实验六细菌的生理生化试验山东理工大学生命科学学院微生物学教研组2019年4月4/5/2025
实验六 细菌的生理生化试验 山东理工大学生命科学学院 微生物学教研组 2019年4月 4/5/2025 1
提纲1 实验目的2实验原理3实验材料4 实验步骤5注意事项4/5/2025
提 纲 2 1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验步骤 5 注意事项 4/5/2025
1实验目的1、巩固微生物无菌接种技术2、了解细菌鉴定中常用的生理生化反应原理和方法3、学习利用生理生化反应鉴别菌种4/5/2025
1、巩固微生物无菌接种技术 2、了解细菌鉴定中常用的生理生化反应 原理和方法 3、学习利用生理生化反应鉴别菌种 1 实验目的 4/5/2025 3
2实验原理微生物代谢与其他生物代谢有许多相似之处，也有不同之处。微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性因此使微生物在自然界的物质循环中起重要的作用同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反应作用作为重要依据。4/5/2025
◆ 微生物代谢与其他生物代谢有许多相似之处，也有 不同之处。 ◆ 微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性， 因此使微生物在自然界的物质循环中起重要的作用， 同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会 与途径。 ◆ 人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生 化反应作用作为重要依据。 2 实验原理 4/5/2025 4
（1）淀粉水解试验微生物对大分子物质如淀粉等不能直接利用，必需衣靠胞外酶将大分子分解后才能利用淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精、双糖和单糖，加入碘液后，在菌落周围产生变色圈4/5/2025
（1）淀粉水解试验 ◆ 微生物对大分子物质如淀粉等不能直接利用，必需 依靠胞外酶将大分子分解后才能利用。 ◆ 淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精、双糖和单糖， 加入碘液后，在菌落周围产生变色圈。 4/5/2025 5
（2）糖发酵试验糖发酵产生丙酮酸，丙酮酸裂解生成乙酰CoA与甲酸。甲酸在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H,和CO2一产酸产气。缺少甲酸氢解酶一产酸不产气。wa田+?4/5/2025
（2）糖发酵试验 ◆ 糖发酵产生丙酮酸，丙酮酸裂解生成乙酰CoA与 甲酸。 ◆ 甲酸在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H2和 CO2—— 产酸产气。 ◆ 缺少甲酸氢解酶——产酸不产气。 4/5/2025 6
（3）甲基红试验（MR试验）微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸→pH下降→加入甲基红指示剂→显红色。4/5/2025
（3）甲基红试验（MR试验） ◆ 微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸 → pH下 降→ 加入甲基红指示剂→ 显红色。 4/5/2025 7
（4）伏普试验（V.P.实验）CHCH,CH,CHOCO(O:CHOHCO211浦喆糖2C0COHCOOHCHOHCHOHCOOHCH.CH,CH,丙耐酸乙乳酸乙能甲基甲醇2.3-丁二醇toH2HCH,COcoCH,二乙能CHOC-CHNH,+HN=HN=+2HO0NH,N-C-CHCH服基二乙酰红色化合物4/5/2025
（4）伏普试验（V.P.实验） 4/5/2025 8
（5）吲哚试验哚试验用来检测哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白陈中的色氨酸产生哚和丙酮酸。 哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰哚4/5/2025
吲哚试验用来检测吲哚的产生。有些细 菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨 酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨 基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。 （5）吲哚试验 4/5/2025 9
3实验材料（1）培养基：淀粉培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白陈水培养基、蛋白水培养基（每组配制1种培养基，供4个组使用)。(2）指示剂：卢戈碘液、甲基红指示剂、400g/LKOH、50g/Lα-萘酚、乙醚、哚试剂。（3）实验菌种：枯草芽杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌绿脓杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌。（4）实验器具：立式高压蒸汽灭菌锅，瓷量杯，量筒，玻璃棒，天平，药匙，pH试纸，试管，德汉小管，胶塞，锥形瓶，封口膜，平血，报纸，马克笔，线绳，皮筋，胶管，10mL注射器、超净工作台、恒温培养箱。4/5/2025
（1）培养基：淀粉培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水 培养基、蛋白胨水培养基（每组配制1种培养基，供4个组使 用）。 （2）指示剂：卢戈碘液、甲基红指示剂、400g/L KOH、50g/L -萘酚、乙醚、吲哚试剂。 （3）实验菌种： 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 绿脓杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌。 （4）实验器具： 立式高压蒸汽灭菌锅，瓷量杯，量筒，玻 璃棒，天平，药匙，pH试纸，试管，德汉小管，胶塞，锥 形瓶，封口膜，平皿，报纸，马克笔，线绳，皮筋，胶管， 10mL注射器、超净工作台、恒温培养箱。 3 实验材料 4/5/2025 10