药物分析实验指导 重庆医科大学药学系 药物分析教研室 二○O五年六月
药物分析教研室 二○○五年六月
前 言 药物分析是一门综合性的应用学科。药物分析实验是药物分析课程的重要组成部分，是理论 联系实际的重要环节。它的任务是培养学生树立药品质量观念，熟悉药品检验程序并培养学生具 有检验常用的药物及制剂的能力。通过实验课的学习，学生应达到以下要求： 1.全面了解药物分析工作的程序及各环节的要求。 2.掌握药物分析常用方法的原理及操作技术。 3能运用本课程基本理论及有关专业知识分析和解决实验中的问题。 4.培养实事求是的科学态度和严谨认真的工作作风 为此，要求学生实验前必须预习，明确实验目的，了解实验内容与方法，考虑实验中应注意 的事项及安排实验的进程。实验中应认真操作，仔细观察实验现象并加以分析，作好原始记录， 认真分析实验结果，力求做出准确可靠的结论。应遵守课堂纪律和实验室规则，注意安全、保持 整洁。 本实验指导内容是根据药学专业教学计划要求，结合我校实际情况编写的。以药物分析中常 用分析方法和典型药物及其制剂为主。使用时可根据学时数选择实验内容，也可作为教材的实例 用作课堂教学的参考。 重庆医科大学药学系 药物分析教研室 二00五年六月 1
1 1. 2 . 3. 4. 重庆医科大学药学系 药物分析教研室 二 OO 五年六月
目录 实验一 (三)蒸馏水的杂质检查 ................() 实验二 苯甲酸钠的含量测定.........................() 实验三 阿司匹林片的分析 ................................................................( 实验四 硫酸阿托品片的含量测定...........................() 实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定· ................... .............() 实验六 实验七 实验八 实验九 实验十 诺氟沙星胶囊含量测定.......................... 实验十一 实验十二 实验十三 实验十四 血浆中苯妥英浓度的高效液相色谱法测定.................() 实验十五 高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊的含量..............() 实验十六 附录1~3 药品检验操作标准 2
2 目 录 ( ) ( ) ( ) 噁 B1 C 测定阿莫西林胶囊的含量 1~3 药品检验操作标准 原料药检验报告书 成品检验报告书 标准液配制及标定记录
实验一 药物的杂质检查 一、目的 1.了解药物杂质检查的意义 2.掌握杂质检查的原理和方法。 3.掌握杂质限量的计算方法 二、实验内容 (一)标淮溶液的配制 1.标准氯化钠溶液的制备 称取氯化钠0.165g,置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液10ml置100ml瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10 μg的C)。 2.标准硫酸钾溶液的制备 称取硫酸钾0.181g,置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml 相当于100μg的S0) 3标淮铁溶液的制备 称取硫酸铁铵FcNH4(S04·12HO0.863g置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml, 用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液10ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得侮1ml相 当于10ug的Fe)。 4.标准铅溶液的制备 称取硝酸铅0.160g,置于1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度， 摇匀，作为贮备液 临用前精蜜量取贮备液10ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当 于10μg的Pb) 配制与贮：存用的玻璃容器均不得含有铅。 5.标准砷溶液的制备 称取三氧化二砷0.132g,置1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀 硫酸中和，再加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液1ml,置100ml量瓶中，加稀硫酸1ml,用水稀释至刻度，摇匀， 3
3 一、目的 1. 2. 3. 二、实验内容 1. 0.165g 1000ml 10ml 100ml ( 1ml 10 g Cl) 2. 0.18lg 1000ml ( 1ml 100 g SO4) 3. [FeNH4(SO4)2 12H2O] 0.863g, 1000ml 2.5ml 10ml 100ml ( 1ml 10 g Fe) 4. 0.160 g 1000ml 5ml 50ml 10ml 100ml ( 1ml 10 g Pb) 5. 0.132g 1000ml 20 5ml 10ml 1ml 100ml 1ml
即得（每1ml相当于1.0μg的As) (二)氯化钠的杂质检查 1.酸碱度 取本品5.0g,加水50ml溶解后，加溴麝香草酚蓝指示液2滴。如显黄色，加氢氧化钠液 (0.02molL)0.10ml,应变为蓝色：如显蓝色或绿色，加盐酸液0.02mol/L)0.2ml,应变为黄色 2溶液的澄清度 取本品5.0g,加水25ml溶解后，溶液应澄清 3.碘化物 取本品的细粉5.0g,置瓷蒸发皿内，滴加新配制的淀粉混合液[取可溶性淀粉0.25g,加水 2ml,搅匀，再加沸水至25ml,随加随搅拌，放冷，加硫酸液(0.025mo1)2ml,亚硝酸钠试液3 滴与水25ml,混]适量使晶粉湿润，置日光下（或日光灯下）观察，5分钟内晶粒不得显蓝色痕 迹。 4.溴化物 取本品2.0g,加水10ml使溶解，加盐酸3滴与氯仿1ml,边振摇边滴加2%氯胺T溶液临 用新制)3滴，氯仿层如显色，与标准溴化钾溶液（精密称取在105℃干燥至恒重的溴化钾0.1485g, 加水使溶解成100ml,摇匀)1.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。 5.硫酸盐 取本品5.0g,加水溶解成约40ml(溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性)，溶液如不澄清，应 滤过，置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml,摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液1.0m 置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml,加稀盐酸2ml摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对 照溶溶中，分别加人25%氯化钡溶液5ml,用水稀释使成50ml,充分摇匀，放置10分钟，同置 黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较、供试品管浊度不得更浓。 6机扑 取本品4.0g,加水20ml,溶解后，滤过，滤液分为两等份，1份中加稀硫酸2ml,另一份中 加水2ml,静置15分钟，两液应同样澄清。 7.钙盐 取本品2.0g,加水10ml使溶解，加氨试液1ml,摇匀，加草酸铵试液1ml,5分钟内不得发 生浑 8.镁盐 取本品1.0g,加水20ml使溶解，加氢氧化钠试液2.5ml与0.05%太坦黄溶液0.5ml,摇匀， 产生的颜色与标准镁溶液（精密称取在800℃炽灼至恒重的氧化镁16.58mg,加盐酸25ml与水适 量使溶解成1000ml,摇匀)1.0ml,用同一方法制成的对照液比较，不得更深 9钾盐 取本品5.0g,加水20ml溶解后，加稀醋酸2滴，加四苯硼钠溶液（取四苯硼钠1.5g,置乳钵 中，加水10ml研磨后，再加水40ml,研匀，用质密的滤纸滤过，即得)2ml,加水使成50ml,如 湿浑浊，与标准硫酸钾溶液123ml用同一方法制成的对照液比较，不得更浓。 10.干燥失重
4 ( 1ml 1.0 g As) 1. 5.0g 50ml 2 (0.02mol/L)0.10ml (0.02mol/L)0.2ml 2. 5.0g 25ml 3. 5.0g [ 0.25g 2ml 25ml (0.025mol/L)2ml 3 25ml ] ( ) 5 4. 2.0g 10ml 3 1ml 2 T ( )3 ( 105 0.1485g 100ml )1.0ml 5. 5.0g 40ml( ) 50ml 2ml 1.0ml 50ml 40ml 2ml 25 5ml 50ml 10 6. 4.0g 20ml 1 2ml 2ml 15 7. 2.0g 10ml 1ml 1ml 5 8. 1.0g 20ml 2.5ml 0.05 0.5ml ( 800 16.58mg 2.5ml 1000ml )1.0ml 9. 5.0g 20ml 2 ( 1.5g 10ml 40ml )2ml 50ml 12.3ml 10
取供试品，混合均匀（如为较大的结晶，应先迅速捣碎，使成2mm以下的小粒）。分取约1g, 平铺在130℃干燥至恒重的扁形称瓶中，厚度不超过5mm,精密称定。将瓶盖取下，置称瓶旁， 或将瓶盖半开，置烘箱内于130℃干燥约2~3小时后，将称瓶盖好，取出，置干燥器中放置40 分钟后，精密称定重量。再按上述方法自“将瓶盖取下.”起，继续干燥1~2小时，依法操 作，至恒重为止。从减失重量和取样量计算供试品的干燥失重（规定不得超过0.5%）。 11.铁盐 取本品5.0g,加水溶解成25ml,置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg, 用水稀释成35ml后，加30%硫氰酸铵溶液3ml,再加水适量稀释成50ml,摇匀。如显色，立即 与标准铁溶液1.5ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。 12.重金属 取本品5.0g,加水20ml溶解后，置25ml纳氏比色管中，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适 量使成25ml,加硫代乙酰胺试液（临用前取5.0ml混合液，加4%硫代乙酰胺溶液1ml,水浴加 热20秒，冷却，立即使用)2ml,摇匀，放置2分钟，置白纸上，自上向下透视。如显色，立即 与标准铅溶液1.0ml用同一方法的对照液比较，不得更深。 13.砷盐 仪器装置：如图1，A为100ml标准磨口锥形瓶，B为中空的标准磨口塞，上连导气管C(外 径8.0mm,内径6.0mm),全长约180mm。D为具孔的有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央 有一圆孔，孔径与导气管C的内径一致，其下部孔径与导气管C的外径相适应。将导气管C的 顶端导人旋塞下部孔内，并使管壁与旋塞的圆孔恰相吻合，粘合固定，E为中央具有圆孔（孔径 6.0mm)的有机玻璃旋塞盖，与D紧密吻合。 测试时，于导气管C中装人醋酸铅棉花60mg(装管高度约60~80mm),再于旋塞D的顶端平面 上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜，盖上旋塞E并旋紧，即得。 标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml,置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml,再加碘化钾试 液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g,立即照上法装妥的导气管 C密塞于A瓶上，并将A瓶置25~40℃水浴中，反应45分钟后，取出溴化汞试纸，即得。 检查法，取本品5.0g,置A瓶中，加水23ml溶解后，加盐酸5ml,照标准砷斑的制备，自“加 碘化钾试液5m”起，依法操作，将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。 E 雠
5 ( 2mm ) lg 130 5mm 130 2 3 40 1 2 ( 0.5 ) 11. 5.0g 25ml 50ml 4ml 50mg 35ml 30 3ml 50ml 1.5ml 12. 5.0g 20ml 25ml (pH3.5)2ml 25ml 5.0ml 4% 1ml 20 2ml 2 1.0ml 13. 1 A 100ml B C( 8.0mm 6.0mm) 180mm D C C C E ( 6.0mm) D C 60mg( 60 80mm) D ( ) E 2ml A 5ml 21ml 5ml 5 10 2g C A A 25 40 45 5.0g A 23ml 5ml 5ml
(三)蒸馏水的杂质检查 1.酸碱度 取本品10ml,加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml,加溴麝香草酚蓝指示液5滴， 不得显蓝色。 2.氯化物、硫酸盐与钙盐 取本品，分置3支试管中，每管各50ml。第一管中，加硝酸5滴与硝酸银试液1ml;第二 管中，加氯化钡试液2ml,第三管中，加草酸铵试液2ml,均不得发生浑浊。 3.硝酸盐与亚硝酸盐 取本品15ml,加醋酸液(6molL)18ml,对氨基苯磺酸a-萘胺试液2ml,锌粉0.01g,摇匀， 放置15分钟，不得显粉红色。 4.氨 取本品50ml,加碱性碘化汞钾试液2ml,放置15分钟；如显色，与氯化铵溶液取氯化铵 31.5mg,加无氨蒸馏水适量使溶解并稀释成1000ml2.0ml,加无氨蒸馏水48ml与碱性碘化汞钾 试液2ml制成的对照液比较，不得更深。 5.二氧化碳 取本品25ml,置50ml具塞量筒中，加氢氧化钙试液25ml,密塞振摇，放置，1小时内不得 发生浑浊。 6易氧化物 取本品100ml,加稀疏酸10ml,煮沸后，加高锰酸钾溶液(0.02molL)0.1ml,再煮沸10分钟， 粉红色不得完全消失。 7不挥发物 取本品100ml,置105℃恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，遗留残 渣不得超过lmg。 8重金属 取本品40ml,加醋酸盐缓冲液(pHB.5)2ml,硫代乙酰胺试液（临用前取5.0m混合液，加4% 硫代乙酰胺溶液1ml,水浴加热20秒，冷却，立即使用。)2ml,摇匀，放置2分钟，与本品42ml 与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml的混合液比较，颜色不得更深。 三、说明 1药物杂质检查必须注意按规定的检查条件，严格遵守平行原则。平行原则是指样品与标准 必须在同一条件下进行反应与比较。即应尽量选择容积、口径和色泽相同的比色管，在同一光源、 同村底上，以相同的方式（一般是自上而下）观察，所加入的试药种类、用量、加入顺序和反应时 间等也应一致。 2杂质限量是指药物中允许存在杂质的最大量。其定义式为： 杂质限量= 杂警生×1o0% 3.药物的杂质检查是限度检查，合格者仅说明其杂质量在药品质量标准允许范围内，并不 6
6 ( ) 1. 10ml 2 10ml 5 2. 3 50ml 5 1ml 2ml 2ml 3. 15ml (6mol/L)18ml - - 2ml 0.01g 15 4. 50ml 2ml 15 ( 31.5mg 1000ml)2.0ml 48ml 2ml 5. 25ml 50ml 25ml 1 6. 100ml 10ml (0.02mol/L)0.1ml 10 7. 100ml 105 105 1mg 8. 40ml (pH3.5)2ml 5.0ml 4% 1ml 20 2ml 2 42ml (pH3.5)2ml 三、说明 1. ( ) 2. = 供试品量 杂质允许存在量 100 3
说明药品中不含该项杂质。 四、思老题 1杂质检查的意义是什么？ 2.药物中杂质来源主要有哪些途径？什么是一般杂质？什么是特殊杂质？ 3.药物杂质检查应严格遵循什么原则 4.试计算出氯化钠中溴化物、硫酸盐、镁盐、钾盐、重金属和砷盐的限量。 5.某一药物取样0.5g进行重金属检查，药典规定限量不得超过10ppm,应取多少毫升标准铅 溶液？ 6.某一药物规定砷盐限量不得超过4ppm,取标准砷溶液2ml对照，问应取供试品多少克？ 实验二苯甲酸钠的含量测定 一、目的 掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的原理和操作 二、操作 取本品1.5g,精密称定，置分液漏斗中，加水约25ml,乙醚50ml与甲基橙指示液2滴，用 盐酸滴定液(0.5mo/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中， 乙醚层用水5ml洗涤，洗涤液并入维形瓶中，加乙醚20ml,继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定 随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1ml的盐酸滴定液0.5molM)相当于72.06mg的 本品按干燥品计算，含CHO2Na不得少于99.0% 三、说明 1苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。 +a→ 在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(P。=9.80)突跃不明显，故加入与水不相溶混的溶剂乙醚 提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。 2.滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层」 3在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，应用乙醚检查分液漏斗是否严密。 >
7 四、思考题 1. ? 2. ? ? ? 3. ? 4. 5. 0.5g 10ppm ? 6. 4ppm 2ml ? 一、目的 二、操作 1.5g 25ml 50ml 2 (0.5mol/L) 5ml 20ml (0.5mol/L) 1ml (0.5mol/L) 72.06mg C7H5O2Na C7H5O2Na 99.0 三、说明 1. COONa + HCl COOH + NaCl (Pkb=9.80) 2. 3
四、思考题 1乙醚为什么要分两次加人？第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点？为什么？ 2.分取水层后乙醚层用5ml水洗涤的目的是什么？ 实验三阿司匹林片的分析 一、目的 1掌握片剂分析的特点及赋形剂的干扰与排除方法。 2.掌握阿司匹林片鉴别、检查、含量测定的原理及方法 二、操作 「袋别机 1.取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g),加水10ml煮沸，放冷，加三氯化铁试液1 滴，即显紫革色。 2.取本品的细粉约相当于阿司匹林0.5g),加碳酸钠试液10ml,振摇后，放置5分钟，滤过 滤液煮沸2分钟，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发生酷酸的臭气。 [检查] 游离水杨酸 取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g),加无水氯仿3ml,不断搅拌2分钟，用无水氯 仿湿润的滤纸滤过，滤渣用无水氯仿洗涤2次，每次1ml,合并滤液与洗液，在室温下通风挥发 至干：残渣用无水乙醇4ml溶解后，移至100ml量瓶中，用少量5%乙醇洗涤容器、洗液并入量 瓶中，加5%乙醇稀释至刻度，摇匀，分取50ml,立即加新制的稀硫酸铁铵溶液[取盐酸液 (1mol/L)1ml,加硫酸铁铵指示液2ml后，再加水适量使成100ml]1ml,摇匀；30秒钟内如显色， 与对照液（精密称取水杨酸0.1g,登1000ml量瓶中，加冰醋酸1ml,摇匀.再加水适量至刻度。 摇匀，精密量取1.5ml,加无水乙醇2ml与5第乙酽使成50ml,再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液 ml,都勿比较，不得更深。 溶出度 取本品1片，照溶出度测定法第一法(2000年药典二部附录)，以稀盐酸24ml加水至1000m 为溶剂，转蓝转速为每分钟100±5转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml滤过，精密量取 续滤液3ml置50ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠液5ml,置水浴中煮沸5分钟，放冷，加硫酸液2.5ml: 并加水稀释至刻度，摇匀。照分光光度法，在303m的波长处测定吸收度，按CH6O3的吸收系 数E)为265计算，再乘以1304，计算出每片的溶出量；不得少于标示量的80%。其他应符合 片剂项下有关的各项规定(2000年中国药典二部)
8 四、思考题 1. ? ? ? 2. 5ml ? 一、目的 1. 2. 二、操作 [ ] 1. ( 0.1g) 10ml 1 2. ( 0.5g) 10ml 5 2 [ ] ( 0.1g) 3ml 2 2 1ml 4ml 100ml 5 5 50ml [ (1mol/L)1ml 2ml 100ml] 1ml 30 ( 0.1g 1000ml 1ml 1.5ml 2ml 5 50ml 1ml ) 1 2000 24ml 1000ml 100 5 30 10ml 3ml 50ml 0.4% 5ml 5 2.5ml 303nm C7H6O3 E 1 1 c m ) 265 1.304 出量 ； 不得 少 于标 示 量 的 80 ％ 2000
【含量测定] 取本品10片，精密称定，研细，精密称出适量（约相当于阿司匹林0.3g,置锥形瓶中，加 中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml,振摇，使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化 钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液(0.1molL)40ml,置水浴上加热15 分钟并时时振摇.迅速放冷至室温，有硫酸滴定液(0.05o/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验 校正。每1ml氢氧化钠滴定液0.1molL)相当于18.02mg的C,HsO 本品含阿司匹林CH04)应为标示量的95.0一105.0%。 三、说明 1.杨酸与三氯化铁试液显紫堇色。 +3H 2.检查溶出度是利用在碱性条件下，加热，使阿司匹林水解，测定水解产物水杨酸的吸收度 按E为265计算水杨酸的含量，故用阿司匹林的含量表示溶出度时应乘以换算因数 换算因数=MAsP/MsA=1.304 3.为消除阿司匹林水解产物水杨酸，酷酸及稳定剂枸椽酸、酒石酸对含量测定的影响故采用 两步滴定法。 第-次滴定：CHsCOOH+NaOH→CHsCOONa+HO X+一C+ +一 第二次滴定： 四、思考题 1简述鉴别试验的原理
9 [ ] 10 ( 0.3g) ( )20ml 3 (0.1mol/L) (0.1mol/L)40ml 15 (0.05mol/L) 1ml (0.1mol/L) 18.02mg C9H8O4 (C9H8O4) 95.0 105.0 三、说明 1 + Fe Fe3+ 3 3 O O H +3 H + O OH OH 3 O C 2. E 1 1 c m 265 =MASP MSA=1.304 3. CH3COOH NaOH CH3COONa H2O COOH OH + NaOH COONa OH + H2O COOH OCOCH3 + NaOH COONa OCOCH3 + H2O C CH2COOH CH2COOH HO COOH +3NaOH C CH2COONa CH2COONa HO COONa +3H2O COONa OCOCH3 + NaOH COONa OH + CH3COONa 四、思考题 1