实验 蠕虫学粪便检查法（一） 。内容 4.蠕虫卵的一般构造 5.虫卵与非虫卵的区别 目的：掌握粪便中蠕虫卵检查法的操作技术，并学习在显微镜下辨认吸虫卵、绦虫 外部 奇生家的清化道宝们的卵，幼虫和某些虫体或虫体断片通常和粪 如排世 以在粪便中查见其虫卵或幼 注是诊这类蠕虫病的主要) 也同样出现在粪传 中。因此粪便检查 检查时所采用的粪便材料一般尽可能取新排出的，这样可以使虫卵保持固有的状态。有时 可直接由动物直肠采粪，更可减少混杂污染，取得更好的效果 蠕虫学粪便检查法可分为：①蠕虫虫体检查法，目的在于从粪便中发现整个虫体或节片，如 莫尼茨绦 般以肉眼直接检查：②蠕虫虫卵检查法，目的在于从粪便中发现虫卵，如大多数 缘虫和线尖出 蝎虫幼虫检查法，目的在于从粪使中发现幼虫，如牛、羊的网尾线虫 1.直接涂片法 此法是最简便和常用的方法。但检查时被检的粪量少，检出率低。因此，本法只能作为辅 助的方法，并且每次检查至少观察810张涂片， 才能收到确切的效果。 在洁净的载玻片上滴加1`2滴50%甘油生理盐水，再用牙签、镊子或火柴棍挑取少量粪便加 入其中，与甘油生理盐水混匀，夹去较大的或过多的粪渣， 最后使我玻片留有 层均匀的粪液，其 圆双的求是籽我开改报纸百政碳过东狼买不的学竿达为·售灵聚 检查时先在 换高袋 绿 过快 但是检查原虫的滋养体， 2.炮和盐水漂浮法（费勘鹏法） 本法其基本原理为采用比重比虫卵高的漂浮液，使虫卵上浮于液体的表层，形成一层虫卵液 膜，然后沾取此液膜进行镜检。此法简便有效，故在兽医工作中被广泛应用。但对于吸虫卵、后圆 线虫卵及棘头虫卵，则由于它们的比重大于饱和盐水，故效果不理想。其操作步骤如下： 先配制饱和食营水资液配制时先将水烧开 然后加入食盐搅拌，直到不再溶解生成沉淀 为止(1000毫升水中的约加食 用双层纱 化 待凉后即可使用（凉后 的溶液中取出现食楚结 表的杯中 加少 和 比重为把粪 为便的12倍量饱和水 并搅拌均 烧杯中 后的 置半小时 用二直径510毫米的铂金耳或铁丝圈与液面平行 抖落于载玻片上， 盖玻片检查，也可将此滤液直接倒入试管内，补加饱和盐水使试管充满 面完全接触，不能留有气泡)，直立半小时后，取下盖玻片，覆于载玻片上镜检，可收到同样效 果 为了提高漂浮法的检出率，可用硫酸钠饱和液(1750克硫代硫酸钠溶于1000毫升水中，其比重 为 左右)：硫酸镁饱和液(920克硫酸镁溶于1000毫升水 1.294) 糖饱和液 来代 率表 寄生虫虫卵比重 漂 浮 店 比 重 种 类 比 重 种 1000毫升水中加 的试剂量(g 比 .145 1.1701.190 1.0851.090 硫酸锌溶液 180
实验一 蠕虫学粪便检查法（一） 一．内容： １．直接涂片法。 ２．饱和盐水漂浮法。 ３．粪便培养法。 4．蠕虫卵的一般构造。 5．虫卵与非虫卵的区别。 二．目的：掌握粪便中蠕虫卵检查法的操作技术，并学习在显微镜下辨认吸虫卵、绦虫 卵、线虫卵和棘头虫卵。 三．参考资料： 寄生蠕虫大部分寄生于家畜的消化道，它们的虫卵、幼虫和某些虫体或虫体断片通常和粪 便一同排出。此外与消化道相连的器官（如肝、胰）中的寄生虫，其所产出的虫卵，也随粪便排出 体外。呼吸道的寄生虫，其虫卵或幼虫随痰液排出，在痰液进入口腔后，多数又被咽下，因此也可 以在粪便中查见其虫卵或幼虫，禽类泌尿生殖器宫内的寄生虫所排出的虫卵等，也同样出现在粪便 中。因此粪便检查法是诊断这类蠕虫病的主要方法。 检查时所采用的粪便材料一般尽可能取新排出的，这样可以使虫卵保持固有的状态。有时 可直接由动物直肠采粪，更可减少混杂污染，取得更好的效果。 蠕虫学粪便检查法可分为：① 蠕虫虫体检查法，目的在于从粪便中发现整个虫体或节片，如 莫尼茨绦虫，一般以肉眼直接检查；② 蠕虫虫卵检查法，目的在于从粪便中发现虫卵，如大多数 的吸虫、绦虫和线虫；③ 蠕虫幼虫检查法，目的在于从粪便中发现幼虫，如牛、羊的网尾线虫 等，随粪便排出的不是虫卵而是幼虫。 下面主要分述虫卵和幼虫检查法。 （一） 蠕虫虫卵检查法 1．直接涂片法： 此法是最简便和常用的方法。但检查时被检的粪量少，检出率低。因此，本法只能作为辅 助的方法，并且每次检查至少观察8~10张涂片，才能收到确切的效果。 在洁净的载玻片上滴加1~2滴50%甘油生理盐水，再用牙签、镊子或火柴棍挑取少量粪便加 入其中，与甘油生理盐水混匀，夹去较大的或过多的粪渣，最后使载玻片留有一层均匀的粪液，其 浓度的要求是将此玻片放于报纸（或书）上，能通过粪液膜模糊地辨认其下的字迹为宜。在粪膜上 覆以盖玻片。置显微镜下检查，检查时先在低倍镜下顺序查找，发现虫卵，再换高倍镜仔细观察。 如无甘油生理盐水时，可以用常水代替，加甘油可使标本清晰，易于观察，并防止粪膜过快蒸发变 干。但是检查原虫的滋养体，必须以生理盐水进行稀释，不应加甘油，否则会影响其运动而妨碍观 察。 2．饱和盐水漂浮法（费勒鹏法）： 本法其基本原理为采用比重比虫卵高的漂浮液，使虫卵上浮于液体的表层，形成一层虫卵液 膜，然后沾取此液膜进行镜检。此法简便有效，故在兽医工作中被广泛应用。但对于吸虫卵、后圆 线虫卵及棘头虫卵，则由于它们的比重大于饱和盐水，故效果不理想。其操作步骤如下： 先配制饱和食盐水溶液，配制时先将水烧开，然后加入食盐搅拌，直到不再溶解生成沉淀 为止（1000毫升水中的约加食盐380克），溶液用双层纱布或棉花过滤溶液，待凉后即可使用（凉后 的溶液中，如出现食盐结晶，则表明该溶液是饱和的，合乎要求，其比重为1.18）。 取粪便5~10克，置于100~200毫升的烧杯中，先加少量饱和盐水，把粪便混匀，然后再加约 为粪便的12倍量饱和盐水，并搅拌均匀，通过６０目铜筛或纱布滤入烧杯中，静置半小时，则虫卵 上浮；用一直径5~10毫米的铂金耳或铁丝圈与液面平行接触以沾取表面液膜，抖落于载玻片上，加 盖玻片检查，也可将此滤液直接倒入试管内，补加饱和盐水使试管充满，加上盖玻片（盖玻片与液 面完全接触，不能留有气泡），直立半小时后，取下盖玻片，覆于载玻片上镜检，可收到同样效 果。 为了提高漂浮法的检出率，可用硫酸钠饱和液（1750克硫代硫酸钠溶于1000毫升水中，其比重 为1.4左右）；硫酸镁饱和液（920克硫酸镁溶于1000毫升水中，其比重为1.294）；糖饱和液等来代 替饱和食盐液。但需注意，如溶液的比重过大，则粪便其它成份也随虫卵浮在液面上，影响检出 率。有时比重加大同时出现粘稠度增加，使虫卵浮起的速度减慢。常见虫卵及漂浮液的比重如下 表： 寄 生 虫 虫 卵 比 重 漂 浮 液 比 重 种 类 比 重 种 类 1000毫升水中加 入的试剂量(g) 比 重 猪 蛔 虫 卵 1.145 饱和盐水 380 1.170~1.190 钩 虫 卵 1.085~1.090 硫酸锌溶液 330 1.180
毛圆线虫卵 1.1151.130 氯化钙溶液 85 1.050 猪后圆线虫卵 1.20以上 氯化钙溶液 440 1.250 1.20以 硫代硫酸钠溶液 1750 1.371.39 华支睾吸虫 120以 电和硝酸 9 1000 L.20240 注： 作类液霜保有在不于℃的情况下才 特别在大面和 工作中用 保持较高的比查第二个粪 经都级泽的录，球要求新鲜，防止 (三)镜检时一定要详细观察，严格区别虫卵与非虫卵 3.粪便培养 圆形泪所属线虫种类很多，其虫卵在形状和大小上又很难区别。有时为了区别这些线虫的 鹬莞黎含离费界的羲剂以培养，传其中虫卵发有成为第营易幼虫时，再检查幼虫，根据第 已成球形直接胶左萨是将待检的新鲜粪便塑成半球 ，放在 (如果 马粪因其本来 可在室温内)培养 根据具体情况， 放在 缸 天加少量水 的湿 即孵化成幼虫， 期幼虫，即具有感染力的幼虫，然后将培养的幼虫连同粪 使一起用贝尔曼法分离出幼虫，进行镜检鉴定 应该指出：有些非常活跃的侵袭性幼虫常常离开粪便跑到潮湿的的平皿壁上，我们除了检 查平皿内的粪便外，还须用水仔细冲洗平皿壁，将所得的液体与粪便一起倒入贝尔曼装置内，或单 独用离心机进行分离后镜 种史卵或幼虫的生物学持：那就必须将待检类用典检查法加 和 水做 内必须 因为用粪 观察虫卵或幼虫发育情况。 楼商 沸2小时，接种虫卵或幼虫时，须先将粪汁用棉花过滤，这样在观察时就比较清晰，易于鉴别。 四，各种蠕虫虫卵的一般构造： 一)线虫卵的一般特征：形状，大小各不相同， 一般呈椭圆形或近似圆形：大多数虫卵 的外形是对称的，卵壳多由四层膜组成。最外一层卵壳多数是平滑的：有的有结节：有的有小凹陷 等。内含有多个细 已发育的幼 :多为无 设行丙许多黄大个个怀和电欧行 虫卵的一般特征 卵圆形 络电的的一船特征.叶目终电的多 假叶目绦虫卵近似吸虫卵。 (四)棘头虫卵的一般特征：多呈椭圆形或长椭圆形。卵壳很厚，外膜上常呈点窝状或蜂 窝状构造。卵内中有虫 长椭圆形的胚胎，胚胎的一端有六个小钩，多呈棕黄色。 结构， 的形状。如圆形、椭圆形，三角形等，多数都 是西含的套部容与虫师泡款物清控有年电、花收，质防华汽泡、真 非虫卵 菌孢子、螨类及其卵、纤毛虫、体细脱 由于种类不同 其形状 颜色也各不相同。如各种植物细胞，有的呈螺旋形，有的呈双层环状物，也有呈铺石状。但都有明 显的细胞壁，与虫卵结构显然不同。各种花粉颗粒往往多带有一定的颜色，易误认为蛔虫卵，但花 粉颗粒没有卵壳的构造，表面呈网状或锯齿状，仔细观察，可以区别。脂肪球和气泡之类，亦很象 。但脂肪球和汽泡往往大小不 且折光性很强，周围壁很厚，而内部是空虚的， 虫卵和其它物体区别开米。 六·在微镜下怎样识别虫卵与非虫卵？ 2.任选绘一虫卵形态图
毛圆线虫卵 1.115~1.130 氯化钙溶液 85 1.050 猪后圆线虫卵 1.20以上 氯化钙溶液 440 1.250 肝片吸虫卵 1.20以上 硫代硫酸钠溶液 1750 1.37~1.39 姜片吸虫卵 1.20以上 饱和硫酸镁 920 1.26 华支睾吸虫卵 1.20以上 饱和硝酸钠 1000 1.20~1.40 注：（一）盐类饱和液必须保存在不低于13℃的情况下才能保持较高的比重。 （二）操作中粪便不能互相污染，使用过的工具必须消毒或另换工具才能检查第二个粪 样，粪便不能搞错，特别在大面积普查工作中，每次检查都要有详细的记录，粪球要求新鲜，防止 暴晒、腐败而失效。 （三）镜检时一定要详细观察，严格区别虫卵与非虫卵。 3．粪便培养法 圆形目所属线虫种类很多，其虫卵在形状和大小上又很难区别。有时为了区别这些线虫的 种类，常将含有虫卵的粪便加以培养，待其中虫卵发育成为第三期幼虫时，再检查幼虫，根据第三 期幼虫形态上的差异加以鉴别。 最常用的方法是将待检的新鲜粪便塑成半球形，放在平皿内（如果羊粪、马粪因其本来就 已成球形可直接放在平皿内），加少许水（如粪已很稀，就不必加水），放在25~30℃温箱中（夏天 可在室温内）培养。根据具体情况，每天加少量水，使粪便保持一定的湿度，经7~10天的培养，卵 即孵化成幼虫，并经二次脱皮，变为第三期幼虫，即具有感染力的幼虫，然后将培养的幼虫连同粪 便一起用贝尔曼法分离出幼虫，进行镜检鉴定。 应该指出：有些非常活跃的侵袭性幼虫常常离开粪便跑到潮湿的的平皿壁上，我们除了检 查平皿内的粪便外，还须用水仔细冲洗平皿壁，将所得的液体与粪便一起倒入贝尔曼装置内，或单 独用离心机进行分离后镜检。 如果是为了研究某种蠕虫卵或幼虫的生物学特性，那就必须将待检粪便用蠕虫检查法加以 处理，将同种的虫卵或幼虫搜集在一起，放于平皿内在25~30℃的温箱中进行培养，平皿内必须预先 放好培养基。对于吸虫卵、绦虫卵、棘头虫卵和大多数线虫卵，可用水或生理盐水做培养基。最好 的培养基是灭菌的粪便或粪汁，尤以后者为佳，因为用粪汁培养虫卵或幼虫时，可以直接将培养有 虫卵的平皿放于显微镜下，观察虫卵或幼虫发育情况。粪便和粪汁的灭菌方法是在100℃的温度下煮 沸２小时，接种虫卵或幼虫时，须先将粪汁用棉花过滤，这样在观察时就比较清晰，易于鉴别。 四．各种蠕虫虫卵的一般构造： （一）线虫卵的一般特征：形状，大小各不相同，一般呈椭圆形或近似圆形；大多数虫卵 的外形是对称的，卵壳多由四层膜组成。最外一层卵壳多数是平滑的；有的有结节；有的有小凹陷 等。内含有多个细胞或一个已发育的幼虫；多为无色，透明、有些呈白色、褐色或黄褐色。 （二）吸虫卵的一般特征：多呈卵圆形或椭圆形，大小不一，卵壳由数层膜组成，厚而坚 实。大部分吸虫卵其一端有一小盖卵，内含有许多卵黄细胞及一个胚细胞，或含有一个已成形的毛 蚴，常呈黄色、黄褐色和褐色。 （三）绦虫卵的一般特征：圆叶目绦虫卵多呈三角形，立方形或近似圆形，大小不一，外 层数多较厚，内有一个特殊的梨形器，梨形器内包含有一个六钩蚴，多为无色，少数为黄色或黄褐 色。 假叶目绦虫卵近似吸虫卵。 （四）棘头虫卵的一般特征：多呈椭圆形或长椭圆形。卵壳很厚，外膜上常呈点窝状或蜂 窝状构造。卵内中央有一个长椭圆形的胚胎，胚胎的一端有六个小钩，多呈棕黄色。 五．虫卵与非虫卵的区别： 虫卵：都有一定的卵壳结构，并且都有一定的形状。如圆形、椭圆形，三角形等，多数都 是两侧对称的，内含有卵细胞或一个已发育的幼虫或毛蚴。 非虫卵：在粪便中容易与虫卵相混淆的杂物有各种植物细胞、花粉颗粒、脂肪球汽泡、真 菌孢子、螨类及其卵、纤毛虫、体细胞、结晶等等。但这些物质，由于种类不同，其形状、大小、 颜色也各不相同。如各种植物细胞，有的呈螺旋形，有的呈双层环状物，也有呈铺石状。但都有明 显的细胞壁，与虫卵结构显然不同。各种花粉颗粒往往多带有一定的颜色，易误认为蛔虫卵，但花 粉颗粒没有卵壳的构造，表面呈网状或锯齿状，仔细观察，可以区别。脂肪球和气泡之类，亦很象 虫卵。但脂肪球和汽泡往往大小不一，无色，且折光性很强，周围壁很厚，而内部是空虚的，不具 有虫卵的一般结构。总之，粪渣中与虫卵易混淆的杂物较多，但只要掌握虫卵的构造和特征是可以 辨认的。有时某物与虫卵分辨不清，也可用解剖针轻轻推动盖玻片下的东西滚动，这样往往可以把 虫卵和其它物体区别开来。 六．作业： 1．在显微镜下怎样识别虫卵与非虫卵？ 2．任选绘一虫卵形态图