流式细胞术原理 及在中医药研究中应用简介 湖北中医药大学中医药实验中心田代志
流式细胞术原理 及在中医药研究中应用简介 湖北中医药大学中医药实验中心 田代志
流式细胞术发展史 ·1930年Casperssoni和Thorell开始致力于细 胞计数的研究 ·1934年Moldaven:最早设想细胞检测自动化， 用光电仪记录流过一根毛细管的细胞 1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记 细胞内的特定蛋白 ·1949年Vallace Coulter申清了在悬液中计 数粒子的方法的专利 ·1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞
流式细胞术发展史 • 1930年Caspersson和Thorell开始致力于细 胞计数的研究 • 1934年Moldaven最早设想细胞检测自动化， 用光电仪记录流过一根毛细管的细胞 • 1940年Coons提出结合荧光素的抗体去标记 细胞内的特定蛋白 • 1949年Wallace Coulter申请了在悬液中计 数粒子的方法的专利 • 1950年Caspersson用显微UV-VIS检测细胞
流式细胞术发展史 ·1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理， 成功设计红细胞光学自动计数器 。1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计 ·1972年Herzenberg研制出细胞分选器 ·1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为 细胞研究提供大量的特异免疫试剂 ·大量厂家不断生产流式细胞仪
流式细胞术发展史 • 1953年Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理， 成功设计红细胞光学自动计数器 • 1969年Van Dilla及其同事在Los Alamos, NM发明第一台荧光检测细胞计 • 1972年Herzenberg研制出细胞分选器 • 1975年Kohler等提出单克隆抗体技术，为 细胞研究提供大量的特异免疫试剂 • 大量厂家不断生产流式细胞仪
流式细胞术发展史 ·目前国内主要流式细胞仪厂家： -Beckton Dickinson(BD)公司 -BACKMAN COULTER公司
流式细胞术发展史 • 目前国内主要流式细胞仪厂家： – Beckton Dickinson(BD)公司 – BACKMAN COULTER公司
流式细胞仪构造 流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM的结构 分五部分： -流动室及液流驱动系统 一激光光源及光束成形系统 一光学系统 一信号检测与存贮、显示、分析系统 -细胞分选及浓缩系统 流式细胞术(Flow Cytometry,FCM) 图示如下页：
流式细胞仪构造 • 流式细胞仪(Flow Cytometer，FCM)的结构 分五部分： – 流动室及液流驱动系统 – 激光光源及光束成形系统 – 光学系统 – 信号检测与存贮、显示、分析系统 – 细胞分选及浓缩系统 • 流式细胞术(Flow Cytometry，FCM) 图示如下页：
流式细胞仪构造模式图 PMT 5 PMT4 Sample PMT 3 Dichroic Flow cell Filters PMT 2 Scatter PMT 1 Sensor Laser Bandpass Filters
流式细胞仪构造模式图
流式细胞仪构造示意图 女州 enscre Famo阳Itp pelb anter here Fiters DaeEct whet light is maasurod E5mpl flow Ferverd lg ht Bartng atation c的f cek are db口 otd her可 Collotion Vale
流式细胞仪构造示意图
流动室与液流驱动系统 流动室是仪器核心部件，被测样品在此与激光相 交。 流动室由石英玻璃制成，中央有一长方形小孔， 供单个细胞通过。 ·流动室内充满了鞘液，其作用是将样品环形包绕。 鞘液流速稳定，样品流在鞘流的环包下形成流体 动力学聚焦，从而得到准确的细胞荧光信息。 流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振 动
流动室与液流驱动系统 • 流动室是仪器核心部件，被测样品在此与激光相 交。 • 流动室由石英玻璃制成，中央有一长方形小孔， 供单个细胞通过。 • 流动室内充满了鞘液，其作用是将样品环形包绕。 • 鞘液流速稳定，样品流在鞘流的环包下形成流体 动力学聚焦，从而得到准确的细胞荧光信息。 • 流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振 动
流动室与液流驱动系统 朝液压力 调节 空气录 压力传感器 销液 样本管 伍 Med 样本压力调节 Low
流动室与液流驱动系统
激光光源及光束成形系统 目前台式机FCM,大多采用氩离子气体激 光器。 激光光束在到达流动室前，先经过透镜聚 焦，形成约22×66um的光斑，这样激光能 量较强，以激发荧光染料 0 台式机的整个光路是封闭的，在安装时由 工程师调试完毕后，无需用户作任何调节， 使用十分方便
激光光源及光束成形系统 • 目前台式机FCM，大多采用氩离子气体激 光器。 • 激光光束在到达流动室前，先经过透镜聚 焦，形成约22×66μm的光斑，这样激光能 量较强，以激发荧光染料。 • 台式机的整个光路是封闭的，在安装时由 工程师调试完毕后，无需用户作任何调节， 使用十分方便