中药药理实验指导 云南中医学院中药尊院 中药药理实验室
中 药 药 理 实 验 指 导 云南中医学院中药学院 中 药 药 理 实 验 室
第一章作用于消化系统药理实验 消化系统由消化道和与其相连的许多消化腺组成,消化道通过运动将消化道内容物得到 混合并向消化道远端推送,消化腺通过分泌消化液消化食物,使食物被分解为小分子物质有 助于吸收。统消化系统药物研究主要包括消化器官运动实验、消化器官分泌实验、抗溃疡 抗肝损伤、利胆等药理实验方法 消化器官运动实验方法分为离体消化道器官标本运动实验和在体消化道器官运动实 验。离体器官标本运动实验:一般选用兔、豚鼠和大鼠的胃、肠、胆囊等器官的肠段或肌片, 在恒温及充氧的营养液中通过拉力传感器与记录仪连接,将药物直接加入浴柄槽内,描记胃 肠平滑肌收缩振幅、收缩频率、收缩张力的变化。②在体器官运动实验:胃排空,肠推进,压 敏传感器测定囊内压,贴壁传感器测定胃、肠壁平滑肌或胆囊舒缩运动,以及生物电研究消化 器官电生理变化等方法。 消化器官分泌实验主要通过插管或造瘘等方法收集胃液、肠液、胰液及胆汁,然后对上 述消化液进行分析。胃酸测定可用酸碱滴定法或酸度计测定法,胃蛋白酶测定可用凝乳法 麦特(Met)毛细玻管法、hmon- Mimsy改良法等,糜蛋白酶测定可用分光光度法、合成多肽 法等 抗溃疡实验是在建立实验性溃疡模型的基础上,观察药物对胃黏膜损伤的保护作用。引 起实验性溃疡的方法分为急性溃疡与慢性溃疡两大类。急性溃疡模型有:幽门结扎性溃疡、 应激性溃疡(水浸、寒冷、失血性休克)、药物诱发必型溃疡(非甾体类抗炎药、组胺、利 血平等)、黏膜坏死物质型溃疡(1⑩00%乙醇、0.6NHcl、25%Na)等:慢性溃疡模型有:醋 酸烧灼性溃疡,热烧灼性溃疡等,使用动物多为大鼠。同时还可测定胃组织中相关活性物质 的含量,如前列腺素、氨基己糖、CAMP、5-羟色胶、组胺、胃黏膜血液量等物质,可对药 作用机制进行研究 引起实验性肝损伤的方法有:①急性中毒性肝炎、肝坏死模型:四氯化碳肝损伤模型、 扑热息痛肝损伤模型、D-半乳糖胺肝损伤模型等。②脂眆肝、肝纤维化、肝硬化模型:乙硫 氨酸脂肪肝模型、二甲基亚硝胺肝纤维化模型、四氯化碳反复给予肝硬化模型等。③阻塞性 黄疸模型:α一茶异硫氨酸醋或胆管结扎均可致胆汁郁积型黄疸模型。④免疫性肝损伤模型 取异种或同种动物的肝提取物作为抗原免疫纯系小鼠可制备该模型。可检测的指标有血清或 肝脏AST、AIˆ活性,P-450活性,肝糖原、血清总蛋白、白蛋白含量,血N3、胆红素浓度等。 作为抗脂肪肝、肝硬化药物,还可检测肝脏胶原蛋白含量、凝血酶时间等,同时可进行病理组 织学观察。 利胆实验主要有正常大鼠的胆汁流量测定,离体胆囊肌片舒缩活动描记、整体动物的胆 道内压测定,由细菌造成化脓性胆管炎后对模型动物的胆汁流量、胆汁成分含量、odi氏 括约肌张力等指标进行测定,对胆石标本进行胆固醇、钙、胆红素等成分的含量测定等。 涉及消化系统药理实验方法硏究的常见中药有理气药、温里药、补气健脾药。 第一节药物对小鼠胃肠运动的影响 药物对小鼠胃排空的作用 【目的】①学习小鼠胃排空的实验方法。②观察胃动力药及健脾行气药物对胃排空功能的
第一章 作用于消化系统药理实验 消化系统由消化道和与其相连的许多消化腺组成，消化道通过运动将消化道内容物得到 混合并向消化道远端推送，消化腺通过分泌消化液消化食物，使食物被分解为小分子物质有 助于吸收。统消化系统药物研究主要包括消化器官运动实验、消化器官分泌实验、抗溃疡、 抗肝损伤、利胆等药理实验方法。 消化器官运动实验方法分为离体消化道器官标本运动实验和在体消化道器官运动实 验。离体器官标本运动实验: 一般选用兔、豚鼠和大鼠的胃、肠、胆囊等器官的肠段或肌片, 在恒温及充氧的营养液中通过拉力传感器与记录仪连接,将药物直接加入浴柄槽内，描记胃 肠平滑肌收缩振幅、收缩频率、收缩张力的变化。②在体器官运动实验:胃排空,肠推进,压 敏传感器测定囊内压,贴壁传感器测定胃、肠壁平滑肌或胆囊舒缩运动,以及生物电研究消化 器官电生理变化等方法。 消化器官分泌实验主要通过插管或造瘘等方法收集胃液、肠液、胰液及胆汁,然后对上 述消化液进行分析。胃酸测定可用酸碱滴定法或酸度计测定法,胃蛋白酶测定可用凝乳法、 麦特 (Mett)毛细玻管法、hmon-Mimhy 改良法等, 糜蛋白酶测定可用分光光度法、合成多肽 法等。 抗溃疡实验是在建立实验性溃疡模型的基础上,观察药物对胃黏膜损伤的保护作用。引 起实验性溃疡的方法分为急性溃疡与慢性溃疡两大类。急性溃疡模型有： 幽门结扎性溃疡、 应激性溃疡(水浸、寒冷、失血性休克)、药物诱发必型溃疡 ( 非甾体类抗炎药、组胺、利 血平等) 、黏膜坏死物质型溃疡(100%乙醇、0.6N HCｌ、25%NａCｌ)等；慢性溃疡模型有：醋 酸烧灼性溃疡，热烧灼性溃疡等，使用动物多为大鼠。同时还可测定胃组织中相关活性物质 的含量,如前列腺素、氨基己糖、 CAMP、5- 羟色胶、组胺、胃黏膜血液量等物质，可对药 作用机制进行研究 。 引起实验性肝损伤的方法有:①急性中毒性肝炎、肝坏死模型： 四氯化碳肝损伤模型、 扑热息痛肝损伤模型、D-半乳糖胺肝损伤模型等。②脂肪肝、肝纤维化、肝硬化模型:乙硫 氨酸脂肪肝模型、二甲基亚硝胺肝纤维化模型、四氯化碳反复给予肝硬化模型等。③阻塞性 黄疸模型:α一茶异硫氨酸醋或胆管结扎均可致胆汁郁积型黄疸模型。④免疫性肝损伤模型: 取异种或同种动物的肝提取物作为抗原免疫纯系小鼠可制备该模型。可检测的指标有血清或 肝脏AST 、AIT 活性,P-450 活性,肝糖原、血清总蛋白、白蛋白含量,血NH3、胆红素浓度等。 作为抗脂肪肝、肝硬化药物,还可检测肝脏胶原蛋白含量、凝血酶时间等,同时可进行病理组 织学观察。 利胆实验主要有正常大鼠的胆汁流量测定,离体胆囊肌片舒缩活动描记、整体动物的胆 道内压测定, 由细菌造成化脓性胆管炎后对模型动物的胆汁流量、胆汁成分含量、 odｄｉ 氏 括约肌张力等指标进行测定,对胆石标本进行胆固醇、钙、胆红素等成分的含量测定等。 涉及消化系统药理实验方法研究的常见中药有理气药、温里药、补气健脾药。 第一节 药物对小鼠胃肠运动的影响 一、药物对小鼠胃排空的作用 【目的】 ①学习小鼠胃排空的实验方法。②观察胃动力药及健脾行气药物对胃排空功能的
影响 【原理】胃排空是指胃内食糜由胃排入十二指肠的过程。进食后近端胃可通过迷走神经调 节而出现受容性舒张,起到暂时容纳与储存食物的作用,然后通过缓慢持续地收缩,压迫其 内容物向胃窦方向移动,再依赖胃窦收缩及胃和十二指肠协调运动而排空。通过观察胃动力 药吗丁琳及健脾行气药枳术丸对小鼠定量灌服营养性半固体糊剂20分钟后,胃全重和胃净重 之差的胃内残留物重量计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率,可了 解药物对胃排空运动的影响 【材料】 动物小鼠,体重18-22g。 药品Img/ml吗丁琳混悬液、1g/ml枳术丸水煎剂。 营养性半固体糊剂:16g奶粉、8g葡萄糖、8g淀粉,搅拌均匀,加以蒸馏水至300ml搅拌均匀。 主要器材:手术器械、电子天平、小烧杯、小鼠灌胃器。 【方法】取小鼠,禁食不禁水l8h后,称重,编号,随机分成三组。各组均按0.2mog 体积灌胃给药,空白对照组给予等容积蒸馏水,50min后各组均ig给予营养性半固体糊0.6 ml/只。20min后脱颈椎处死动物,剖开腹腔,结扎胃贲门和幽门后,取胃,用滤纸拭干后称 全重,然后沿胃大弯剪开胃体,洗去胃内容物后拭干,称净重。以胃全重和胃净重的差值为 胃内残留物重,胃内残留物重占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。 胃中残留率(%)=胃中残留物/所灌半固体糊X100% 实验结束后数据作全班统计,计算各组胃中残留率的平均数(X)和标准差(s),以t检 验统计法进行组间比较 【结果】将结果填入表7-1-1中。 表7-1-1吗丁啉对小鼠胃排空的影响 组别 剂量(g/kg) 动物数(n) 胃中残留率(%) 空白对照组 吗丁琳组 枳术丸组 【注意事项】①实验前小鼠必须严格禁食18h,最好将小鼠置于能漏出粪便的代谢笼内。② 解剖分离胃体的部位应尽量仔细,以胃内容物漏出影响实验结果。③如是观察浓度较大中药 煎剂的作用要注意药物殘留也会影响实验结果。④胃内容物的性状与化学成分均可影响胃排 空和速度 【思考题】①吗丁琳的主要药理作用有哪些?其促进胃排空的作用机制是什么? ②从药理学的角度解释枳术丸组为什么常用于功能性消化不良的治疗? 二、药物对小鼠小肠运动的影晌 【目的】①学习用炭未推进法测定动物小肠运动的实验方法。②观察M受体阻断药阿托品和 泻下药芒硝对小肠运动的影响 【原理】消化管内容物的移动速度与胃排出时间、小肠的运动及消化管内容物的流动性有关。 小肠的运动受肠神经及外来神经的控制,当机械和化学的刺激作用于肠壁感受器时,可通过 局部的壁内反射而引起小肠蠕动增加,而副交感神经兴奋时可增强小肠运动,交感神经兴奋
影响。 【原理】胃排空是指胃内食糜由胃排入十二指肠的过程。 进食后近端胃可通过迷走神经调 节而出现受容性舒张，起到暂时容纳与储存食物的作用，然后通过缓慢持续地收缩，压迫其 内容物向胃窦方向移动，再依赖胃窦收缩及胃和十二指肠协调运动而排空。通过观察胃动力 药吗丁琳及健脾行气药枳术丸对小鼠定量灌服营养性半固体糊剂20分钟后，胃全重和胃净重 之差的胃内残留物重量,计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率，可了 解药物对胃排空运动的影响。 【材料】 动物:小鼠,体重18~22g。 药品:lmg/ml吗丁琳混悬液、1g/ml枳术丸水煎剂。 营养性半固体糊剂: 16g奶粉、8g葡萄糖、8g淀粉，搅拌均匀，加以蒸馏水至300ml搅拌均匀。 主要器材:手术器械、电子天平、小烧杯、小鼠灌胃器。 【方法】取小鼠 , 禁食不禁水18h 后,称重, 编号,随机分成三组。各组均按0.2 ml/10g 体积灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水，50 min后各组均ig给予营养性半固体糊 0.6 ml/只。20min后脱颈椎处死动物，剖开腹腔，结扎胃贲门和幽门后，取胃，用滤纸拭干后称 全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后拭干，称净重。以胃全重和胃净重的差值为 胃内残留物重，胃内残留物重占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。 胃中残留率 (%)=胃中残留物/所灌半固体糊X100% 实验结束后数据作全班统计,计算各组胃中残留率的平均数 (X) 和标准差 (s), 以t检 验统计法进行组间比较。 【结果】将结果填入表 7-1-1 中。 表 7-1-1 吗丁啉对小鼠胃排空的影响 组别 剂量 (g/kg) 动物数 (n) 胃中残留率 (%) '空白对照组 吗丁琳组 枳术丸组 【注意事项】①实验前小鼠必须严格禁食18h, 最好将小鼠置于能漏出粪便的代谢笼内。② 解剖分离胃体的部位应尽量仔细, 以胃内容物漏出影响实验结果。③如是观察浓度较大中药 煎剂的作用要注意药物殘留也会影响实验结果。④胃内容物的性状与化学成分均可影响胃排 空和速度。 【思考题】①吗丁琳的主要药理作用有哪些 ? 其促进胃排空的作用机制是什么 ? ②从药理学的角度解释枳术丸组为什么常用于功能性消化不良的治疗？ 二、药物对小鼠小肠运动的影晌 【目的】①学习用炭未推进法测定动物小肠运动的实验方法。②观察M受体阻断药阿托品和 泻下药芒硝对小肠运动的影响。 【原理】消化管内容物的移动速度与胃排出时间、小肠的运动及消化管内容物的流动性有关。 小肠的运动受肠神经及外来神经的控制，当机械和化学的刺激作用于肠壁感受器时，可通过 局部的壁内反射而引起小肠蠕动增加，而副交感神经兴奋时可增强小肠运动，交感神经兴奋
则产生抑制作用。利用口服炭末在肠道不被吸收的原理,以炭末作为指示剂,测定在一定时间 内炭末在肠道的推进距离,可观察M受体阻断药和泻下药对小肠推进的作用。 【材料】 动物:小鼠,体重1822g 药品:用含有%阿拉伯胶的水溶液制成12%活性炭末混悬液、生理盐水、盐酸阿托品、100% 芒硝水溶液。 主要器材:手术剪、眼科慑、直尺、注射器、灌胃针。 【方法】取禁食不禁水20h的小鼠,随机分组,称重,编号。各给药组动物分别皮下注射阿 托品(10mg/kg),灌胃给予200%芒硝水溶液(0.2ml/10g),空白对照组给予等容积蒸馏水。 灌胃体积均为0.2ml/10g,20min后各组均灌胃给予10‰的炭黑混悬液0.6mJ只。20min后脱 颈椎处死动物,剖开腹腔,分离肠系膜,剪取上端至幽门,下端至回盲部的肠管,轻轻将小 肠拉直,准确量取小鼠幽门至炭黑推进前沿的长度以及小鼠小肠总长,按下式计算推进百分 炭黑推进百分率=(炭未从幽门部到推进前沿的移动距离/小鼠小肠总长)×100% 实验结束后数据作全班统计,计算各组炭末推进百分率的平均数(X)和标准差(s), 以t检验统计法进行组间比较 【结果】将结果填入表7-2-1中。 表7-2-1阿托品、芒硝对小鼠小肠运动作用的影响 组别剂量(g/kg)动物数(n)碳末移动距离(cm)小肠全长(cm)碳末推进率(%) 空白对照组 盐酸阿托品组 芒硝水溶液组 【注意事项】①给药至处死动物的间隔以及处死至取出肠管的时间时间必须一致。②剪取肠 系膜、肠管以及拉直肠管时动作轻柔,不可用力牵拉。③当因禁食不完全肠道内可能出现食 物残留或与药物颜色难于分辨时,可剪破一点肠管,挤出肠内容物,炭末为黑色颗粒状,食物 等残留则为褐色软糊状,可加以区别。 【思考题】①中药泻下药根据泻下作用机制可分为几类?芒硝属于哪一类? ②阿托品的药理作用、临床运用及不良反应是什么 药物对家兔在体胃肠运动的影响 【目的】①学习在体胃肠运动的实验方法。②观察胆碱酯酶抑制新斯的明对家兔胃肠运动的 影响 【原理】胃以蠕动的形式对胃内食物进行机械性消化,再将食糜排入十二指肠,小肠通过分 节运动与蠕动使肠内容物得到充分混合并被推向肠的远端。将肠运动换能器直接缝在胃壁 或肠壁上,能把胃肠运动时平滑肌张力的变化和运动的频度客观地记录下来。 【材料】 动物:家兔,体重22.5kg 药品:新斯的明 试剂:乌拉坦溶液、生理盐水。 主要器材∷手术器械、胃肠运动换能器、生物机能实验系统、家兔手术固定台、注射器、纱 布、缝合针线
则产生抑制作用。利用口服炭末在肠道不被吸收的原理,以炭末作为指示剂,测定在一定时间 内炭末在肠道的推进距离,可观察M受体阻断药和泻下药对小肠推进的作用。 【材料】 动物 : 小鼠,体重 18~22g 。 药品 :用含有2%阿拉伯胶的水溶液制成12%活性炭末混悬液、生理盐水、盐酸阿托品、100% 芒硝水溶液。 主要器材 : 手术剪、眼科慑、直尺、注射器、灌胃针。 【方法】取禁食不禁水20h 的小鼠, 随机分组, 称重,编号。各给药组动物分别皮下注射阿 托品(10ｍｇ/ｋｇ)，灌胃给予200%芒硝水溶液(0.2ｍｌ/10ｇ)，空白对照组给予等容积蒸馏水。 灌胃体积均为0.2ml/10g，20 min后各组均灌胃给予10%的炭黑混悬液0.6 ml/只。20min后脱 颈椎处死动物，剖开腹腔，分离肠系膜，剪取上端至幽门 ,下端至回盲部的肠管，轻轻将小 肠拉直，准确量取小鼠幽门至炭黑推进前沿的长度以及小鼠小肠总长，按下式计算推进百分 率。 炭黑推进百分率＝ (炭未从幽门部到推进前沿的移动距离/小鼠小肠总长)×100% 实验结束后数据作全班统计 , 计算各组炭末推进百分率的平均数 (X) 和标准差 (s), 以t检验统计法进行组间比较。 【结果】将结果填入表 7-2-1 中。 表 7-2-l 阿托品、芒硝对小鼠小肠运动作用的影响 组别 剂量 (g/kg) 动物数 (n)碳末移动距离(ｃｍ) 小肠全长(ｃｍ) 碳末推进率 (%) 空白对照组 盐酸阿托品组 芒硝水溶液组 【注意事项】①给药至处死动物的间隔以及处死至取出肠管的时间时间必须一致。②剪取肠 系膜、肠管以及拉直肠管时动作轻柔,不可用力牵拉。③当因禁食不完全肠道内可能出现食 物残留或与药物颜色难于分辨时,可剪破一点肠管, 挤出肠内容物,炭末为黑色颗粒状,食物 等残留则为褐色软糊状,可加以区别。 【思考题】①中药泻下药根据泻下作用机制可分为几类 ? 芒硝属于哪一类 ? ②阿托品的药理作用、临床运用及不良反应是什么？ 三、药物对家兔在体胃肠运动的影响 【目的】①学习在体胃肠运动的实验方法。②观察胆碱酯酶抑制新斯的明对家兔胃肠运动的 影响。 【原理】胃以蠕动的形式对胃内食物进行机械性消化，再将食糜排入十二指肠，小肠通过分 节运动与蠕动使肠内容物得到充分混合并被推向肠的远端。将肠运动换能器直接缝在胃壁 或肠壁上，能把胃肠运动时平滑肌张力的变化和运动的频度客观地记录下来。 【材料】 动物:家兔,体重2~2.5 kg。 药品:新斯的明。 试剂: 乌拉坦溶液、生理盐水。 主要器材:手术器械、胃肠运动换能器、生物机能实验系统、家兔手术固定台、注射器、纱 布、缝合针线
【方法】取禁食l8h家兔,随机分组,称重,编号。用乌拉坦按500mg/kg耳缘静脉缓慢注入, 麻醉后将兔背位固定于家兔手术固定台,在兔右下腹回盲部作一3~4cm切口,止血后暴露回 盲部4-5cm的回肠段,将胃肠运动换能器按与环行肠平行的方向固定于回肠。换能器的信号 输入端与BL-420生物机能实验系统相连接。描记回肠收缩的胃肠运动换能器装置固定后 稳定30分钟,先记录正常回肠收缩曲线,然后分别腹腔注射新斯的明(0.1mg/kg)和生理盐 水,观察2小时内回肠收缩曲线的变化。比较收缩频率和收缩幅度的变化,波动次数为收缩 次数,上下波动的距离为收缩幅度 【结果】将结果填入表7-2-2中。 表7-2-2新斯的明对家兔在体胃肠运动的影响 收缩频率(次/分) 收缩幅度(cm) 组别 给药前给药后给药前给药后 生理盐水组 新斯的明组 【注意事项】①缝合固定胃肠运动换能器时不要过度损伤胃肠管。 ②手术以钝性分离为主,避免出血过多。 【思考题】①在体实验与离体实验各有什么优缺点、 ②新斯的明的药理作用及临床运用。 第二节药物抗胃溃疡作用的影响 1、药物对大鼠胃黏膜的保护作用 【目的】①学习造成大鼠急性胃溃疡的实验方法。②观察理气药木香及调和肝脾药痛泻要方 对胃黏膜的保护作用 【原理】乙醇可通过减少胃黏膜中前列腺素、氨基已糖含量、降低胃黏膜血流量,减少胃黏 膜跨膜电位差、破坏主细胞减少黏液分泌、引起胃黏膜微循环障碍等,从而破坏了胃黏膜屏 障的完整性导致溃疡。观察药物对乙醇所致急性胃黏膜损伤程度,可了解药物对胃黏膜的保 护作用 【材料】 动物:大鼠,体重200250g0 药品:0.4g/m木香丙酮提取物(用5倍量丙酮浸泡木香24h,浸泡期间振摇数次,过滤,滤液 挥尽丙酮后,将剩余物用适量阿拉伯树胶及蒸镏水研磨,制成所需浓度的药液)、1.2g/ml的 痛泻要方水煎液(炒白术40g、炒白苟32g、炒陈皮19g、防风29g,水煎成100ml,纱布 过滤,滤液用适量阿拉伯树胶混悬即得) 试剂:无水乙醇、福尔马林溶液、生理盐水。 主要器材:大鼠固定板、大鼠灌胃器注射器、手术剪器械、直尺 【方法】取大鼠,禁食不禁水24h后随机为三组,称重,编号。分别灌服5%阿拉伯的水溶液 及受试药物,1小时后每只大鼠灌服无水乙醇(1ml/100g),再过1小时用cO2处死动物,形取 胃,结扎贲门,由幽门注入1%的福尔马林溶液液10ml,结扎幽门,再将胃浸泡于1%福尔马 林溶液中10分钟,以固定胃内外层。沿胃大弯剪开胃,用自来水轻轻冲洗去胃内容物,将胃平 展在玻璃板上,用棉球轻轻拭去附挂于胃黏膜上的血丝,观察腺胃部的胃黏膜损伤程度,可 见黏膜充血、水肿、纵行深褐色条索状溃疡,。将每只大鼠所有损伤长度的总和作为该大鼠
【方法】取禁食18 h家兔，随机分组, 称重,编号。用乌拉坦按500mg/kg耳缘静脉缓慢注入， 麻醉后将兔背位固定于家兔手术固定台，在兔右下腹回盲部作一3~4cm切口，止血后暴露回 盲部4~5cm的回肠段，将胃肠运动换能器按与环行肠平行的方向固定于回肠。换能器的信号 输入端与BL－420E生物机能实验系统相连接。描记回肠收缩的胃肠运动换能器装置固定后 稳定30分钟，先记录正常回肠收缩曲线，然后分别腹腔注射新斯的明(0.1ｍｇ/ｋｇ)和生理盐 水，观察2小时内回肠收缩曲线的变化。比较收缩频率和收缩幅度的变化，波动次数为收缩 次数，上下波动的距离为收缩幅度。 【结果】将结果填入表 7-2-2 中。 表 7-2-2 新斯的明对家兔在体胃肠运动的影响 收缩频率(次/分) 收缩幅度(cm) 组 别 剂 量 给药前 给药后 给药前 给药后 生理盐水组 新斯的明组 【注意事项】①缝合固定胃肠运动换能器时不要过度损伤胃肠管。 ②手术以钝性分离为主，避免出血过多。 【思考题】 ①在体实验与离体实验各有什么优缺点、 ②新斯的明的药理作用及临床运用。 第二节 药物抗胃溃疡作用的影响 1、药物对大鼠胃黏膜的保护作用 【目的】①学习造成大鼠急性胃溃疡的实验方法。②观察理气药木香及调和肝脾药痛泻要方 对胃黏膜的保护作用。 【原理】乙醇可通过减少胃黏膜中前列腺素、氨基已糖含量、降低胃黏膜血流量，减少胃黏 膜跨膜电位差、破坏主细胞减少黏液分泌、引起胃黏膜微循环障碍等，从而破坏了胃黏膜屏 障的完整性导致溃疡。观察药物对乙醇所致急性胃黏膜损伤程度，可了解药物对胃黏膜的保 护作用。 【材料】 动物:大鼠 , 体重 200 ~250go 药品:0.4ｇ/ｍｌ木香丙酮提取物(用5倍量丙酮浸泡木香24h, 浸泡期间振摇数次,过滤,滤液 挥尽丙酮后,将剩余物用适量阿拉伯树胶及蒸镏水研磨,制成所需浓度的药液 )、1.2g/ml 的 痛泻要方水煎液 (炒白术4Og 、炒白苟32 g、炒陈皮 19g 、防风29g ,水煎成100ml, 纱布 过滤,滤液用适量阿拉伯树胶混悬 即得)。 试剂:无水乙醇、福尔马林溶液、生理盐水。 主要器材:大鼠固定板、大鼠灌胃器注射器、手术剪器械、直尺。 【方法】取大鼠,禁食不禁水 24h 后随机为三组, 称重,编号。分别灌服5%阿拉伯的水溶液 及受试药物，1小时后每只大鼠灌服无水乙醇(1ｍｌ/100ｇ)，再过1小时用CO2处死动物，形取 胃，结扎贲门，由幽门注入1%的福尔马林溶液液10ｍｌ，结扎幽门, 再将胃浸泡于1%福尔马 林溶液中10分钟, 以固定胃内外层。沿胃大弯剪开胃,用自来水轻轻冲洗去胃内容物,将胃平 展在玻璃板上,用棉球轻轻拭去附挂于胃黏膜上的血丝, 观察腺胃部的胃黏膜损伤程度，可 见黏膜充血、水肿、纵行深褐色条索状溃疡,。将每只大鼠所有损伤长度的总和作为 该大鼠
的溃疡指数。也可用打分的半定量方式表示溃疡指数:瘀血点为1分,线状痕血长度小于1m 者为2分,12m者为3分,34m者为4分,大于5mm者为5分,全胃分数的总和为该鼠的 溃疡指数,以下列公式计算溃疡抑制百分率和溃疡发生百分率。 溃疡抑制百分率(%) =对照组溃疡指数-给药组溃疡指数/对照 溃疡 组溃疡指数X100% 溃疡发生百分率(%) 溃疡 =形成溃疡动物数/实验动物数X100% 实验结束后作全班数据统计,计算各 幽门 组溃疡抑制百分率和溃疡发生率的平均数 (X)和标准差(s),以t检验统计法进 行组间比较。 【结果】将结果填入表7-1-1中。 表7-1-1木香、痛泻要方对大鼠乙醇型粘膜损伤的影响 组别剂量(g/kg)动物数(n)溃疡指数溃疡抑制率(%)溃疡发生率() 空白对照组 木香组 痛泻要方组 【注意事项】①胃黏膜损伤程度与乙醇浓度及灌服时间有关 ②注入胃内的福尔马林溶液量要准确,以免影响实验结果 【思考题】①胃黏膜屏障保护药有哪些? ②结合实验结果分析木香、痛泻要方理气及调和肝脾的药理机制。 第二节药物对大鼠胆汁流量的影晌 【目的】①学习收集麻醉大鼠胆汁的实验方法。②观察利胆药物对大鼠胆汁流量的影响 【原理】胆汁由肝细胞持续分泌,储存于胆囊,在脂肪的吸收与消化过程中起重要作用,胆 汁分泌与排泄障碍可引起消化系统症状,高浓度的胆盐是强烈的致炎物质,形成早期的化 学性炎症,为细菌入侵引起急性感染提供有利条件。大鼠无胆囊,其肝脏分泌的胆汁经肝管、 胆总管直接进入十二指肠。通过观察利胆药去氢胆酸及理气药青皮对胆汁流量变化的影响 能客观地反应肝脏分泌胆汁的能力 【材料】 动物:大鼠,雄性,体重200g以上
的溃疡指数。也可用打分的半定量方式表示溃疡指数:瘀血点为1分,线状痕血长度小于lmm 者为2分, 1~2mm 者为3分 ,3~4mm 者为4分,大于5mm 者为 5 分,全胃分数的总和为该鼠的 溃疡指数,以下列公式计算溃疡抑制百分率和溃疡发生百分率。 溃疡抑制百分率(%) =对照组溃疡指数-给药组溃疡指数/对照 组溃疡指数X100% 溃疡发生百分率(%) =形成溃疡动物数/实验动物数X100% 实验结束后作全班数据统计,计算各 组溃疡抑制百分率和溃疡发生率的平均数 ( X) 和标准差 (s), 以 t 检验统计法进 行组间比较。 【结果】将结果填入表 7-1-1 中。 表 7-1-1 木香、痛泻要方对大鼠乙醇型粘膜损伤的影响 组别 剂量(g/kg) 动物数 (n) 溃疡指数 溃疡抑制率 (%) 溃疡发生率 (%) 空白对照组 木香组 痛泻要方组 【注意事项】①胃黏膜损伤程度与乙醇浓度及灌服时间有关。 ②注入胃内的福尔马林溶液量要准确，以免影响实验结果。 【思考题】①胃黏膜屏障保护药有哪些？ ②结合实验结果分析木香、痛泻要方理气及调和肝脾的药理机制。 第二节 药物对大鼠胆汁流量的影晌 【目的】①学习收集麻醉大鼠胆汁的实验方法。②观察利胆药物对大鼠胆汁流量的影响。 【原理】胆汁由肝细胞持续分泌，储存于胆囊，在脂肪的吸收与消化过程中起重要作用，胆 汁分泌与排泄障碍可引起消化系统症状，高浓度的胆盐是强烈的致炎物质，形成早期的化 学性炎症，为细菌入侵引起急性感染提供有利条件。大鼠无胆囊,其肝脏分泌的胆汁经肝管、 胆总管直接进入十二指肠。通过观察利胆药去氢胆酸及理气药青皮对胆汁流量变化的影响， 能客观地反应肝脏分泌胆汁的能力。 【材料】 动物:大鼠,雄性,体重200g以上。 溃疡 溃疡 幽门
药品:%去氢胆酸纳溶液、2g/m青皮水煎液 试剂:10%乌拉坦溶液、生理盐水 主要器材∷手术剪、眼科剪、眼科慑、胆汁引流管(直径1m塑料管)、带刻度的小试管、 大鼠手术固定板、注射器、纱布 【方法】取禁食不禁水12h的大鼠,随机分组,称重,编号。以乌拉坦(lg/kg)麻醉,仰位固 定,开腹后在右上腹找到胃幽门部,以幽门部为标准,翻转十二指肠,即可见到白色的十二指 肠乳头部,从乳头部追踪到胆总管,用眼科慑将覆盖在表面的被膜剥离少许以暴露出胆总管, 结扎下端。然后在接近十二指肠开口处的胆总管,向肝脏方向剪"V形小口,将胆汁引流管 插入胆总管,插入引流管后可见淡黄色液体顺管流岀即是胆汁,结扎固定,手术后用止血钳 夹闭腹腔,以生理盐水湿润的纱布覆盖夹闭部位,稳定10分钟后,用带有刻度的小试管收集 胆汁30分钟作为给药前的胆汁流量,之后给药组与空白对照组由十二指肠分别给予2%去氢 胆酸纳1m/100g或同容量的生理盐水,给药后每3分钟收集胆汁1次,共23次,记录胆汁 流量,并计算给药后胆汁流量增加百分率。 胆汁流量增加百分率(%)三(给药后胆汁流量-给药前胆汁流量)/给药前胆汁流量 100% 实验结束后作全班数据统计,计算各组胆汁流量增加百分率的平均数(X)和标准差(s) 以t检验统计法进行组间比较 中药可选2g/m的青皮水煎液,灌服量为1m/100g。其他方法同上 【结果】将结果填入表7-3-1中。 表7-3-1去氢胆酸纳对大鼠胆汁流量的影响 组别 药前胆汁流量(mD药后胆汁流量(m)胆汁流量增加百分率(96) -90minr00minr60min-90rmi- 应选择合适的插管。由于胆汁流量的差 雌激素水平会影响胆汁流量及胆汁中成 加胆汁分泌和胆酸等物质的含量,故一般 指肠壶腹部,插管顶端应接近肝脏。 有哪些代表药物 是什么 第三章中药镇痛作用的实验方法 凡能选择性地缓解或消除疼痛的药物称为镇痛药( analgesics)。包括麻醉性镇痛药和
药品 :2%去氢胆酸纳溶液、2g/mｌ青皮水煎液。 试剂 :10% 乌拉坦溶液、生理盐水。 主要器材:手术剪、眼科剪、眼科慑、胆汁引流管 ( 直径1mm塑料管)、带刻度的小试管、 大鼠手术固定板、注射器、纱布。 【方法】取禁食不禁水12h 的大鼠, 随机分组, 称重,编号。以乌拉坦 (1g/kg)麻醉,仰位固 定,开腹后在右上腹找到胃幽门部,以幽门部为标准,翻转十二指肠,即可见到白色的十二指 肠乳头部,从乳头部追踪到胆总管,用眼科慑将覆盖在表面的被膜剥离少许以暴露出胆总管, 结扎下端。然后在接近十二指肠开口处的胆总管,向肝脏方向剪"V" 形小口,将胆汁引流管 插入胆总管,插入引流管后可见淡黄色液体顺管流出即是胆汁,结扎固定,手术后用止血钳 夹闭腹腔,以生理盐水湿润的纱布覆盖夹闭部位,稳定10分钟后,用带有刻度的小试管收集 胆汁30分钟作为给药前的胆汁流量,之后给药组与空白对照组由十二指肠分别给予2%去氢 胆酸纳1mｌ/100g或同容量的生理盐水,给药后每 3分钟收集胆汁1次,共 2~3 次,记录胆汁 流量,并计算给药后胆汁流量增加百分率。 胆汁流量增加百分率 (%)= (给药后胆汁流量 -给药前胆汁流量)/ 给药前胆汁流量× 100% 实验结束后作全班数据统计,计算各组胆汁流量增加百分率的平均数 ( X ) 和标准差(s), 以 t 检验统计法进行组间比较。 中药可选 2 g /mｌ的青皮水煎液,灌服量为lmｌ/100g。其他方法同上。 【结果】将结果填入表 7-3-1 中。 表 7-3-l 去氢胆酸纳对大鼠胆汁流量的影响 组别 药前胆汁流量 (mｌ) 药后胆汁流量(mｌ) 胆汁流量增加百分率(％) 30ｍｉｎ 60ｍｉｎ 90ｍｉｎ 30ｍｉｎ 60ｍｉｎ 90ｍｉｎ 空白对照组 去氢胆酸纳组 【注意事项】①大鼠胆总管直径仅 0.5mm~1.Omm, 应选择合适的插管。由于胆汁流量的差 异较大 , 故常用自身前后比较的方法。②由于体内雌激素水平会影响胆汁流量及胆汁中成 分的比例,最好选用雄性大鼠。③巴比妥类药物可增加胆汁分泌和胆酸等物质的含量,故一般 不用于该实验的动物麻醉。④胆总管切口应接近十二指肠壶腹部,插管顶端应接近肝脏。 【思考题】①利胆药的作用方式有哪一些 ? 分别有哪些代表药物 ? ②理气药治疗气滞、气逆的药理学基础是什么？ 第三章 中药镇痛作用的实验方法 凡能选择性地缓解或消除疼痛的药物称为镇痛药(analgesics)。包括麻醉性镇痛药和
非麻醉性镇痛药。 实验资料证明,许多祛风湿药,祛瘀止痛药常具有不同程度的镇痛作用。它们除在中药 复方中配伍应用外,其中延胡索、秦艽、牛膝、徐长卿、防己、苍耳子、七叶莲,白屈莱(山 黄连)均已制成不同剂型用于头痛、肌肉痛、关节痛、神经痛以及胃肠痉挛性疼痛。疼痛作 为主观的感受和体验,是一种复杂的生理心理反应。动物实验只能间接借助由于伤害性刺激 引起的‘痛’反应作为测量标准。筛选镇痛药的方法按刺激性质可分为四大类,即热刺激法, 电刺激法、机械刺激法和化学刺激法。 初筛常用方法 1热刺激法 利用一定的温度刺激动物体表的某个部位,使产生疼痛反应。最常用的是小鼠热板法 和大鼠辐射热甩尾法。热刺激法用于筛选作用较强的镇痛药较为适宜。 小鼠热板法 原理]把小鼠放在事先加热到55C的金属盘(铁皮,铝、铜均可)上以舔后足作为“疼 痛’反应指标。观察给药前、后痛阈值的变化。 [药品]延胡索提取物 [操作方法]小鼠分为3组:(空白、阳性、给药组),给药组小鼠灌胃延胡索 0.lml/l0g,30min后将恒温水浴调节至55±0.5‘C,金属盘的底部接触水面,加热后作为 热刺激,用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛闽值。给药前先 测定每只小鼠的痛闻(共测二次,以平均值不超过30s者为合格)。给药后每隔1/2-1h测 定一次,连续数次,如痛阈值超过60s,即停止测试而按60s计(时间过久,易烫伤足部) 实验结束,按所测之痛阈平均值计算痛阈提高百分率 以时间为横座标,痛阈提高百分率为纵座标,绘出镇痛作用时程曲线,以分析药物的作 用强度、作用开始时间和持续时间 [评价]本法简便易行,痛感指标明确易观察,对组织损伤最小,动物可反复利用」 故为常用的方法之一。但对作用较弱的镇痛药不太敏感 [注意点]①动物体重对结果有影响,小鼠以20g左右为宜 ②小鼠个体差异大,应挑选痛阈值在5~30s以内者为合格,不到s9或超过 0s或喜跳跃者均剔除 ③小鼠以雌性为好,雄性因阴囊受热后易松弛,与“热板’接触而致反应过敏。 ④室温对实验有影响,过低小鼠反应迟钝,过高则敏感,易引起跳跃 [思考题]延胡索的镇痛机理及主要成分是什么 第四章作用于心血管系统药理实验 心血管系统药物硏究主要包括强心、降压、抗心律失常、抗心肌缺血等药理实验方法。 强心实验方法可分为离体心脏实验法和在体心脏实验法。①离体心脏实验法:经典方法 有斯氏法和八木氏法灌流离体蛙心或蟾蜍心脏、 Langendorff法灌流哺乳类动物离体心脏
非麻醉性镇痛药。 实验资料证明，许多祛风湿药，祛瘀止痛药常具有不同程度的镇痛作用。它们除在中药 复方中配伍应用外，其中延胡索、秦艽、牛膝、徐长卿、防己、苍耳子、七叶莲，白屈莱(山 黄连)均已制成不同剂型用于头痛、肌肉痛、关节痛、神经痛以及胃肠痉挛性疼痛。疼痛作 为主观的感受和体验，是一种复杂的生理心理反应。动物实验只能间接借助由于伤害性刺激 引起的‘痛’反应作为测量标准。筛选镇痛药的方法按刺激性质可分为四大类，即热刺激法， 电刺激法、机械刺激法和化学刺激法。 初筛常用方法 1 热刺激法 利用一定的温度刺激动物体表的某个部位，使产生疼痛反应。最常用的是小鼠热板法 和大鼠辐射热甩尾法。热刺激法用于筛选作用较强的镇痛药较为适宜。 小鼠热板法 [原理] 把小鼠放在事先加热到 55~C 的金属盘(铁皮，铝、铜均可)上以舔后足作为“疼 痛’反应指标。观察给药前、后痛阈值的变化。 [药品] 延胡索提取物 [操作方法] 小鼠分为 3 组：（空白、阳性、给药组），给药组小鼠灌胃延胡索 0.1ml/10g,30min 后将恒温水浴调节至 55±0．5‘C，金属盘的底部接触水面，加热后作为 热刺激，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛闽值。给药前先 测定每只小鼠的痛闻(共测二次，以平均值不超过 30s 者为合格)。给药后每隔 1／2—1h 测 定一次，连续数次，如痛阈值超过 60s,即停止测试而按 60s 计(时间过久，易烫伤足部)。 实验结束，按所测之痛阈平均值计算痛阈提高百分率。 以时间为横座标，痛阈提高百分率为纵座标，绘出镇痛作用时程曲线，以分析药物的作 用强度、作用开始时间和持续时间。 [评价] 本法简便易行，痛感指标明确易观察，对组织损伤最小，动物可反复利用， 故为常用的方法之一。但对作用较弱的镇痛药不太敏感。 [注意点] ①动物体重对结果有影响，小鼠以 20g 左右为宜。 ②小鼠个体差异大，应挑选痛阈值在 5～30s 以内者为合格，不到 s9 或超过 30s 或喜跳跃者均剔除. ③小鼠以雌性为好，雄性因阴囊受热后易松弛，与“热板’接触而致反应过敏。 ④室温对实验有影响，过低小鼠反应迟钝，过高则敏感，易引起跳跃。 [思考题] 延胡索的镇痛机理及主要成分是什么。 第四章 作用于心血管系统药理实验 心血管系统药物研究主要包括强心、降压、抗心律失常、抗心肌缺血等药理实验方法。 强心实验方法可分为离体心脏实验法和在体心脏实验法。①离体心脏实验法：经典方法 有斯氏法和八木氏法灌流离体蛙心或蟾蜍心脏、Langendorff 法灌流哺乳类动物离体心脏
近年来,离体乳头肌实验、离体心房肌实验和体外心肌培养实验方法更为常用。②在体心脏 实验法:可用蛙、大鼠、兔、猫、犬的在体心脏同步观察药物对心肌收缩力、频率、节律、 血压、心电图等影响。 血压的测定有直接测压法(插管法)和间接测压法(大鼠尾动脉测压法、犬颈动脉皮鞘 法)。降压药的研究常分为三个步骤:①首先观察药物对正常麻醉动物的急性降压作用:将 动物麻醉后,直接测量其颈动脉或殷动脉的血压。此法简单,但由于与临床实际有距离,所 以仅用于初筛。②慢性实验治疗法:用高血压模型动物来观察药物的治疗作用.动物的高血 压模型有肾型、神经型、内分泌型和遗传性等,血压测定常采用间接测压法。此法接近临床 实际情况,主要用于复试。③降压作用机制研究:通过上述实验证明药物有降压作用后,近 步通过对中枢、神经节、递质、受体、血管平精肌、水盐代谢等方面试验来分析药物的作 用环节。 引起实验性心律失常的方法有:①药物:乌头碱、哇巴因、钮盐、钙盐、氯仿、肾上胨 素等。②电刺激法。③结扎冠状动脉法。药物用上述模型进行初筛后,再进一步应用电生理 方法和心肌培养技术研究药物作用的分子机制 抗心肌缺血的实验方法有:①心脏和冠脉血流测定。②心肌氧代谢实验。@药物诱发心 肌缺血实验:垂体后叶索、麦角碱、异丙肾上腺素或肾上腺素。④冠状动脉结扎弓I起心肌 梗死实验。⑤心脏灌流实验。 涉及心血管系统药理实验方法研究的常见中药有温里药、平肝息风药、活血化瘀药、补 益药和理气药。 第一节药物对离体蛙心的作用 [目的]①学习斯氏( Straub)离体蛙心灌流法。②观察药物对离体蛙心收缩强度、节律和 心输出量的影响 [原理]强心苷在一定剂量下能直接抑制心肌细胞膜上Na+K+-ATP酶的活性,使细胞内
近年来，离体乳头肌实验、离体心房肌实验和体外心肌培养实验方法更为常用。②在体心脏 实验法：可用蛙、大鼠、兔、猫、犬的在体心脏同步观察药物对心肌收缩力、频率、节律、 血压、心电图等影响。 血压的测定有直接测压法(插管法)和间接测压法(大鼠尾动脉测压法、犬颈动脉皮鞘 法)。降压药的研究常分为三个步骤：①首先观察药物对正常麻醉动物的急性降压作用：将 动物麻醉后，直接测量其颈动脉或殷动脉的血压。此法简单，但由于与临床实际有距离，所 以仅用于初筛。②慢性实验治疗法：用高血压模型动物来观察药物的治疗作用．动物的高血 压模型有肾型、神经型、内分泌型和遗传性等，血压测定常采用间接测压法。此法接近临床 实际情况，主要用于复试。③降压作用机制研究：通过上述实验证明药物有降压作用后，近 一步通过对中枢、神经节、递质、受体、血管平精肌、水盐代谢等方面试验来分析药物的作 用环节。 引起实验性心律失常的方法有：①药物：乌头碱、哇巴因、钮盐、钙盐、氯仿、肾上腺 素等。②电刺激法。③结扎冠状动脉法。药物用上述模型进行初筛后，再进一步应用电生理 方法和心肌培养技术研究药物作用的分子机制。 抗心肌缺血的实验方法有：①心脏和冠脉血流测定。②心肌氧代谢实验。@药物诱发心 肌缺血实验：垂体后叶索、麦角碱、异丙肾上腺素或肾上腺素。④冠状动脉结扎弓 I 起心肌 梗死实验。⑤心脏灌流实验。 涉及心血管系统药理实验方法研究的常见中药有温里药、平肝息风药、活血化瘀药、补 益药和理气药。 第一节 药物对离体蛙心的作用 [目的]①学习斯氏(Straub)离体蛙心灌流法。②观察药物对离体蛙心收缩强度、节律和 心输出量的影响。 [原理]强心苷在一定剂量下能直接抑制心肌细胞膜上 Na+-K+-ATP 酶的活性，使细胞内
游离钙离子增多,产生正性肌力、负性频率作用。此作用在心力衰竭心脏更明显。 [动物]:蛙。 [药品]:5%洋地黄溶液(或0.1%毒毛旋花苷G溶液)、生附子水煎醇沉液1g/mⅠ、制附 子水煎醇沉液1g/ml、四逆汤水煎醇沉液1g/ml。 [试剂]:任氏液、低钙任氏液(其中CaC12含量为一般任氏液的1/4)。 [主要器材]:手术器械一套、蛙板、探针、八木氏蛙心插管、蛙心夹、铁支架、双凹夹 长柄木夹、小烧杯、滴管、棉线、生物信号采集系统(或多道生理记录仪)、张力换能器 [方法]取蛙或蟾蜍1只,用探针毁脑及脊髓,仰卧位固定于蛙板上。正中间剪开胸部皮 肤,然后开胸,剪开心包,暴露心脏。在主动脉分叉处下穿一线,打个松结,备结扎插管之 用。于主动脉分叉稍上方的左主动脉上剪一“v”形小口,将盛有任氏液的蛙心套管插入主 动脉,并通过主动脉球转入左后方左心室,然后将套管用线应结扎固定在套管小钩上(离体 蛙心制备见图8-1一1)。将管内带血的任氏液吸出,以防止血块堵塞套管。心脏搏动时, 可见液面随着在管内上下波动 剪断主动脉,提起心脏。于静脉窦下 方将其余血管一起结扎(勿伤及或结扎静 脉窦)。分离周围组织使心脏离体,并用任 氏液连续换洗直至无血色。将蛙心套管固 定于铁架台,用蛙心夹在心舒期夹住心尖 部,连接于机械张力换能器并与生物信号 图8-1-1斯氏离体蛙心插管法集系统相连,待收缩稳定后开动记录仪 进入“蛙心灌流”界面,选择适当的实验 参数,即可进行实验。 记录正常的心脏活动曲线,然后按以下顺序加药或试剂,注意观察图形的变化:①换入 低钙任氏液。②当心脏收缩显著减弱时,向套管内加入5%洋地黄溶液(或0.1%毒毛旋花苷 G溶液)0.2ml。 中药可用:生附子水煎醇沉液1g/ml、制附子水煎醇沉液1g/ml、四逆汤水煎醇沉液 g/m1,方法同上 [结果]剪贴或复制心脏的收缩曲线,再将具体分析平均值填人表5-1-1 表5-1-1药物对离体蛙心收缩功能的作用
游离钙离子增多，产生正性肌力、负性频率作用。此作用在心力衰竭心脏更明显。 [动物]：蛙。 [药品]：5％洋地黄溶液(或 0.1％毒毛旋花苷 G 溶液)、生附子水煎醇沉液 lg/ml、制附 子水煎醇沉液 1g/ml、四逆汤水煎醇沉液 1g/ml。 [试剂]：任氏液、低钙任氏液(其中 CaCl2 含量为一般任氏液的 1/4)。 [主要器材]：手术器械一套、蛙板、探针、八木氏蛙心插管、蛙心夹、铁支架、双凹夹、 长柄木夹、小烧杯、滴管、棉线、生物信号采集系统(或多道生理记录仪)、张力换能器。 [方法]取蛙或蟾蜍 1 只，用探针毁脑及脊髓，仰卧位固定于蛙板上。正中间剪开胸部皮 肤，然后开胸，剪开心包，暴露心脏。在主动脉分叉处下穿一线，打个松结，备结扎插管之 用。于主动脉分叉稍上方的左主动脉上剪一“v”形小口，将盛有任氏液的蛙心套管插入主 动脉，并通过主动脉球转入左后方左心室，然后将套管用线应结扎固定在套管小钩上(离体 蛙心制备见图 8—1 一 1)。将管内带血的任氏液吸出，以防止血块堵塞套管。心脏搏动时， 可见液面随着在管内上下波动。 剪断主动脉，提起心脏。于静脉窦下 方将其余血管一起结扎(勿伤及或结扎静 脉窦)。分离周围组织使心脏离体，并用任 氏液连续换洗直至无血色。将蛙心套管固 定于铁架台，用蛙心夹在心舒期夹住心尖 部，连接于机械张力换能器并与生物信号 采集系统相连，待收缩稳定后开动记录仪。 进入“蛙心灌流”界面，选择适当的实验 参数，即可进行实验。 记录正常的心脏活动曲线，然后按以下顺序加药或试剂，注意观察图形的变化：①换入 低钙任氏液。②当心脏收缩显著减弱时，向套管内加入 5％洋地黄溶液(或 0.1％毒毛旋花苷 G 溶液)0.2ml。 中药可用：生附子水煎醇沉液 1g/ml、制附子水煎醇沉液 1g/ml、四逆汤水煎醇沉液 1g/ml，方法同上。 [结果]剪贴或复制心脏的收缩曲线，再将具体分析平均值填人表 5-1-1。 表 5-1-1 药物对离体蛙心收缩功能的作用
