实验基本技术 分子生物学部分
实验基本技术 分子生物学部分
存在问题 • 1. 基本的实验技能 • 2. 实验习惯 • 3. 责任感和安全性
存在问题 • 1. 基本的实验技能 • 2. 实验习惯 • 3. 责任感和安全性
春度尖老一切！！}
• 核酸纯化技术 • 离心分离技术 • 凝胶电泳技术 • 核酸定量技术 • 分子杂交技术 • 序列分析技术 •
• 核酸纯化技术 • 离心分离技术 • 凝胶电泳技术 • 核酸定量技术 • 分子杂交技术 • 序列分析技术 •
一 核酸纯化技术
一 核酸纯化技术
原理 • 1. 核酸混合物成分: 结构类-细胞碎片，细胞器，其他 大分子-DNA，RNA，Protein，糖类，脂类等 小分子-氨基酸，小分子糖类和脂类，水，无机物等 • 2. 关键: DNA，RNA—Protein • 3. 方案： Protein变性 苯酚：强变性 25 氯仿：弱变性 24 异戊醇：消泡 1
原理 • 1. 核酸混合物成分: 结构类-细胞碎片，细胞器，其他 大分子-DNA，RNA，Protein，糖类，脂类等 小分子-氨基酸，小分子糖类和脂类，水，无机物等 • 2. 关键: DNA，RNA—Protein • 3. 方案： Protein变性 苯酚：强变性 25 氯仿：弱变性 24 异戊醇：消泡 1
• 4. 苯酚的处理：重蒸-饱和-pH 重蒸：去除醌类氧化物 饱和：防止核酸损耗 pH： pH7.0-8.0-核酸最适合 方法：蒸馏（183℃）-收集（棕色瓶）-饱和与调 pH（Tris-HCl pH8.0）-0.1%8羟基喹啉- 4 ℃或- 20 ℃保存
• 4. 苯酚的处理：重蒸-饱和-pH 重蒸：去除醌类氧化物 饱和：防止核酸损耗 pH： pH7.0-8.0-核酸最适合 方法：蒸馏（183℃）-收集（棕色瓶）-饱和与调 pH（Tris-HCl pH8.0）-0.1%8羟基喹啉- 4 ℃或- 20 ℃保存
方法 样品+等体积饱和苯酚 10kb以上轻柔混匀；10kb以下振荡 离心（12000*g） 取上清
方法 样品+等体积饱和苯酚 10kb以上轻柔混匀；10kb以下振荡 离心（12000*g） 取上清
核酸相 Protein变性相 有机相
核酸相 Protein变性相 有机相
二 离心技术
二 离心技术