙醚、玉米粉、琼脂、蔗糖、酵母粉、丙酸。 五、实验步骤： 1．性状特征：野生型果蝇的双翅是长翅，长翅对残翅完全显性。选野生型 果蝇为亲本，做正交和反交组合，雌蝇在实验前２－３天收集处女蝇。雌雄各挑 出５－６只，放入杂交瓶中杂交 2．交配方式：选野生型果蝇为亲本，做正交和反交组合，雌蝇在实验前２