天津师范大学所辣TianjinNormalUniversity化学综合实验7.基于环糊精与芳香酸相互作用的亲和毛细管电泳法研究
化学综合实验 7. 基于环糊精与芳香酸相互作用的亲和毛细 管电泳法研究
实验目的理解毛细管电泳的基本原理熟悉Aglient毛细管电泳仪器的构成，了解毛M细管检测窗口的制作过程和毛细管的安装过程数据分析软件的基习了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数和数据采集、本操作。查找文献资料，了解测定物质结合常数的几种方法，通过亲和毛细管电泳3法研究环糊精与芳香羧酸的相互作用，并总结毛细管电泳法在测定结合常数过程中的优势。熟悉Aglient化学工作站和Origin软件的使用，对实验结果进行分析、作3图，运用非线性拟合的方法得到物质的结合常数
理解毛细管电泳的基本原理，熟悉Aglient毛细管电泳仪器的构成，了解毛 细管检测窗口的制作过程和毛细管的安装过程。 了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数和数据采集、数据分析软件的基 本操作。 查找文献资料，了解测定物质结合常数的几种方法，通过亲和毛细管电泳 法研究环糊精与芳香羧酸的相互作用，并总结毛细管电泳法在测定结合常数过 程中的优势。 熟悉Aglient化学工作站和Origin软件的使用，对实验结果进行分析、作 图，运用非线性拟合的方法得到物质的结合常数。 实验目的
高效毛细管电泳应用与进展离子分析15analysis ofion141316192015阳离子分析222324迁移方向和电渗流方向一致；2.53.54.51.54.5min内分离了24种金属离子：t/minHPCE分离多种金属离子阳极进样，阴极检测；分离条件：36.5cmX75μmi.d.，35kV；缓冲溶液：1mmol·L-14-甲基羊胺+15mmol·L-1乳酸（pH4.8）：具有很高的灵敏度；检测：阴极端，UV214nm间接检测。出峰顺序：1-K+：2-Baz+，3—Srz+：4-Caz+，5-Mg2+，6—Mn2+7—Cd2+,2--Ba2+,8-Co*+;9-Pbz+,10—Ni2+11-Zn*+12—La3+;13—Ce3+14—Pr3+15Nd3+:16—Sma+17—Gd3++18--Cu2+,19—Dya+;20—Ho3+;21—Er3+;22—Tm3+，23—Yb3+，24—Lu3+
离子分析 analysis of ion 阳离子分析 迁移方向和电渗流方向一致； 4.5min内分离了24种金属离子； 阳极进样，阴极检测； 具有很高的灵敏度； 高效毛细管电泳应用与进展
高效毛细管电泳应用与进展阴离子分析阴离子电泳方向和电渗流方nVs-01xI向相反、速度接近，分析时间长1013效率低；171825202830126221质量小、电荷密度大的离子如：23.241MMNNSO4-2、CI-、F-等，电泳速率大于电渗流，阳极端流出，在阴极1.601.802.602.802.002.202.401.40t/min端无法检测；CZE分离36种阴离子毛细管柱：60cm×50μmi.d.工作电压：一30kV加入电渗流改性剂，十六烷基缓冲溶液：5mmol.L~1铬酸盐+0FM-BT（pH8.0）检测：阳极端、UV254nm间接检测三甲基溴化胺等，使电泳方向和1-S02-1-Br3-CI4-SO,2-5-NO,6-NO7—钼酸根：8—叠氮化物：9—WO2-，10—-氟磷酸根，电渗流方向一致，可在3.1min内11—C10-，12—柠檬酸根：13—F-：14—甲酸根：15—磷酸根分离36种阴离子；阴极进样，阳16-亚磷酸根：17—次氟酸根：18一戊二酸根：19—邻苯二甲酸根20-半乳糖二酸根：21-碳酸根22—乙酸根：23一氯乙酸根；极检测；24—乙基磺酸根；25一丙酸根：26一丙基磺酸根：27一天冬酸根：28一巴豆酸根：29一丁酸根：30一丁基磺酸根：31一戊酸根：32—苯甲酸根33—L-谷氨酸根：34—戊基磺酸根；离子价态及存在形态分析；35-d-葡萄糖酸根：36d-半乳糖醛酸根
阴离子分析 阴离子电泳方向和电渗流方 向相反、速度接近，分析时间长、 效率低； 质量小、电荷密度大的离子如： SO4-2、Cl-、F-等，电泳速率大 于电渗流，阳极端流出，在阴极 端无法检测； 加入电渗流改性剂，十六烷基 三甲基溴化胺等，使电泳方向和 电渗流方向一致，可在3.1min内 分离36种阴离子；阴极进样，阳 极检测； 离子价态及存在形态分析； 高效毛细管电泳应用与进展
高效毛细管电泳应用与进展药物分析12analysis of pharmaceutics10111713检测体液或细胞中某些代谢产51514物的分析；尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段；11096785采用毛细管区带电泳方式，在t/min毛细管电泳分离17种药物混合物11min内分离17种药物；出峰顺序：1—噻甲吡胺；2—溴苯吡胺；3—苯丙胺；4一去甲麻黄碱：5普鲁卡因：6一四氢茶唑琳：7—苯甲马啉：8一对胺苯酸二丁胺丙酯：9一去氧安定：10一利多卡因；11一可待因：12—乙酸丙嗪；13一氯苯甲嗪；14—安定；15一吗乙苯吡酮：16—苯佐卡因：17—安眠酮
药物分析 analysis of pharmaceutics 检测体液或细胞中某些代谢产 物的分析； 尿液中的氨基酸含量作为临床 诊断糖尿病的辅助手段； 采用毛细管区带电泳方式，在 11min内分离17种药物； 高效毛细管电泳应用与进展
高效毛细管电泳应用与进展手性化合物分析analysis of chiral compounds合成获得单一手性化合物相当困难；528种手性合成药物，61中以单一对映体形式销售，其他为外消旋体；检测分析也相当困难；研究热点；R-反应停是安眠药，S-式致胎儿畸形，HPCE分离分析手性化合物的方法：加入手性选择剂；形成配合物的稳定常数有差异，结合HPCE的高效率；常用手性选择剂：环糊精及其衍生物手性冠醚；手性表面活性剂（氨基酸衍生物、）胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性表面活性剂）
手性化合物分析 analysis of chiral compounds 合成获得单一手性化合物相当困难；528种手性合成药物，61中以单 一对映体形式销售，其他为外消旋体；检测分析也相当困难；研究热点； R-反应停是安眠药，S-式致胎儿畸形； HPCE分离分析手性化合物的方法：加入手性选择剂； 形成配合物的稳定常数有差异，结合HPCE的高效率； 常用手性选择剂：环糊精及其衍生物；手性冠醚；手性表面活性剂 （氨基酸衍生物、胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性 表面活性剂） 高效毛细管电泳应用与进展
高效毛细管电泳应用与进展氨基酸的分析analysis of amino acids131612810201718121618202210149/minMEKC高效分离23种丹酰化氨基酸的图谱背景电解质溶液：20mmol/L硼砂加100mmol/LSDS；检测波长：214nm；电泳中控制温度在10℃。采用MEKC模式，在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸；HPCE可取代传统的氨基酸分析仪；
氨基酸的分析 analysis of amino acids 采用MEKC模式，在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸； HPCE可取代传统的氨基酸分析仪； 高效毛细管电泳应用与进展
高效毛细管电泳应用与进展核酸分析及DNA排序analysis of nucleic acids and seguence ofDNA12175碱基对143054碱基对214215407231541650904200176108核酸分析及DNA排序的重522018712614151662981981447.34420916217要分析手段；839421101809506221119818105162312216111018112163513203620图为酶解的双螺旋DNA限制性片段的分离；2015t/minCGE模式分离碱基对相差1000倍的DNA的图谱毛细管，聚丙烯酰胺涂层毛细管40cm×75μmi.d.，有效长度30cm；凝胶是二度交联的聚丙烯酰胺（3%T，0.5%C)；流动相：100mmol/LTris-硼砂缓冲溶液，pH8.3电场强度：250V/cm；电流12.5A：检测波长：260nm
核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA 核酸分析及DNA排序的重 要分析手段； 图为酶解的双螺旋DNA限 制性片段的分离； 高效毛细管电泳应用与进展
高效毛细管电泳应用与进展新进展advances and specialtopics1.微型化整体化学分析系统（TAS）及TAS微型化在硅片上光刻出矩形槽作为毛细管，理论塔板数105/m；2.联用仪器CE-MS ;3.阵列毛细管凝胶电泳应用于人类基因DNA测序：5~10万个基因，30亿个碱基对，自前最有效的DNA序列分析仪，10小时/次；可同时电泳24个样品；速度1200碱基对/小时，提高速度！100支毛细管阵列电泳：速度280碱基对/小时/支
新进展 advances and special topics 1.微型化 整体化学分析系统（TAS）及TAS微型化 在硅片上光刻出矩形槽作为毛细管，理论塔板数105 /m； 2.联用仪器 CE-MS； 3.阵列毛细管凝胶电泳 应用于人类基因DNA测序； 5～10万个基因，30亿个碱基对，目前最有效的DNA序列分析仪，10小 时/次；可同时电泳24个样品；速度1200碱基对/小时，提高速度！ 100支毛细管阵列电泳；速度280碱基对/小时/支 高效毛细管电泳应用与进展
毛细管电泳介绍概述在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离1937年，Tiselius(瑞典）将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋自质混合液分离出白蛋白和α、β、球蛋白；发现样品的迁移速度和方向由其电荷和尚度决定第一次的自由溶液电泳；第一台电泳仪；1948年，蒂塞利乌斯对电泳分析和吸附方法的研究特别是发现了血清蛋白的组分而获诺贝尔化学奖蒂塞利乌斯，A.界.K
概述 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同 的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不 同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶 液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血 清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白； 发现样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定； 第一次的自由溶液电泳；第一台电泳仪； 1948年，蒂塞利乌斯对电泳分析和吸附方法的研究, 特别是发现了血清蛋白的组分而获诺贝尔化学奖； 毛细管电泳介绍