《食品微生物学》课程教学实验指导书（共十三个实验）.pdf_大学文库

实验一普通光学显微镜的使用和维护微生物的个体微小，必须借助显微镜才能看到。因此，学会使用显微镜对学习微生物学和从事微生物学的科研和生产都是十分重要的。显微镜可分为普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等不同类型。本章着重介绍普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜的结构原理和使用方法c一、实验目的1：了解显微镜的结构及油浸镜的工作原理。2.掌握显微镜的基本使用技术。3.学会利用油镜观察细菌的基本形态，掌握油镜的保养方法二、实验材料普通光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的染色涂片。三、光学显微镜的构造显微镜是一种高度放大的光学仪器，它的种类很多，根据实验目的的不同，可分别选用普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。在微生物的一般形态观察中，普通光学显微镜最为常用，它的主要构造包括机械和光学两部分。普通光学显微镜的构造如图1一1所示。（一）机械部分包括镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器、粗调螺旋和细调螺旋、推进器、聚光器、升降螺旋等部件。1.镜座显微镜的基座，用以支撑整个显微镜。2.镜臂携带或移动显微镜的把手，上连镜筒、下连镜座，用以支撑镜筒，与镜座连接处为一关节，可使镜身倾斜。3.镜筒由金属制成的中空圆筒，上端放置目镜，下端连接转换器，形成目镜与物镜间的暗室。4.物镜转换器由两个金属圆盘叠合而成，上有-133～4个安装物镜的螺旋口，可依物镜放大倍数高低，图1-1显微镜的结构顺序安装3～4个物镜。根据需要，可转动转换器将1.粗调螺旋2.细调螺旋3.镜臂4.推进器其中的某一物镜和镜筒接通，与镜筒上方的接目镜5.升降螺旋6.倾斜关节7.接目镜8.镜筒配合，构成一个放大系统。转换器的两个金属圆盘9.物镜转换器10.接目镜11.载物台12.转换中，上面那个圆盘的正后装有一个弹簧舌片，下面器13.虹彩光圈14.反光镜15.镜座那个圆盘侧面与每个物镜相应的位置各有一个小凹缝。转换物镜时必须使弹簧舌片嵌入此凹缝中，才是达到了正确的位置

实验一普通光学显微镜的使用和维护微生物的个体微小，必须借助显微镜才能看到。因此，学会使用显微镜对学习微生物学和从事微生物学的科研和生产都是十分重要的。显微镜可分为普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等不同类型。本章着重介绍普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜的结构原理和使用方法 c 一、实验目的 1. 了解显微镜的结构及油浸镜的工作原理。 2. 掌握显微镜的基本使用技术。 3. 学会利用油镜观察细菌的基本形态,掌握油镜的保养方法. 二、实验材料普通光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌的染色涂片。三、光学显微镜的构造显微镜是一种高度放大的光学仪器，它的种类很多，根据实验目的的不同，可分别选用普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜和电子显微镜。在微生物的一般形态观察中，普通光学显微镜最为常用，它的主要构造包括机械和光学两部分。普通光学显微镜的构造如图 1-1 所示。（一）机械部分包括镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器、粗调螺旋和细调螺旋、推进器、聚光器、升降螺旋等部件。 1.镜座显微镜的基座，用以支撑整个显微镜。 2.镜臂携带或移动显微镜的把手，上连镜筒、下连镜座，用以支撑镜筒，与镜座连接处为一关节，可使镜身倾斜。 3.镜筒由金属制成的中空圆筒，上端放置目镜，下端连接转换器，形成目镜与物镜间的暗室。 4.物镜转换器由两个金属圆盘叠合而成，上有 3～4 个安装物镜的螺旋口，可依物镜放大倍数高低，顺序安装 3～4 个物镜。根据需要，可转动转换器将其中的某一物镜和镜筒接通，与镜筒上方的接目镜配合，构成一个放大系统。转换器的两个金属圆盘中，上面那个圆盘的正后装有一个弹簧舌片，下面那个圆盘侧面与每个物镜相应的位置各有一个小凹缝。转换物镜时必须使弹簧舌片嵌入此凹缝中，才是达到了正确的位置。图 1-1 显微镜的结构 1.粗调螺旋 2.细调螺旋 3.镜臂 4.推进器 5.升降螺旋 6.倾斜关节 7.接目镜 8.镜筒 9.物镜转换器 10.接目镜 11.载物台 12.转换器 13.虹彩光圈 14.反光镜 15.镜座

5.载物台位于镜筒下方，呈方形，中间有孔可透过光线。台上装有推进器，用以固定或移动标本的位置，使镜检标本恰好位于视野中，有些显微镜无推进器而有一对弹簧夹为固定标本用。6.粗调螺旋和细调螺旋位于镜筒的两旁，粗调螺旋位于细调螺旋的上方。它们可使镜筒升降，目的是使被观察物与物镜的距离恰好等于物镜的工作距离。要使镜筒作较大幅度升降，可用粗调螺旋，要使之作微小的升降，则用细调螺旋。细调螺旋每转一圈，镜筒升降100μm，很多显微镜的细调螺旋上附有刻度，每转动一小格相当于升降2μm，当细调螺旋旋转到极限时，则不应继续用力旋转，而应重新调节粗调螺旋，使物镜与标本距离稍微拉开一些，然后反拧细调螺旋便可将物镜调至最适高度。7.升降螺旋聚光器升降螺旋装在载物台下面的一个可使聚光器升降的部件，用它可以调节反光镜反射出来的光线。（二）光学部分光学部分又可分为照明和放大两个系统，前者包括反光镜、聚光器和虹彩光圈，有的还有特殊的光源部件：后者包括物镜和接目镜。1.反光镜位于显微镜的最下方，有平凹两面，可以自由转动方向，其作用是将投射到它上面的光线反射到聚光器透镜的中央，穿过透镜，照明标本。当外源光线较强时应使用平面反光镜，光线较弱时应使用凹面镜。2.聚光器位于反光镜上方，由一组透镜组成。其作用是将反光镜反射来的光线聚为一束强的光锥于载玻片标本上，聚光器可根据需要上下移动调节，一般用低倍镜时应降低聚光器，用油浸镜时，聚光器应升至最高。3.虹彩光圈位于聚光镜下方，由十儿张金属薄片组成，中心部分形成圆孔，推动光圈把手，可开大或开小，用以调节射入聚光镜光线的多少，使照明达到最适当的程度。4.物镜通常称为镜头，是显微镜的重要组成部件，它不仅可以放大标本，而且具有辨晰性能。因此，它决定着显微镜的性能。一台显微镜通常有三个接物镜，一个是低倍镜（10×），一个是高倍镜（40×），这两个都是于燥系接物镜（于燥系是指接物镜与被检物之间介质是空气）还有一个是油浸系接物镜（100），简称油镜或油浸镜（油浸系是指接物镜与被检物之间的介质是某种油类物质）。三个放大镜按放大倍数顺序安装在转换器上，以便依次转换使用。接物镜的放大率可以直接通过镜头侧面刻有的放大倍数来辨认，也可由其外形来辨认，一般低倍镜物镜较短，高倍镜物镜较长，油浸镜也较长，但上面带有一圈不同颜色的线做标记。放大倍数越高的接物镜，它的焦距越小，工作距离也越小，也就是说，在观察时它与被观察物的距离越小。因此，在使用油浸镜观察时其镜头和玻片极为接近。5.接自镜通常成为自镜，位于镜筒的上端，由两块透镜组成，它只能将接物镜所造成的实像进一步放大形成虚像映入眼部，不具有辨晰能力。接目镜上刻有表示放大倍数的标记，如5×、10×、16×等。通常每台显微镜都备有几种不同放大倍数的接目镜，可根据需要选择其中的一种使用。有的接目镜为便于指示物像，镜头中央装有一条黑色细丝作为指针。四、显微镜的性能

5.载物台位于镜筒下方，呈方形，中间有孔可透过光线。台上装有推进器，用以固定或移动标本的位置，使镜检标本恰好位于视野中，有些显微镜无推进器而有一对弹簧夹为固定标本用。 6.粗调螺旋和细调螺旋位于镜筒的两旁，粗调螺旋位于细调螺旋的上方。它们可使镜筒升降，目的是使被观察物与物镜的距离恰好等于物镜的工作距离。要使镜筒作较大幅度升降，可用粗调螺旋，要使之作微小的升降，则用细调螺旋。细调螺旋每转一圈，镜筒升降 100μm，很多显微镜的细调螺旋上附有刻度，每转动一小格相当于升降 2μm，当细调螺旋旋转到极限时，则不应继续用力旋转，而应重新调节粗调螺旋，使物镜与标本距离稍微拉开一些，然后反拧细调螺旋便可将物镜调至最适高度。 7.升降螺旋聚光器升降螺旋装在载物台下面的一个可使聚光器升降的部件，用它可以调节反光镜反射出来的光线。 (二)光学部分光学部分又可分为照明和放大两个系统，前者包括反光镜、聚光器和虹彩光圈，有的还有特殊的光源部件;后者包括物镜和接目镜。 1.反光镜位于显微镜的最下方，有平凹两面，可以自由转动方向，其作用是将投射到它上面的光线反射到聚光器透镜的中央，穿过透镜，照明标本。当外源光线较强时应使用平面反光镜，光线较弱时应使用凹面镜。 2.聚光器位于反光镜上方，由一组透镜组成。其作用是将反光镜反射来的光线聚为一束强的光锥于载玻片标本上，聚光器可根据需要上下移动调节，一般用低倍镜时应降低聚光器，用油浸镜时，聚光器应升至最高。 3.虹彩光圈位于聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，中心部分形成圆孔，推动光圈把手，可开大或开小，用以调节射入聚光镜光线的多少，使照明达到最适当的程度。 4.物镜通常称为镜头，是显微镜的重要组成部件，它不仅可以放大标本，而且具有辨晰性能。因此，它决定着显微镜的性能。一台显微镜通常有三个接物镜，一个是低倍镜（10×），一个是高倍镜（40×），这两个都是干燥系接物镜（干燥系是指接物镜与被检物之间介质是空气）还有一个是油浸系接物镜（100×），简称油镜或油浸镜（油浸系是指接物镜与被检物之间的介质是某种油类物质）。三个放大镜按放大倍数顺序安装在转换器上，以便依次转换使用。接物镜的放大率可以直接通过镜头侧面刻有的放大倍数来辨认，也可由其外形来辨认，一般低倍镜物镜较短，高倍镜物镜较长，油浸镜也较长，但上面带有一圈不同颜色的线做标记。放大倍数越高的接物镜，它的焦距越小，工作距离也越小，也就是说，在观察时它与被观察物的距离越小。因此，在使用油浸镜观察时其镜头和玻片极为接近。 5.接目镜通常成为目镜，位于镜筒的上端，由两块透镜组成，它只能将接物镜所造成的实像进一步放大形成虚像映入眼部，不具有辨晰能力。接目镜上刻有表示放大倍数的标记，如 5×、10×、16×等。通常每台显微镜都备有几种不同放大倍数的接目镜，可根据需要选择其中的一种使用。有的接目镜为便于指示物像，镜头中央装有一条黑色细丝作为指针。四、显微镜的性能

显微镜的总放大倍数等于物镜放大率和目镜放大率的乘积。但显微镜性能的优劣不只是视其放大倍数的高低，而更主要的视视其辨晰细微结构的能力，即分辨率的大小。显微镜辨晰细微结构的能力可用分辨率表示，其能够辨晰的细微结构越小，则分辨率越高。分辨率的高低，首先取决于物镜的性能，若设物镜分辨出的物体两点间的最小距离为D，则：元D=-2NA式中，入为可见光的波长，平均为0.55μmNA为物镜镜口率或称开口率、数值口径。镜口率NA是物镜和被检标本间介质的折射率Ⅱ与镜口角（即入射角）的半数正弦的乘积，常以下式表示：镜口率NA=nsinα2元所以，D也可以表示为D=，2nsin(α/2)由上式可见，显微镜的分辨率与波长、介质折射率和镜口角有关。入越大，D值越大，分辨率越低：n和a越大，D值越小，分辨率越高。因此，可以通过缩短光线波长，增大介质折射率和加大镜口角来提高分辨率。紫外光显微镜和电子显微镜就是利用短波光和电子波来提高分辨率的。但普通光学显微镜用的是可见光，波长一定，平均为0.55μm，而镜口角是指物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度，理论上最大为180°，故sin（a/2)理论最大值为1（实际上镜口角度最大只能为140°），因此，试图通过缩短波长或提高镜口角来提高光学显微镜的分辨率是有限度的。只有通过提高介质的折射率来提高镜口率，从而提高其分辨率。在使用低倍镜和高倍镜时，镜头与玻片标本间的介质是空气，其折射率是1，sin（a/2)=sin70°=0.94，故其镜口率NA=1X0.94。使用油镜时，镜头与玻片标本间的介质是香柏油，香柏油的折射率为1.515，则其NA=1.515×0.94，故油镜的镜口率总是大于低倍或高倍镜的镜口率，其镜口率最大可达到1.4，所以油镜的分辨率比低倍镜或高倍镜要高的多。例如，在可见光照射下，用镜口率1.25的油镜（一般油镜的镜口角半数的正弦为0.81），能分辨出物体两点间的最短距离D=0.55/(2×1.25)=0.22μm。而且镜口率为0.65的高倍镜，能分辨出的最短距离D=0.55/(2×0.65)=0.42μm。即两点间的最小距离如果小于0.4μm，在高倍镜下即混为一点，不可辨晰，而在油镜下则清晰可见。使用某一物镜时，应配合一定镜口率的聚光镜。一般以聚光镜的镜口率大于或等于物镜的镜口率为宜，否则影响物镜的性能。由此可见，显微镜的性能不只是决定于总放大率。一般来说，显微镜的总放大率应以物镜镜口率的500～1000倍为宜，这个范围内的放大率叫有效放大率。例如，用NA1.25（100×）的物镜，其有效放大率为1250，超过此数叫无效放大率，虽用15×的目镜可放大1500倍，但对分辨率是没有任何帮助的。五、微镜的使用方法

显微镜的总放大倍数等于物镜放大率和目镜放大率的乘积。但显微镜性能的优劣不只是视其放大倍数的高低，而更主要的视视其辨晰细微结构的能力，即分辨率的大小。显微镜辨晰细微结构的能力可用分辨率表示，其能够辨晰的细微结构越小，则分辨率越高。分辨率的高低，首先取决于物镜的性能，若设物镜分辨出的物体两点间的最小距离为 D，则： D= 2NA  式中，λ为可见光的波长，平均为 0.55μm；NA 为物镜镜口率或称开口率、数值口径。镜口率 NA 是物镜和被检标本间介质的折射率 n 与镜口角（即入射角α）的半数正弦的乘积，常以下式表示：镜口率 NA=nsin 2 所以，D 也可以表示为 D= 2 sin( / 2)  n 由上式可见，显微镜的分辨率与波长、介质折射率和镜口角有关。λ越大，D 值越大，分辨率越低；n 和α越大，D 值越小，分辨率越高。因此，可以通过缩短光线波长，增大介质折射率和加大镜口角来提高分辨率。紫外光显微镜和电子显微镜就是利用短波光和电子波来提高分辨率的。但普通光学显微镜用的是可见光，波长一定，平均为 0.55μm，而镜口角是指物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度，理论上最大为 180°，故 sin (α/2)理论最大值为 1(实际上镜口角度最大只能为 140°)，因此，试图通过缩短波长或提高镜口角来提高光学显微镜的分辨率是有限度的。只有通过提高介质的折射率来提高镜口率，从而提高其分辨率。在使用低倍镜和高倍镜时，镜头与玻片标本间的介质是空气，其折射率是 1，sin(α/2)=sin70°=0.94，故其镜口率 NA=1×0.94。使用油镜时，镜头与玻片标本间的介质是香柏油，香柏油的折射率为 1.515，则其 NA=1.515×0.94，故油镜的镜口率总是大于低倍或高倍镜的镜口率，其镜口率最大可达到 1.4，所以油镜的分辨率比低倍镜或高倍镜要高的多。例如，在可见光照射下，用镜口率 1.25 的油镜(一般油镜的镜口角半数的正弦为 0.81)，能分辨出物体两点间的最短距离 D=0.55/(2×1.25)=0.22μm。而且镜口率为 0.65 的高倍镜，能分辨出的最短距离 D=0.55/(2×0.65)=0.42μm。即两点间的最小距离如果小于 0.4μm，在高倍镜下即混为一点，不可辨晰，而在油镜下则清晰可见。使用某一物镜时，应配合一定镜口率的聚光镜。一般以聚光镜的镜口率大于或等于物镜的镜口率为宜，否则影响物镜的性能。由此可见，显微镜的性能不只是决定于总放大率。一般来说，显微镜的总放大率应以物镜镜口率的 500～1000 倍为宜，这个范围内的放大率叫有效放大率。例如，用 NA1.25(100×)的物镜，其有效放大率为 1250，超过此数叫无效放大率，虽用 15×的目镜可放大 1500 倍，但对分辨率是没有任何帮助的。五、微镜的使用方法

显微镜是光学精密仪器，使用前要了解显微镜的结构及性能，然后按下列步骤仔细操作。1.取镜拿取显微镜必须一只手拿着镜臂，一只手托着镜座，保持镜座平直，以防止反光镜及接目镜滑落，置显微镜于平稳的实验台上。2.姿势镜检者姿势要端正，一般用左眼观察，右眼进行绘图和记录，两眼应同时静开，以减少疲劳。3.对光正确的照明是获得良好检查效果的前提条件。晴天对着窗户的散射阳光是很好的光源，但应避免强烈的直射光，以防止损坏显微镜的光学系统，在光线不足时，可用日光灯或特制的显微镜灯作光源。普通灯泡因有黄色光影响观察，需在聚光器下加放一块蓝色滤光片。对光的步骤是：(1)将低倍镜旋转于镜筒正下方，调节粗调螺旋，使镜头和载物台距离约1cm左右。（2）升聚光器，使其与载物台表面距离1mm左右。（3）双眼张开用左眼看目镜调节反光镜镜面角度，调节光圈，直至视野内得到最均匀最适宜的照明为止。一般染色片油镜检查时，光度宜强，可将光圈开大，聚光器上升到最高，反光镜调至最强。未染色标本，用低倍镜或高倍镜观察时，应适当地缩小光圈，下降聚光器，使光度减弱，否则光线过强不易观察。4.观察初学者应先用低倍镜观察，这是因为低倍镜视野的实际范围最大，易于发现目的物，将标本玻片放在载物台上（注意标本朝上），并使标本位于物镜的正下方，转动粗调螺旋，同时从侧面观察，待物镜下降到距标本约0.5cm时，开始由目镜观察，同时用粗调螺旋升起镜筒，直到出现物象后，改用细调螺旋，上下微微转动，存细调节焦距，直至最后获得清晰的物象为止。如此时视野里所观察到的部位不理想时，可利用推进器将最适合的部位移到视野中央。由低倍镜转换高倍镜观察时，一定要从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞，另外要用手指捏住转换器下面的金属盘使之旋转，而不得用手指捏住物镜来转动，否则长期使用后，会使光轴歪斜。调节光圈和聚光镜，使亮度适中，再仔细转动细调螺旋，调节焦距，获得清晰的物象。细菌或其他标本的细微结构，都需要用油浸镜观察，由于油浸镜的工作距离很短(0.19mm左右），故使用时必须特别小心。在低倍镜找到要观察的部位以后，将镜筒升起，在标本上加一滴香柏油，转换油镜头，从侧面注视，用粗调螺旋将镜筒小心下降，使油镜头浸入油滴，直到几乎与标本接触为止（注意切勿压在标本上，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头）。从目镜观察，先用粗调螺旋徐徐升起（只准上升镜筒，不能向下调节），当视野中有模糊的标本物像时，改用细调螺旋调节，直到标本物像清晰为止，如转动粗调螺旋已使镜头离开油镜，应重新调节，直至调到看清物像为止。5.镜检后显微镜的维护（1)油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再取一张擦镜纸，滴上少量的二甲苯，把镜头上的油擦净，最后再用一张干净擦镜纸将镜头上残留的二甲苯擦净，否则粘固透镜的胶质会被二甲苯溶解，日久镜片易移位脱落。2）下降聚光镜，打开虹彩光圈，使反光镜垂直于镜座，以免积聚灰尘

显微镜是光学精密仪器，使用前要了解显微镜的结构及性能，然后按下列步骤仔细操作。 1.取镜拿取显微镜必须一只手拿着镜臂，一只手托着镜座，保持镜座平直，以防止反光镜及接目镜滑落，置显微镜于平稳的实验台上。 2.姿势镜检者姿势要端正，一般用左眼观察，右眼进行绘图和记录，两眼应同时睁开，以减少疲劳。 3.对光正确的照明是获得良好检查效果的前提条件。晴天对着窗户的散射阳光是很好的光源，但应避免强烈的直射光，以防止损坏显微镜的光学系统，在光线不足时，可用日光灯或特制的显微镜灯作光源。普通灯泡因有黄色光影响观察，需在聚光器下加放一块蓝色滤光片。对光的步骤是: (1)将低倍镜旋转于镜筒正下方，调节粗调螺旋，使镜头和载物台距离约 1 ㎝左右。 (2)升聚光器，使其与载物台表面距离 1 ㎜左右。 (3)双眼张开用左眼看目镜调节反光镜镜面角度，调节光圈，直至视野内得到最均匀最适宜的照明为止。一般染色片油镜检查时，光度宜强，可将光圈开大，聚光器上升到最高，反光镜调至最强。未染色标本，用低倍镜或高倍镜观察时，应适当地缩小光圈，下降聚光器，使光度减弱，否则光线过强不易观察。 4.观察初学者应先用低倍镜观察，这是因为低倍镜视野的实际范围最大，易于发现目的物，将标本玻片放在载物台上(注意标本朝上)，并使标本位于物镜的正下方，转动粗调螺旋，同时从侧面观察，待物镜下降到距标本约 0.5cm 时，开始由目镜观察，同时用粗调螺旋升起镜筒，直到出现物象后，改用细调螺旋，上下微微转动，仔细调节焦距，直至最后获得清晰的物象为止。如此时视野里所观察到的部位不理想时，可利用推进器将最适合的部位移到视野中央。由低倍镜转换高倍镜观察时，一定要从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞，另外要用手指捏住转换器下面的金属盘使之旋转，而不得用手指捏住物镜来转动，否则长期使用后，会使光轴歪斜。调节光圈和聚光镜，使亮度适中，再仔细转动细调螺旋，调节焦距，获得清晰的物象。细菌或其他标本的细微结构，都需要用油浸镜观察，由于油浸镜的工作距离很短 (0.19mm 左右)，故使用时必须特别小心。在低倍镜找到要观察的部位以后，将镜筒升起，在标本上加一滴香柏油，转换油镜头，从侧面注视，用粗调螺旋将镜筒小心下降，使油镜头浸入油滴，直到几乎与标本接触为止(注意切勿压在标本上，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。从目镜观察，先用粗调螺旋徐徐升起(只准上升镜筒，不能向下调节)，当视野中有模糊的标本物像时，改用细调螺旋调节，直到标本物像清晰为止，如转动粗调螺旋已使镜头离开油镜，应重新调节，直至调到看清物像为止。 5.镜检后显微镜的维护 (1)油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再取一张擦镜纸，滴上少量的二甲苯，把镜头上的油擦净，最后再用一张干净擦镜纸将镜头上残留的二甲苯擦净，否则粘固透镜的胶质会被二甲苯溶解，日久镜片易移位脱落。 (2)下降聚光镜，打开虹彩光圈，使反光镜垂直于镜座，以免积聚灰尘

3)用纱布将显微镜各部位擦净，除去灰尘、油污、水汽，以免生锈长霉。4）使显微镜各部件恢复回原位，转动转换器，使物镜呈”八”字形叉开置于载物台上，然后将显微镜送回箱中。5）显微镜应放在干燥阴凉的地方，不要放在强烈的日光下曝晒，霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂（硅胶），如长期不用，则光学部分应卸下放在干燥箱中，以免受潮生霉。（6）显微镜应严禁与挥发药品或腐蚀性药品放在一起，如碘片、盐酸、硫酸等药品。复习思考题1．就接物镜的大小、镜头和载物台的距离两个方面，比较油镜、高倍镜和低倍镜的区别。2.转换物镜镜头时，手应按什么部位进行旋转？为什么？3.使用油镜时应注意什么？使用过后应如何保养？实验二细胞染色及形态观察一一简单染色及革兰氏染色不同类型的微生物形态和结构都不象同，每一种微生物在一定条件下保持着自已的形态特征。借助显微镜和染色技术可以辨别它们间个体形态特征上的差异，初步知道其在分类学上属于哪一类型的微生物，有时也可检验培养物的纯度或诊断疾病以及检验食品是否污染等。所以细菌染色是微生物学上的一项重要技术。细菌个体微小，而目透明，所以必须借助染色法使其着色，使菌体与视野形成明显的色差，以便于观察。染色有简单染色、革兰氏染色和特殊染色之分，本实验介绍前两类。简单染色：简单染色是仅用一种染料（如石炭酸、结晶紫或美蓝）使细菌细胞着色的染色法。这种染色方法简单，能显示细菌的形态，但不能显示菌体的内部构造或特殊构造。革兰氏染色：革兰氏染色是一种鉴别性染色方法。根据这种染色反应可以将细菌分为革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌两大类。其依据是细菌细胞壁的结构不同和通透性不同的缘故。革兰氏染色时，首先结晶紫透过细胞壁使菌体细胞着色。碘液做为媒染剂，在细胞膜上与结晶紫形成分子量较大的复合物。在革兰氏阴性菌的细胞壁内含有大量的易被酒精溶解的类脂，故酒精容易渗入细胞壁将结晶紫和碘液的复合物洗脱出来，使菌体变成无色，再经番红（或沙黄）复染而呈红色：而革兰氏阳性细菌的细胞壁内含的类脂极少，酒精难以透过细胞壁将结晶紫和碘液的复合物洗脱出来，故蛋经番红（或沙黄）复染

(3)用纱布将显微镜各部位擦净，除去灰尘、油污、水汽，以免生锈长霉。 (4)使显微镜各部件恢复回原位，转动转换器，使物镜呈"八"字形叉开置于载物台上，然后将显微镜送回箱中。 (5)显微镜应放在干燥阴凉的地方，不要放在强烈的日光下曝晒，霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂(硅胶)，如长期不用，则光学部分应卸下放在干燥箱中，以免受潮生霉。 (6)显微镜应严禁与挥发药品或腐蚀性药品放在一起，如碘片、盐酸、硫酸等药品。复习思考题 1．就接物镜的大小、镜头和载物台的距离两个方面，比较油镜、高倍镜和低倍镜的区别。 2．转换物镜镜头时，手应按什么部位进行旋转？为什么？ 3．使用油镜时应注意什么？使用过后应如何保养？实验二细胞染色及形态观察 ——简单染色及革兰氏染色不同类型的微生物形态和结构都不象同，每一种微生物在一定条件下保持着自己的形态特征。借助显微镜和染色技术可以辨别它们间个体形态特征上的差异，初步知道其在分类学上属于哪一类型的微生物，有时也可检验培养物的纯度或诊断疾病以及检验食品是否污染等。所以细菌染色是微生物学上的一项重要技术。细菌个体微小，而且透明，所以必须借助染色法使其着色，使菌体与视野形成明显的色差，以便于观察。染色有简单染色、革兰氏染色和特殊染色之分，本实验介绍前两类。简单染色：简单染色是仅用一种染料（如石炭酸、结晶紫或美蓝）使细菌细胞着色的染色法。这种染色方法简单，能显示细菌的形态，但不能显示菌体的内部构造或特殊构造。革兰氏染色：革兰氏染色是一种鉴别性染色方法。根据这种染色反应可以将细菌分为革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌两大类。其依据是细菌细胞壁的结构不同和通透性不同的缘故。革兰氏染色时，首先结晶紫透过细胞壁使菌体细胞着色。碘液做为媒染剂，在细胞膜上与结晶紫形成分子量较大的复合物。在革兰氏阴性菌的细胞壁内含有大量的易被酒精溶解的类脂，故酒精容易渗入细胞壁将结晶紫和碘液的复合物洗脱出来，使菌体变成无色，再经番红（或沙黄）复染而呈红色；而革兰氏阳性细菌的细胞壁内含的类脂极少，酒精难以透过细胞壁将结晶紫和碘液的复合物洗脱出来，故虽经番红（或沙黄）复染