实验5微生物的分离与纯化山东理工大学生命科学学院微生物教研组2019.04
实验5 微生物的分离 与纯化 山东理工大学生命科学学院 微生物教研组 2019. 04
目录三 类糖表三、实健材四、实验步骤五、实验报告
目录
目的要求1.掌握倒平板的方法2.掌握常见微生物分离纯化操作技术3.学习平板菌落计数的基本原理和方法
1．掌握倒平板的方法 2. 掌握常见微生物分离纯化操作技术 3．学习平板菌落计数的基本原理和方法 一、目的要求
二、实验原理1从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。本实验采用平板分离法：1选择合适的选择培养基。2）通过稀释倒平板和平板划线技术得到单菌落。2.平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，取一定量的稀释液涂布接种在平板上，经过培养，平板上出现的单个菌落，即为一个菌落形成单位（colony-formingunits,CFU)
二、实验原理 1.从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微 生物的过程称为微生物的分离与纯化。 本实验采用平板分离法： 1)选择合适的选择培养基。 2)通过稀释倒平板和平板划线技术得到单菌落。 2.平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，取一 定量的稀释液涂布接种在平板上，经过培养，平板上出 现 的 单 个 菌 落 ， 即 为 一 个 菌 落 形 成 单 位 （ colonyforming units, CFU）
三、实验器材样品：地表以下10cm左右处采集的新鲜土壤。培养基：灭菌的牛肉膏蛋白陈培养基、高氏一号培养基、马丁氏培养基、麦芽汁培养基。无菌水：带有玻璃珠装有90mL无菌水三角瓶、装有9mL无菌水的试管。其它：无菌培养、无菌吸管、注射器、无菌三角玻棒、移液器、微波炉电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、打火机等
三、实验器材 样品： 地表以下10 cm左右处采集的新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号 培养基、马丁氏培养基、麦芽汁培养基。 无菌水：带有玻璃珠装有90 mL无菌水三角瓶、装 有9 mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、注射器、无菌三 角玻棒、移液器、微波炉电子天平、记号笔、接 种环、酒精灯、打火机等
四、实验步骤土壤中微生物的分离、纯化及菌落计数（10套培养血/组。每组分离一种微生物）1.制备土壤稀释液称取土样10g.放入盛有90m无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中。振摇混匀。2.10倍梯度稀释用无菌吸管吸取上述土壤稀释液1ml加入盛有9ml无菌水的试管中充分混匀，然后再用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入盛有9ml无菌水的另一支试管中充分混匀，以次类推制成10-3、10-4、10-8不同稀释度的溶液
四、实验步骤 1．制备土壤稀释液 称取土样10 g，放入盛有90 ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇混匀。 2．10倍梯度稀释 用无菌吸管吸取上述土壤稀释液 1 ml加入盛有9 ml无菌水的试管中充分混匀，然 后再用无菌吸管从此试管中吸取1 ml加入盛有9 ml无菌水的另一支试管中充分混匀，以次类推制 成10-3 、10-4 、 .10-8不同稀释度的溶液。 土壤中微生物的分离、纯化及菌落计数 （10套培养皿/组，每组分离一种微生物）
不同种类微生物分离培养条件培养样品来源分离对象分离方法稀释度培养温度/℃培养基名称时间/d肉膏蛋白10-6,10-7土样细菌稀释分离30~371~2培养基高氏合成土样10-3,10-428放线菌稀释分离3~51号培养基土样番菌稀释分离10-3,10-43~5马丁氏培养基28~30土样酵母菌稀释分离10-3,10-43~5麦芽汁培养基28~30
样品来源 分离对象 分离方法 稀释度 培养基名称 培养温度/℃ 培养 时间/d 土样 细菌 稀释分离 10-6 ，10-7 肉膏蛋白胨 培养基 30～37 1～2 土样 放线菌 稀释分离 10-3 ，10-4 高氏合成 1号培养基 28 3～5 土样 霉菌 稀释分离 10-3 ，10-4 马丁氏培养基 28～30 3～5 土样 酵母菌 稀释分离 10-3 ，10-4 麦芽汁培养基 28～30 3～5 不同种类微生物分离培养条件
（一）平板涂布法吸取稀释液取一吸管，以无菌操作法分别吸取适宜稀释度的土壤悬液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。涂布平板用无菌涂布棒将稀释液在培养基上充分混匀铺平倒置（霉菌平板正置）于恒温箱培养。计算出每克土壤中细菌的数量。即用某适宜稀释梯度的3套培养血内的菌落平均数乘以该培养血接种液的稀释倍数即得。挑取若千单菌落，进行划线纯化分离
吸取稀释液 取一吸管，以无菌操作法分别吸取适宜稀释度的土 壤悬液0.1 mL，加在已制好的平板培养基上。 涂布平板 用无菌涂布棒将稀释液在培养基上充分混匀铺平， 倒置（霉菌平板正置）于恒温箱培养。 计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某适宜稀释梯度的3套培养皿内的菌落平均数乘 以该培养皿接种液的稀释倍数即得。 挑取若干单菌落，进行划线纯化分离。 （一）平板涂布法
1mL1mlmlml涂布分离9mL无菌水0.1ml10g土样90mL无南水104103100100010样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图
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