转基因动物( transgenic animal) 用人工方法将外源基因导入或整合到基 因组内,并能稳定传代的一类动物 特点 分子及细胞水平操作,组织及动物整体水平 表达
转基因动物(transgenic animal) • 用人工方法将外源基因导入或整合到基 因组内,并能稳定传代的一类动物 • 特点 – 分子及细胞水平操作,组织及动物整体水平 表达
基本原理 目的基因显微注射受精卵或胚胎细胞 整合植入输卵管 外源基因:顺式作用元件结构基因报 告基因( report gene)融合基因
基本原理 • 目的基因 显微注射 受精卵或胚胎细胞 整合 植入输卵管 • 外源基因:顺式作用元件 结构基因 报 告基因(report gene) 融合基因
基本方法 显微注射法 胚胎干细胞法( embryonic stem cells,ES细胞) 逆转录病毒感染法 精子载体法 转基因动物中外源基因的检测 染色体及基因水平:斑点杂交、 Southern杂交、 PCR 转录水平: Northern杂交 蛋白质水平: Western印迹
基本方法 • 显微注射法 • 胚胎干细胞法(embryonic stem cells,ES细胞) • 逆转录病毒感染法 • 精子载体法 • 转基因动物中外源基因的检测 – 染色体及基因水平:斑点杂交、Southern杂交、 PCR – 转录水平:Northern杂交 – 蛋白质水平:Western印迹
DNA 反转录病毒感染或DNA转染或电转移 胚胎干细胞 显微注射 受精卵 四细胞胚胎 →→衰胚→→原肠胚一转基因动物 显微注射 反转录病毒感染 DNA DNA 图22-13种转基因方法及其与受精卵不同发育阶段的关系
克隆DNA 供体母鼠 酶解、分离、纯化、定量 注射激素(PMs、HCG) 与公鼠交配 目地基因DNA片段 鼠受精卵 显微注射 注射DNA的受精卵 输卵管或子宫移卵 假孕母鼠 冻存的胎鼠组织 一取出鼠胚胎 冻存的幼鼠血液 或待娩出幼鼠 制备转基因鼠 胎鼠组织或幼 的DNA、蛋白 鼠尾巴 传代转基因鼠 制备DNA 表达水平检测 外源基因 的整合检测 →确定转基因鼠←- 图22-2显微注射法建立转基因鼠的一般实验程序