一、高效液相色谱法第3章的特点高效液相色谱分析流程及主要部件HighPerformance liquid三、影响分离的因素Chromatograph, HPLC四、高效液相色谱法的主要分离类型下一页2025/11/10
2025/11/10 第3章 高效液相色谱分析 一、高效液相色谱法 的特点 二、流程及主要部件 三、影响分离的因素 四、高效液相色谱法 的主要分离类型 High Performance liquid Chromatograph, HPLC
83-1高效液相色谱法的特点高效液相色谱（HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。按照固定相不同可分为：液液分配色谱：液固吸附色谱：离子交换色谱：排阻色谱（凝胶渗透色谱）等，应用非常广泛。早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm，长0.5~5m的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在150~200um范围内。即使这样，流速仍然很低（<lmL/min)，分析时间仍然很长。当加压增加流速（真空或空气泵）时，尽管分析时间减少，但柱塔板高度H.也相应增加了或者说柱效下降了（放弃液相色谱？）。但气相色谱对高分子量的，热稳定性差的和极性强的物质不适用，促使人们加大力度研究液相色谱。60年代未在生产和科研需求的推动下，液相色谱得到了缓慢而扎实的发展2025/11/10未H页页
2025/11/10 高效液相色谱(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。按照固定 相不同可分为：液液分配色谱；液固吸附色谱；离子交换色谱；排阻色 谱(凝胶渗透色谱)等，应用非常广泛。 早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm, 长0.5~5 m的 玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在 150~200m范围内。即使这样，流速仍然很低(<1mL/min)，分析时间仍 然很长。 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，但柱塔板高 度Hmin也相应增加了或者说柱效下降了(放弃液相色谱？)。 但气相色谱对高分子量的，热稳定性差的和极性强的物质不适用， 促使人们加大力度研究液相色谱。60年代未在生产和科研需求的推动下， 液相色谱得到了缓慢而扎实的发展。 §3-1 高效液相色谱法的特点
到60年代未70年代初，由于在技术上采用高压输液泵、新型高效固定相以及高灵敏检测器，才彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓的高效液相色谱技术才真正得到广泛应用。特点：高速、高效、高灵敏度1.5高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极快。高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高10-llg。高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV一10-g，荧光检测器2.HPLC与GC的比较分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物：HPLC可以分析高沸点高分子量的稳定或不稳定化合物2025/11/10未EA页
2025/11/10 到60年代未70年代初，由于在技术上采用高压输液泵、新型高效固 定相以及高灵敏检测器，才彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓 的高效液相色谱技术才真正得到广泛应用。 1. 特点：高速、高效、高灵敏度 高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极快。 高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱 效很高 高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。 2. HPLC与GC的比较 分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物； HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物
流动相的选择：GC的流动相为有限的几种“情性”气体，只起运载作用对组分作用小：HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。操作温度：GC需高温HPLC通常在室温下进行。应用3.由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于高沸点（非挥发性)和热不稳定组分的分析，因此，在工业、科学研究，尤其是在生物学和医学等方面应用极为广泛。如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。2025/11/10未HA页
2025/11/10 流动相的选择：GC的流动相为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用， 对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择 的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分 的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改 进分离。 操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。 3. 应用 由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于高沸点(非挥 发性)和热不稳定组分的分析，因此，在工业、科学研究，尤其是在生物 学和医学等方面应用极为广泛。 如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、 农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的
83-6高效液相色谱仪Waters LC 26902025/11/10下页返顶回
2025/11/10 §3-6 高效液相色谱仪
岛津高效液相色谱仪LC-1OA系列2025/11/10页下页返回
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hypodemicsyringeprecolumninjectorpumpmixingchamberfittingscolumnsolventsdetectordeta system高效液相色谱仪的结构流程图2025/11/10木首H页
2025/11/10 高效液相色谱仪的结构流程图
压力表C液器高压泵进样器克梯度洗脱装置记录仪色谱柱馅分检测器收集器HPLC仪包括：高压输液装置；进样系统；分离系统；检测系统此外还配有梯度淋洗、罐分收集器和数据处理装置2025/11/10木EKage页页
2025/11/10 HPLC仪包括：高压输液装置; 进样系统; 分离系统; 检测系统; 此外还配有梯度淋洗、馏分收集器和数据处理装置
1.高压输液系统1）贮液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器(Ni合金)，其孔约2um可防止颗粒物进入泵内。脱气：超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气器中的脱气膜相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去。2）高压泵：对输液泵的要求：密封性好、压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀输液泵种类：恒压泵和恒流泵。恒压泵（p84图，气动放大泵，根据液体压力传导原理设计制作）。它可迅速获得高压，输出无脉动，但流量随色谱系统阻力变化，导致保留时间重现性差。现已较少使用。恒流泵：应用最广的是机械往复式恒流泵（p83图）。每分钟往复约100次，因此脉动小，输出流量恒定，死体积小，更换溶剂方便。2025/11/10木RHA页
2025/11/10 1. 高压输液系统 1）贮液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器(Ni合金)，其孔约2m， 可防止颗粒物进入泵内。 脱 气： 超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气器中的脱气膜， 相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去。 2）高压泵： 对输液泵的要求：密封性好、压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、 耐腐蚀 输液泵种类：恒压泵和恒流泵。 恒压泵(p84图，气动放大泵，根据液体压力传导原理设计制作)。它 可迅速获得高压，输出无脉动，但流量随色谱系统阻力变化，导致保留 时间重现性差。现已较少使用。 恒流泵: 应用最广的是机械往复式恒流泵(p83图)。每分钟往复约100 次，因此脉动小，输出流量恒定，死体积小，更换溶剂方便
流动相出口密封垫性塞单向阁偏心艳流动相进口2.梯度洗提装置：梯度洗提：就是载液中含有两种或两种以上不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的容量因子和选择因子，以提高分离效果。应用梯度洗提可以提高分离效果，缩短分析时间，提高分辨能力和定量分析的精度。2025/11/10页返回n
2025/11/10 2.梯度洗提装置： 梯度洗提：就是载液中含有两种或两种以上不同极性的溶剂，在分 离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中 极性的变化来改变被分离组分的容量因子和选择因子，以提高分离效果。 应用梯度洗提可以提高分离效果，缩短分析时间，提高分辨能力和 定量分析的精度