转基因生物和基因打靶 转基因动物 转基因植物 基因打靶
转基因生物和基因打靶 • 转基因动物 • 转基因植物 • 基因打靶
转基因动物( transgenic animal) 用人工方法将外源基因导入或整合到基 因组内,并能稳定传代的一类动物 特点 分子及细胞水平操作,组织及动物整体水平 表达
转基因动物(transgenic animal) • 用人工方法将外源基因导入或整合到基 因组内，并能稳定传代的一类动物 • 特点 – 分子及细胞水平操作，组织及动物整体水平 表达
Mate mice 精子 从输卵管洗出受精卵 受精卵 用显微注射法在前核内 用吸管固定卵细胞 把卵细胞移植 借腹怀孕的雌小鼠 新生小鼠 NA分析 图13-9用显微注射法产生转基因小鼠
基本原理 目的基因显微注射受精卵或胚胎细胞 整合植入输卵管 外源基因:顺式作用元件结构基因报 告基因( report gene)融合基因
基本原理 • 目的基因 显微注射 受精卵或胚胎细胞 整合 植入输卵管 • 外源基因：顺式作用元件 结构基因 报 告基因(report gene) 融合基因
基本方法 显微注射法 胚胎干细胞法( embryonic stem cells,ES细胞) 逆转录病毒感染法 精子载体法 转基因动物中外源基因的检测 染色体及基因水平:斑点杂交、 Southern杂交、 PCR 转录水平: Northern杂交 蛋白质水平: Western印迹
基本方法 • 显微注射法 • 胚胎干细胞法(embryonic stem cells,ES细胞) • 逆转录病毒感染法 • 精子载体法 • 转基因动物中外源基因的检测 – 染色体及基因水平：斑点杂交、Southern杂交、 PCR – 转录水平：Northern杂交 – 蛋白质水平：Western印迹
DNA 反转录病毒感染或DNA转染或电转移 胚胎干细胞 显微注射 受精卵 四细胞胚胎 →→衰胚→→原肠胚一转基因动物 显微注射 反转录病毒感染 DNA DNA 图22-13种转基因方法及其与受精卵不同发育阶段的关系
反转录病毒 8细胞胚 外源基因 植入代孕母鼠 嵌合小鼠 杂交、筛选 纯合转基因小鼠 图121通过反转录病毒载体获得转基因小鼠
克隆DNA 供体母鼠 酶解、分离、纯化、定量 注射激素(PMs、HCG) 与公鼠交配 目地基因DNA片段 鼠受精卵 显微注射 注射DNA的受精卵 输卵管或子宫移卵 假孕母鼠 冻存的胎鼠组织 一取出鼠胚胎 冻存的幼鼠血液 或待娩出幼鼠 制备转基因鼠 胎鼠组织或幼 的DNA、蛋白 鼠尾巴 传代转基因鼠 制备DNA 表达水平检测 外源基因 的整合检测 →确定转基因鼠←- 图22-2显微注射法建立转基因鼠的一般实验程序
测微仪 连接管 连接管 50毫升玻璃注射器 夹子玻璃注射器 充满 矿物油 充气 测微注射器 聚光器 连持卵管 连注射器 、十显微操作仪 平台 去除橡皮垫 省略目镜以利作图清晰 图22-10显微注射仪示意图
油 M2 透明带 极体 ,雄性原核 核仁 二二二-注射针 膜呈锯齿状 DNA 雌性原核 A 核仁 极体 雄性原核 核仁 雌性原核 图22-11培替氏培养皿注射槽与向受精卵原核作微注射 A.注射针使受精卵胞膜内陷但未能穿透 B.成功的注射