实验1显微镜油镜的使用和微生物制片与形态观察山东理工大学生命科学学院微生物学教研组2019.03
实验1 显微镜油镜的使用和微生物制片 与形态观察 山东理工大学生命科学学院 微生物学教研组 2019.03 1
提纲1.实验目的2.实验原理3.实验材料4.实验步骤5．注意事项
提纲 2 1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验材料 4. 实验步骤 5. 注意事项
1、实验目的复习普通光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法；学习并掌握油镜的工作原理和使用方法；学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术；掌握利用光学显微镜观察细菌和霉菌的基本形态特征
1、实验目的 3 • 复习普通光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法； • 学习并掌握油镜的工作原理和使用方法； • 学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术； • 掌握利用光学显微镜观察细菌和霉菌的基本形态特征
2、实验原理一2.1油镜使用目间距调节目镜复习：显微镜的结构、原理和使用方法物镜转换器每个显微镜配有不同倍数的物镜。物镜镜臂标本夹放大倍数有4*、10*、20*40*、100*。载物台聚光镜虹彩光圈光圈调节器以前用的物镜4*、10*、40*，玻片和物镜之玻片夹推进器电源开关间距离比较远，它们之间的介质是空气。干光源细调节器燥物镜粗调节器镜摩观察微生物，需要更大放大倍数的物镜（100*)
4 复习：显微镜的结构、原理和使用方法 2、实验原理— 2.1油镜使用 每个显微镜配有不同倍数的物镜。 放大倍数有4*、10*、20*、40*、 100*。 以前用的物镜4* 、10*、40*，玻片和物镜之 间距离比较远，它们之间的介质是空气。干 燥物镜 观察微生物，需要更大放大倍数的物镜 （100*）
2、实验原理--2.1油镜使用油镜的概念：观察微生物，需要更大放大倍数的100*物镜，为了使物像更清晰，需要在载玻片和镜头之间滴加镜油观察过程中，玻片和镜头之间的介质不是空气，是镜油，使视物清晰如图，玻片与镜头几乎就挨上了100*物镜称为油镜。相对于燥加的这滴油正好占据了他们之间的空气物镜称为油浸物镜
5 油镜的概念： 观察微生物，需要更大放大倍数的 100*物镜，为了使物像更清晰，需 要在载玻片和镜头之间滴加镜油， 观察过程中，玻片和镜头之间的介 质不是空气，是镜油，使视物清晰 ， 100*物镜称为油镜。相对干燥 物镜称为油浸物镜 2、实验原理-2.1油镜使用 如图，玻片与镜头几乎就挨上了， 加的这滴油正好占据了他们之间的空气
2、实验原理--2.1油镜使用为什么油镜需要在载玻片和镜头之间滴加镜油？提高显微镜的分辨率显微镜的分辨率（resolution）或分辨力（resolutionpower）是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。最小可分辨瓣距离越小分辨率越高。增加照明亮度
6 为什么油镜需要在载玻片和镜头之间滴加镜油？ 2、实验原理-2.1油镜使用 提高显微镜的分辨率 显微镜的分辨率（resolution）或分辨力（resolution power） 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。最小可分辨距离越小， 分辨率越高。 增加照明亮度
2、实验原理--2.1油镜使用为什么油镜需要在载玻片和镜头之间滴加镜油？2.1.1提高显微镜的分辨率分辨率=0.5入/NA=0.5入/（n·sine式中：为光源光波波长，光学显微镜的光源波长范围（400~700nm）18leTTMTR2NA为物镜的数值孔径值。而数值孔径值则取决物镜的光线入射角图1-2于玻片与物镜之间介质的折射率n和物镜的镜口物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成的角度角，可表示为：NA=n·sine镜口角（等于镜口角的一半=光轴和在外沿光线的夹角）
镜口角 为什么油镜需要在载玻片和镜头之间滴加镜油？ 2、实验原理-2.1油镜使用 2.1.1 提高显微镜的分辨率 分辨率=0.5 λ /NA= 0.5 λ / （n • sinθ ） 式中：λ为光源光波波长，光学显微镜的光源波 长范围（400~700 nm） NA为物镜的数值孔径值。而数值孔径值则取决 于玻片与物镜之间介质的折射率n 和物镜的镜口 角，可表示为：NA = n • sinθ （θ 等于镜口角的一半 = 光轴和在外沿光线的夹角）
2、实验原理--2.1油镜使用2.1.1增加显微镜的分瓣率NA - n. sine为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工香柏油#=1.52空气1.00作距离，镜口角一般最大120°载玻片n=1.52而n为介质折射率，由干香柏油（石蜡油）的折射空气=1.00率（1.4~1.5）比空气和水（分别为1.0和1.33）高干燥物镜与油浸系统因此以香柏油（石蜡油）作为镜头与玻片之间介质图1-3镜光线通路的油镜所能达到的数值孔径值（NA一般在1.2~1.4）要高于低倍镜、高倍镜（NA都低于1.O）空气水介质液体石蜡香柏油1折射率1.331.5151.467
8 2、实验原理-2.1油镜使用 2.1.1增加显微镜的分辨率 NA = n • sinθ θ为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工 作距离，镜口角一般最大120° 。 而n为介质折射率，由于香柏油（石蜡油）的折射 率（1.4~1.5）比空气和水（分别为1.0和1.33）高， 因此以香柏油（石蜡油）作为镜头与玻片之间介质 的油镜所能达到的数值孔径值（NA一般在1.2~1.4） 要高于低倍镜、高倍镜（NA都低于1.0）。 介质 空气 水 香柏油 液体石蜡 折射率 1 1.33 1.515 1.467
2、实验原理--2.1油镜使用2.1.2增加照明亮度，油镜放大倍数可达100×，所需要的光照度却很大。从承载标本的玻片透来的光线，因介质密度不同香柏油n=1.52空气1=1.00（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因载玻片=1.52折射或反射，不能进入镜头。镜头与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.52）空气片=1.00相仿的镜油，有效减少折射和反射，增加了视野的干燥物镜与油漫系统图1-3进光量，从而使物象更加清晰镜光线通路空气水介质香柏油液体石蜡折射率11.331.5151.467
9 2.1.2增加照明亮度 • 油镜放大倍数可达100×，所需要的光照度却很大。 • 从承载标本的玻片透来的光线，因介质密度不同 （从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因 折射或反射，不能进入镜头。 • 镜头与玻片之间加入与玻璃的折射率（n = 1.52） 相仿的镜油，有效减少折射和反射，增加了视野的 进光量，从而使物象更加清晰。 介质 空气 水 香柏油 液体石蜡 折射率 1 1.33 1.515 1.467 2、实验原理-2.1油镜使用
油镜的原理：增加光亮度，提高分辨率d=0.5入/NA=0.5入/ (n·sin0)香柏油=1.52空气=1.00载玻片n=1.52空气=1.00T2图1一2物镜的光线入射角3干燥物镜与油浸系统图13镜光线通路10
10 油镜的原理：增加光亮度，提高分辨率 d = 0.5 λ / NA = 0.5λ / (n • sinθ)