分子生物学实验
分 子 生 物 学 实 验
实验内溶 绪论一分子生物学实验的诞生和 DNA重组一酶切连接、转化、筛选 发展 ◆外源基因在大肠杆菌中的诱导 分子生物学实验的基本知识简介 表达及检测 实验规范训练、实验准备 免疫印迹 大肠杆菌感受态细胞的制备及质 哺乳动物基因组DNA的提取及其 粒DNA的转化 定性定量分析 ●PCR基因扩增及扩增产物的回收◆植物总RNA的提取及其定性定量 (核酸的回收) 分析 琼脂糖凝胶电泳 ◆演示: Southern、DNA序列测定 质粒DNA的提取及其定性定量分析 RT一PCR及mRNA差异显示 核酸的定量 设计实验及其实施
实 验 内 溶 绪论—分子生物学实验的诞生和 发展 分子生物学实验的基本知识简介 实验规范训练、实验准备 大肠杆菌感受态细胞的制备及质 粒DNA的转化 PCR基因扩增及扩增产物的回收 (核酸的回收) 琼脂糖凝胶电泳 质粒DNA的提取及其定性定量分析 核酸的定量 DNA重组－酶切连接、转化、筛选 外源基因在大肠杆菌中的诱导 表达及检测 免疫印迹 哺乳动物基因组DNA的提取及其 定性定量分析 植物总RNA的提取及其定性定量 分析 演示：Southern、DNA序列测定、 RT－PCR及mRNA差异显示 设计实验及其实施
实验安排 实验周 实验内容 绪论一分子生物学实验的诞生和发展 分子生物学实验基本知识简介 分子生物学实验室常用仪器设备及其使用 2 实验规范训练及实验准备 3大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化 4质粒DNA的提取及其定性定量分析 5PCR基因扩增及扩增产物的回收(DNA的回收) 6DNA重组(限制性酶切和连接 哺乳动物基因组DNA的分离及其定性定量分析
实 验 安 排 实验周 实 验 内 容 1 绪论—分子生物学实验的诞生和发展 分子生物学实验基本知识简介 2 分子生物学实验室常用仪器设备及其使用 实验规范训练及实验准备 3 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化 4 质粒DNA的提取及其定性定量分析 5 PCR基因扩增及扩增产物的回收（DNA的回收） 6 DNA重组（限制性酶切和连接） 哺乳动物基因组DNA的分离及其定性定量分析
7大肠杆菌感受态细胞的制备及重组子的转化 哺乳动物基因组DNA的分离及其定性定量分析 8重组子的筛选(蓝白筛选、比较重组子的大小和酶切片段分析) 9外源基因在大肠杆菌中的诱导表达、设计实验讨论 10植物总RN的提取及其定性定量分析 11蛋白质印迹、设计实验准备 12设计实验 13设计实验、 Southern(演示) 14设计实验、DNA序列测定(演示) 15设计实验、RT-PCR 16设计实验
7 大肠杆菌感受态细胞的制备及重组子的转化 哺乳动物基因组DNA的分离及其定性定量分析 8 重组子的筛选（蓝白筛选、比较重组子的大小和酶切片段分析） 9 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达、设计实验讨论 10 植物总RNA的提取及其定性定量分析 11 蛋白质印迹、设计实验准备 12 设计实验 13 设计实验 、 Southern（演示） 14 设计实验 、 DNA序列测定（演示） 15 设计实验 、 RT-PCR 16 设计实验
设计实验一:原核生物的酶的克隆和原核表达 限定目标:目的基因一原核生物的酶、表达载体一pET21a或 pETBlue-2 限制性内切酶: BamH I和 HindI 要求: 找到具体某一原核生物的某一编码基因的全序列利用分析件进行目的基 因内部限制性内切酶的酶切分析及5,和3’末端引物的设计提交具体的 实验方案(从提取全基因组到目的基因的重组、表达及活性分析) 第八个实验周前必须把详细的实验设计交给指导教师 第八个实验周指导教师组织全班同学讨论每个实验设计,确定两个最好 的实验设计在全班进行具体的实验实践
设计实验一: 原核生物的酶的克隆和原核表达 限定目标：目的基因－原核生物的酶、表达载体－pET21a 或 pETBlue－2 限制性内切酶：BamHⅠ和 HindⅢ 要求： 找到具体某一原核生物的某一编码基因的全序列利用分析件进行目的基 因内部限制性内切酶的酶切分析及5’和3’末端引物的设计提交具体的 实验方案（从提取全基因组到目的基因的重组、表达及活性分析） 第八个实验周前必须把详细的实验设计交给指导教师 第八个实验周指导教师组织全班同学讨论每个实验设计，确定两个最好 的实验设计在全班进行具体的实验实践
设计实验二:小麦看家基因的克隆 限定目标:小麦看家基因、表达载体-pET21a或 pETBlue-2 限制性内切酶:BamI和 HindI 材料:培养10天左右的小麦 要求: 找到小麦的具体某一看家基因(最好是酶)的基因 提交具体的实验方案(从材料准备到看家蛋白的克隆) 第八个实验周前必须把详细的实验设计交给指导教师 第八个实验周指导教师组织全班同学讨论每个实验设计,确定 到两个最好的实验设计在全班进行具体的实验实践
设计实验二: 小麦看家基因的克隆 限定目标：小麦看家基因、表达载体－pET21a 或 pETBlue－2 限制性内切酶：BamHⅠ和 HindⅢ 材料：培养10天左右的小麦 要求： 找到小麦的具体某一看家基因（最好是酶）的基因 提交具体的实验方案（从材料准备到看家蛋白的克隆） 第八个实验周前必须把详细的实验设计交给指导教师 第八个实验周指导教师组织全班同学讨论每个实验设计，确定 一到两个最好的实验设计在全班进行具体的实验实践
设计实验三:大肠杆菌K12碱性磷酸酶的定点突变 限定目标:大肠杆菌K12碱性磷酸酶的功能位点的突变 表达载体-pET21a或 pETBlue-2、 限制性内切酶:BamI和 HindIll 材料:大肠杆菌K12碱性磷酸酶 要求: 找到碱性磷酸酶的功能位点,用PCR的方法进行定点突变。提交具体的 实验方案,第八个实验周前必须把详细的实验设计交给指导教师。第八 个实验周指导教师组织全班同学讨论每个实验设计,确定一到两个最好 的实验设计在全班进行具体的实验实践
设计实验三: 大肠杆菌K12碱性磷酸酶的定点突变 限定目标：大肠杆菌K12碱性磷酸酶的功能位点的突变 表达载体－pET21a 或 pETBlue－2、 限制性内切酶：BamHⅠ和 HindⅢ 材料：大肠杆菌K12碱性磷酸酶 要求： 找到碱性磷酸酶的功能位点，用PCR的方法进行定点突变。提交具体的 实验方案，第八个实验周前必须把详细的实验设计交给指导教师。第八 个实验周指导教师组织全班同学讨论每个实验设计，确定一到两个最好 的实验设计在全班进行具体的实验实践
设计实验四:荷瘤小鼠的mRNA差异显示 限定目标:找到正常小鼠和荷瘤小鼠中有差异的mRNA 材料:小白鼠、H2腹水瘤细胞 要求: 提交具体的实验方案(从材料准备到mRNA的差异显示);第八个实验周 前必须把详细的实验设计交给指导教师;第八个实验周指导教师组织全 班同学讨论每个实验设计,确定一到两个最好的实验设计在全班进行具 体的实验实践
设计实验四: 荷瘤小鼠的mRNA差异显示 限定目标：找到正常小鼠和荷瘤小鼠中有差异的mRNA 材料：小白鼠、H22腹水瘤细胞 要求： 提交具体的实验方案（从材料准备到mRNA的差异显示）；第八个实验周 前必须把详细的实验设计交给指导教师；第八个实验周指导教师组织全 班同学讨论每个实验设计，确定一到两个最好的实验设计在全班进行具 体的实验实践
绪论一分子生物学实验的诞生和发展
绪论—分子生物学实验的诞生和发展
1952 J, Watson and f crick 1953 DNA Double helix model 分子生物学的重要里程碑
1952 J .Watson and F. Crick 1953 DNA Double Helix model 分 子 生 物 学 的 重 要 里 程 碑