第四节基因表达 基因表达是指结构基因在生物体中 的转录、翻译以及所有加工过程。 基因工程中基因高效表达研究是指 外源基因在某种细胞中的表达活动,即 剪切下外源基因片段,拼接到另一个基 因表达体系中,使其能获得原生物活性 又可高产的表达产物
第四节 基因表达 基因表达是指结构基因在生物体中 的转录、翻译以及所有加工过程。 基因工程中基因高效表达研究是指 外源基因在某种细胞中的表达活动，即 剪切下外源基因片段，拼接到另一个基 因表达体系中，使其能获得原生物活性 又可高产的表达产物
最佳的基因表达体系:目的 基因的表达产量高、表达产物稳 定、生物活性高和表达产物容易 分离纯化
最佳的基因表达体系：目的 基因的表达产量高、表达产物稳 定、生物活性高和表达产物容易 分离纯化
宿主细胞的选择 适合目的基因表达的宿主细胞 应满足以下要求 容易获得较高浓度的细胞; 能利用易得廉价原料; 不致病、不产生内毒素;
一、宿主细胞的选择 适合目的基因表达的宿主细胞 应满足以下要求: 容易获得较高浓度的细胞； 能利用易得廉价原料； 不致病、不产生内毒素；
发热量低、需氧低、适当的发酵 温度和细胞形态; 容易进行代谢调控; 容易进行DNA重组技术操作; 产物的产量、产率高 产物容易提取纯化
发热量低、需氧低、适当的发酵 温度和细胞形态； 容易进行代谢调控； 容易进行DNA重组技术操作； 产物的产量、产率高， 产物容易提取纯化
宿主细胞分为两大类: 第一类为原核细胞:常用有大肠杆 菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等 第二类为真核细胞:常用有酵母、 丝状真菌、哺乳动物细胞等
宿主细胞分为两大类： 第一类为原核细胞：常用有大肠杆 菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等； 第二类为真核细胞：常用有酵母、 丝状真菌、哺乳动物细胞等
1.原核细胞 (1)大肠杆菌 因为大肠杆菌的分子遗传学 研究深入,生长迅速,所以目前 仍是基因工程研究中采用最多的 原核表达体系
⒈ 原核细胞 ⑴大肠杆菌 因为大肠杆菌的分子遗传学 研究深入，生长迅速，所以目前 仍是基因工程研究中采用最多的 原核表达体系
表达基因产物形式多样细胞内 不溶性表达包含体)、细胞内 可溶性表达、细胞周质表达等。 大肠杆菌中的表达不存在信 号肽,产品多为胞内产物,提 取困难
表达基因产物形式多样:细胞内 不溶性表达(包含体)、细胞内 可溶性表达、细胞周质表达等。 大肠杆菌中的表达不存在信 号肽，产品多为胞内产物，提 取困难
因分泌能力不足,真核蛋白质常 形成不溶性的包含体,表达产 物需经变性复性才恢复活性。 蛋白质不能糖基化。 产物蛋白质N端多余一个蛋氨酸 残基。 其内毒素很难除去
因分泌能力不足，真核蛋白质常 形成不溶性的包含体，表达产 物需经变性复性才恢复活性。 蛋白质不能糖基化。 产物蛋白质N端多余一个蛋氨酸 残基。 其内毒素很难除去
(2)枯草芽胞杆菌 分泌能力强,蛋白质不形成包 含体。产物蛋白质不能糖基化。 有很强的胞外蛋白酶对产物降 解
⑵枯草芽胞杆菌 分泌能力强，蛋白质不形成包 含体。产物蛋白质不能糖基化。 有很强的胞外蛋白酶对产物降 解
(3)链霉菌 作为外源性基因表达受到重 视。不致病、使用安全、分 泌能力强、表达产物可糖基 化
⑶链霉菌 作为外源性基因表达受到重 视。不致病、使用安全、分 泌能力强、表达产物可糖基 化