1 1 第七章 生产菌种的扩大培养与保藏
1 1 第七章 生产菌种的扩大培养与保藏
2 2 定 义 • 种子扩大培养：是指将保存在砂土管、 冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种 接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇 瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数 量和质量的纯种过程。这些纯种培养物 称为种子
2 2 定 义 • 种子扩大培养：是指将保存在砂土管、 冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种 接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇 瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数 量和质量的纯种过程。这些纯种培养物 称为种子
3 3 作为种子的准则 • 菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐 后能迅速生长，迟缓期短； • 生理形状稳定； • 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的 要求； • 无杂菌污染； • 保持稳定的生产能力
3 3 作为种子的准则 • 菌种细胞的生长活力强，移种至发酵罐 后能迅速生长，迟缓期短； • 生理形状稳定； • 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的 要求； • 无杂菌污染； • 保持稳定的生产能力
4 4 本章讲述的内容 • 第一节 种子的制备过程 • 第二节 种子质量的控制 • 第三节 实例 • 第四节 生产发酵罐的无菌接种 • 第五节 菌种的保藏与复壮
4 4 本章讲述的内容 • 第一节 种子的制备过程 • 第二节 种子质量的控制 • 第三节 实例 • 第四节 生产发酵罐的无菌接种 • 第五节 菌种的保藏与复壮
5 5 第一节 种子的制备过程 • 种子制备的过程大致可分为： – 实验室种子制备阶段 – 生产车间种子制备阶段
5 5 第一节 种子的制备过程 • 种子制备的过程大致可分为： – 实验室种子制备阶段 – 生产车间种子制备阶段
6 6 一、实验室种子的制备 • 实验室种子的制备一般采用两种方式 – 对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁 殖快的菌种可以采用固体培养基培养孢子 ，孢子可直接作为种子罐的种子，这样操 作简便，不易污染杂菌。 – 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种 ，可以用液体培养法
6 6 一、实验室种子的制备 • 实验室种子的制备一般采用两种方式 – 对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁 殖快的菌种可以采用固体培养基培养孢子 ，孢子可直接作为种子罐的种子，这样操 作简便，不易污染杂菌。 – 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种 ，可以用液体培养法
7 7 （一）孢子的制备 1，细菌孢子的制备 9细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮 源丰富的配方。 9培养温度一般为37 ˚ C 。 9细菌菌体培养时间一般为1~2天，产芽 孢的细菌培养则需要5~10天
7 7 （一）孢子的制备 1，细菌孢子的制备 9细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮 源丰富的配方。 9培养温度一般为37 ˚ C 。 9细菌菌体培养时间一般为1~2天，产芽 孢的细菌培养则需要5~10天
8 8 2，霉菌孢子的制备 9霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉 米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基 。 9培养的温度一般为25~28˚C。 9培养时间一般为4~14天
8 8 2，霉菌孢子的制备 9霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉 米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基 。 9培养的温度一般为25~28˚C。 9培养时间一般为4~14天
9 9 3，放线菌孢子的制备 9放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培 养基，培养基中含有一些适合产孢子的 营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨 和一些无机盐等。 9培养温度一般为28˚C。 9培养时间为5~14天
9 9 3，放线菌孢子的制备 9放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培 养基，培养基中含有一些适合产孢子的 营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨 和一些无机盐等。 9培养温度一般为28˚C。 9培养时间为5~14天
10 10 （二）液体种子制备 1，好氧培养： 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌 种，如产链霉素的灰色链霉菌（S. griseus）、产卡那霉素的卡那链霉菌（S. Kanamuceticus）可以用摇瓶液体培养法 。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中， 于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体 ，作为种子。 试管→三角瓶→摇床→种子罐
10 10 （二）液体种子制备 1，好氧培养： 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌 种，如产链霉素的灰色链霉菌（S. griseus）、产卡那霉素的卡那链霉菌（S. Kanamuceticus）可以用摇瓶液体培养法 。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中， 于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体 ，作为种子。 试管→三角瓶→摇床→种子罐