• 真核基因的大肠杆菌表达体系 • 大肠杆菌的表达载体 • 克隆的真核基因在大肠杆菌细胞中的表达 • 影响克隆基因在大肠杆菌中表达效率的因 素 第四章 真核基因在大肠杆菌中的表达
• 真核基因的大肠杆菌表达体系 • 大肠杆菌的表达载体 • 克隆的真核基因在大肠杆菌细胞中的表达 • 影响克隆基因在大肠杆菌中表达效率的因 素 第四章 真核基因在大肠杆菌中的表达
• 大肠杆菌表达体系 • 克隆基因正确表达的基本条件 • 克隆基因表达活性的检测
• 大肠杆菌表达体系 • 克隆基因正确表达的基本条件 • 克隆基因表达活性的检测
真核基因的大肠杆菌表达体系
真核基因的大肠杆菌表达体系
大肠杆菌表达体系 优越性: 1. 对大肠杆菌的背景知识,特别是基因 表达调控的分子机理有深刻的了解; 2. 是一种安全的基因工程实验体系,拥 有各类适用的寄主菌株和不同类型的载 体; 3. 许多克隆的真核基因都可以在大肠杆 菌细胞中实现有效、高水平的表达; 4. 大肠杆菌培养方便、操作简单、成本 低廉,易用于批量生产
大肠杆菌表达体系 优越性: 1. 对大肠杆菌的背景知识,特别是基因 表达调控的分子机理有深刻的了解; 2. 是一种安全的基因工程实验体系,拥 有各类适用的寄主菌株和不同类型的载 体; 3. 许多克隆的真核基因都可以在大肠杆 菌细胞中实现有效、高水平的表达; 4. 大肠杆菌培养方便、操作简单、成本 低廉,易用于批量生产
大肠杆菌中表达体系的不足: 1. 真核基因,在结构上同原核基因之间 存在着很大的差别。 2. 真核基因的转录信号同原核的不同。 细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启 动子;外源基因可能含有具大肠杆菌转 录终止信号功能的核苷酸序列。 3. 真核基因mRNA的分子结构同细菌的 有所差异,影响真核基因mRNA稳定性
大肠杆菌中表达体系的不足: 1. 真核基因,在结构上同原核基因之间 存在着很大的差别。 2. 真核基因的转录信号同原核的不同。 细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启 动子;外源基因可能含有具大肠杆菌转 录终止信号功能的核苷酸序列。 3. 真核基因mRNA的分子结构同细菌的 有所差异,影响真核基因mRNA稳定性
4. 许多真核基因的蛋白质产物,都要 经过转译后的加工修饰(正确折叠 和组装),而大多数的这类修饰作 用在细菌细胞中并不存在; 5. 细菌的蛋白酶,能够识别外来的真 核基因所表达的蛋白质分子,并把 它们降解掉
4. 许多真核基因的蛋白质产物,都要 经过转译后的加工修饰(正确折叠 和组装),而大多数的这类修饰作 用在细菌细胞中并不存在; 5. 细菌的蛋白酶,能够识别外来的真 核基因所表达的蛋白质分子,并把 它们降解掉
克隆基因正确表达的基本条件 最基本条件:应该能够进行正常的 转录和转译,以及在正常情况下还 与转译后加工及新生多肽在细胞中 的分布有关。 重要条件:编码的蛋白质产物应能 维持正常的稳定性
克隆基因正确表达的基本条件 最基本条件:应该能够进行正常的 转录和转译,以及在正常情况下还 与转译后加工及新生多肽在细胞中 的分布有关。 重要条件:编码的蛋白质产物应能 维持正常的稳定性
具有核糖体结合位点; 具有克隆基因的功能(强)启动子; 插入序列的正确取向
具有核糖体结合位点; 具有克隆基因的功能(强)启动子; 插入序列的正确取向
真核基因在大肠杆菌中的表达
真核基因在大肠杆菌中的表达
克隆基因表达活性的检测 1.微细胞检测法; 2.巨细胞检测法; 3.偶联反应测定法
克隆基因表达活性的检测 1.微细胞检测法; 2.巨细胞检测法; 3.偶联反应测定法