实验四-4 pH对淀粉酶活性的影 响
实验四-4 pH对淀粉酶活性的影 响
一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。 二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系,通常各 种酶只在一定pH范围内才具有活性,酶活性最 高时的pH,称为酶的最适pH,高于或低于此pH 时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。 酶的最适pH不是一个特征性的物理常数,对于 一个酶,其最适pH因缓冲液和底物的性质不同 而有差异
一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。 二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系,通常各 种酶只在一定pH范围内才具有活性,酶活性最 高时的pH,称为酶的最适pH,高于或低于此pH 时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。 酶的最适pH不是一个特征性的物理常数,对于 一个酶,其最适pH因缓冲液和底物的性质不同 而有差异
三、试剂和器材 1. 试剂 0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液、新鲜唾液、 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、碘化 钾-碘溶液 2. 器材 恒温水浴锅 四、 操作步骤 1. 取3个锥形瓶,按下表的比例吸取磷酸氢二钠 溶液和柠檬酸钠溶液,制备pH为5.0、6.8、8.0的 三种缓冲溶液
三、试剂和器材 1. 试剂 0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液、新鲜唾液、 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、碘化 钾-碘溶液 2. 器材 恒温水浴锅 四、 操作步骤 1. 取3个锥形瓶,按下表的比例吸取磷酸氢二钠 溶液和柠檬酸钠溶液,制备pH为5.0、6.8、8.0的 三种缓冲溶液
锥形瓶号 0.2mol/L磷酸氢 二钠(mL) 0.1mol/L柠 檬酸 缓冲液pH 1 2 3 5.15 7.72 9.72 4.85 2.28 0.28 5.0 6.8 8.0 2. 另取3只干净试管,按下表操作
锥形瓶号 0.2mol/L磷酸氢 二钠(mL) 0.1mol/L柠 檬酸 缓冲液pH 1 2 3 5.15 7.72 9.72 4.85 2.28 0.28 5.0 6.8 8.0 2. 另取3只干净试管,按下表操作
试管编号 试剂处理 1 2 3 pH5.0缓冲溶液/mL 3 - - pHh6.8缓冲溶液/mL - 3 - pHh8.0缓冲溶液/mL - - 3 0.5%淀粉溶液/mL 2 2 2 每隔1min逐管加入唾液稀 释液/mL 2 2 2 充分摇匀,置37 ℃水浴保温2 min,到达保温时间后,每隔1min依次取出 立即加碘化钾-碘溶液/滴 2 2 2 记录观察结果
试管编号 试剂处理 1 2 3 pH5.0缓冲溶液/mL 3 - - pHh6.8缓冲溶液/mL - 3 - pHh8.0缓冲溶液/mL - - 3 0.5%淀粉溶液/mL 2 2 2 每隔1min逐管加入唾液稀 释液/mL 2 2 2 充分摇匀,置37 ℃水浴保温2 min,到达保温时间后,每隔1min依次取出 立即加碘化钾-碘溶液/滴 2 2 2 记录观察结果
五、注意事项 1. 本实验中的保温时间是2min,但实际是 随不同的唾液淀粉酶的活性而变化的,所以在 实验前先找出准确的保温时间是本实验的关键; 2. 加入酶液后务必充分摇匀,保证酶与全 部淀粉溶液接触,反应才能得到理想的颜色梯 度变化结果
五、注意事项 1. 本实验中的保温时间是2min,但实际是 随不同的唾液淀粉酶的活性而变化的,所以在 实验前先找出准确的保温时间是本实验的关键; 2. 加入酶液后务必充分摇匀,保证酶与全 部淀粉溶液接触,反应才能得到理想的颜色梯 度变化结果
六、思考题 1. pH值导致酶活性丧失的分子机理是什么? 2. pH值改变导致的活性丧失, pH值恢复后活性 也能恢复吗?
六、思考题 1. pH值导致酶活性丧失的分子机理是什么? 2. pH值改变导致的活性丧失, pH值恢复后活性 也能恢复吗?