显微技术功夫茶1:视野亮度不均与光轴调正 原创:江一平 显微镜的视野亮度不均匀是最常见的一种“异常”,专业一点的术语叫“光 轴不正”。 实验室里,时常听见新来不久的小师妹惊叫:“谁又乱调光轴了?前两天 售后师傅才来调正的,我昨天还用得好好的,怎么这会儿又阴阳脸了?!谁 呀?” “谁呀?”一旁的同门们面面相觑?窗外路过的二师兄凑过来一脸坏笑 地震了!” 你别说,还真是“地震动了你的奶酪 实际上,不安分的地球,时时刻刻都在发生人体无感知的微弱地震,故 地面上的“非锚定物体”总在悄悄进行微小位移。光学显微镜的聚光器就是这 样一种“非锚定物体”,常常不为人知地颠沛流离,导致其聚焦的光束偏离成 像光轴,造成视野亮度不均匀——具体表现为目镜视野的某些象限亮度偏 暗,形成画面的“阴阳脸”,从而严重影响工作质量评价——再美好的实验结 果也将“颜值尽毁 工欲善其事必先利其器”。做实验之前先检查仪器是否“work”?是实验 人员务必养成的好习惯。因此,使用光学显微镜时,务必首先检查显微镜是 否正常,并尽量纠正可能存在的故障。其中,最重要的是检查光轴“正不 正”——因为光轴不正是最常发生又最易纠正的小故障。 不同厂家不同规格的显微镜,其聚光器定位设置基本相同,只要熟悉任 何一台的调校方法,即可举一反三推广运用。以下以 Nikon Eclipse-Ci显微 镜(服役于海滨实验室Room205,图1)为例,介绍光轴检查和调正方法: 1.确认目镜和物镜完好并安置正确 2旋转视场光圈(图1-2)旋钮至几近最小值(逆时针旋转) 3.通过目镜观察,可见圆形暗视野中有一多边形的亮区,是聚光器中心光 束。若亮区偏于某一象限(图2-A),表明聚光器位置不在显微镜光轴中 心,需要调正(若光区太耀眼,可调小聚光器光圈,图1-3)
显微技术功夫茶 1：视野亮度不均与光轴调正 原创： 江一平 显微镜的视野亮度不均匀是最常见的一种“异常”，专业一点的术语叫“光 轴不正”。 实验室里，时常听见新来不久的小师妹惊叫：“谁又乱调光轴了？前两天 售后师傅才来调正的，我昨天还用得好好的，怎么这会儿又阴阳脸了？！谁 呀？” “谁呀？”一旁的同门们面面相觑？窗外路过的二师兄凑过来一脸坏笑— —“地震了！” ？？？ 你别说，还真是“地震”动了你的奶酪。 实际上，不安分的地球，时时刻刻都在发生人体无感知的微弱地震，故 地面上的“非锚定物体”总在悄悄进行微小位移。光学显微镜的聚光器就是这 样一种“非锚定物体”，常常不为人知地颠沛流离，导致其聚焦的光束偏离成 像光轴，造成视野亮度不均匀——具体表现为目镜视野的某些象限亮度偏 暗，形成画面的“阴阳脸”，从而严重影响工作质量评价——再美好的实验结 果也将“颜值尽毁”。 “工欲善其事必先利其器”。做实验之前先检查仪器是否“work”？是实验 人员务必养成的好习惯。因此，使用光学显微镜时，务必首先检查显微镜是 否正常，并尽量纠正可能存在的故障。其中，最重要的是检查光轴“正不 正”——因为光轴不正是最常发生又最易纠正的小故障。 不同厂家不同规格的显微镜，其聚光器定位设置基本相同，只要熟悉任 何一台的调校方法，即可举一反三推广运用。以下以 Nikon Eclipse-Ci 显微 镜（服役于海滨实验室 Room 205，图 1）为例，介绍光轴检查和调正方法： 1.确认目镜和物镜完好并安置正确； 2.旋转视场光圈（图 1-2）旋钮至几近最小值（逆时针旋转）； 3.通过目镜观察，可见圆形暗视野中有一多边形的亮区，是聚光器中心光 束。若亮区偏于某一象限（图 2-A），表明聚光器位置不在显微镜光轴中 心，需要调正（若光区太耀眼，可调小聚光器光圈，图 1-3）；
4.用左右手分别旋转聚光器方位调节钮(图1-4),像调节天平的水平珠 那样,使亮区在视野平面的X/方向上移动,直至移到视野中心(图 B); 5.顺时针旋转视场光圈(图1-2)钮,使目镜中的亮区扩大,直至亮区直 径与目镜视野内切(图2-C),此时可以最真确地看出聚光器聚焦的光束是 否在目镜视野的中心,即光轴是否完全调正。如果亮区与目镜视野未完全内 切,可做X/Y方向的进一步的微调 6.再次顺时针旋转视场光圈钮,使亮区扩大至与目镜视野外切,整个视野 亮度均匀 OK,大功告成!还用找“售后师傅”吗?! 附图 图1. Nikon Eclipse-Ci显微镜 目镜 视场光圈(决定光束直径) 聚光器光圈(决定焦平面光强) 聚光器方位调节钮(决定光的合轴程度) 图2聚光器合轴程度(目镜中看到的聚光器中心光束) 聚光器不合轴(光轴不正) 聚光器合轴(光轴正常) 组胚小天地 聚光器合轴并内切(光轴正常) 文章作者:江一平,教授,福建医科大学、厦门大学医学院生殖调控与生殖健康福建省 高校重点实验室
4.用左右手分别旋转聚光器方位调节钮（图 1-4），像调节天平的水平珠 那样，使亮区在视野平面的 X/Y 方向上移动，直至移到视野中心（图 2- B）； 5.顺时针旋转视场光圈（图 1-2）钮，使目镜中的亮区扩大，直至亮区直 径与目镜视野内切（图 2-C），此时可以最真确地看出聚光器聚焦的光束是 否在目镜视野的中心，即光轴是否完全调正。如果亮区与目镜视野未完全内 切，可做 X/Y 方向的进一步的微调； 6.再次顺时针旋转视场光圈钮，使亮区扩大至与目镜视野外切，整个视野 亮度均匀。 OK，大功告成！还用找“售后师傅”吗？！ 附图 文章作者：江一平，教授，福建医科大学、厦门大学医学院生殖调控与生殖健康福建省 高校重点实验室