实验10荧光分光光度计的使用 实验目的 1.了解荧光分光光度计的基本原理与结构。 2.学会荧光分光光度计RF-540的基本操作方法】 实验器材 荧光分光光度计F-540一台，交流稳压电源一台，石英比色皿一个，蒸馏 水10ml,乙醇10ml。 实验原理 荧光分光光度计是应用荧光分光光度法原理而制造的实验室常规分析仪器。 由光源灯发出的复合光经激发单色器进行单色处理后，发射单色光射入样品，样 品受激发出的荧光经发射单色器进行单色处理后，到达接收器进行光电转换，然 后将光信号转换为电信号进入信号处理系统处理，再送至信号发出系统。 仪器描述 荧光分光光度计F-540由光源、激发单色器、光监测、试样室、荧光单色 器、时间扫描、光电增管、灵敏度切换、调零、记录仪的零点移动、应答、输出 端子、数据处理、记录仪、时间前送等部分组成。其内部装有电源切换开关，可 选用100V、115V、220V、240V,50/60H电源。 实验步骤 1.己知试样蒸馏水的荧光光度测定 (1)测试条件 O EXCITATION WAVELENGTH :350NM ②EMISSION RANGE .350NM450NM ③SCAN SPEED :FAST ④ABSCISSA SCALE :×2(2) ⑤ORDINATE SCALE :×64(7) ©SENSITIVLTY HIGH(1) ⑦EX.EM SELECT :EM ⑧KEPEAT :OFF
实验 10 荧光分光光度计的使用 实验目的 1．了解荧光分光光度计的基本原理与结构。 2．学会荧光分光光度计 RF-540 的基本操作方法。 实验器材 荧光分光光度计 RF-540 一台，交流稳压电源一台，石英比色皿一个，蒸馏 水 10ml，乙醇 10ml。 实验原理 荧光分光光度计是应用荧光分光光度法原理而制造的实验室常规分析仪器。 由光源灯发出的复合光经激发单色器进行单色处理后，发射单色光射入样品，样 品受激发出的荧光经发射单色器进行单色处理后，到达接收器进行光电转换，然 后将光信号转换为电信号进入信号处理系统处理，再送至信号发出系统。 仪器描述 荧光分光光度计 RF-540 由光源、激发单色器、光监测、试样室、荧光单色 器、时间扫描、光电增管、灵敏度切换、调零、记录仪的零点移动、应答、输出 端子、数据处理、记录仪、时间前送等部分组成。其内部装有电源切换开关，可 选用 100V、115V、220V、240V，50/60HZ电源。 实验步骤 1．已知试样蒸馏水的荧光光度测定 （1）测试条件 ① EXCITATION WAVELENGTH :350NM ② EMISSION RANGE :350NM-450NM ③ SCAN SPEED :FAST ④ ABSCISSA SCALE : 2(2) ⑤ ORDINATE SCALE :64(7) ⑥ SENSITIVLTY :HIGH(1) ⑦ EX.EM SELECT :EM ⑧ KEPEAT :OFF
⑨SLIT :EX 10NM(3) EM 10NM(3) (2)上述测试条件可按如下的键操作进行设定： ①EX GOTO 350ENTER ②EM RANGE □5I□ENTER□ 口回 ENTER ③SCAN SPEED )NE函 ④ AB- SCISSA SCALE 2 ENTER ⑤ ORDI- NATE SCALE ☑ENTER SENSI- TIVITY )ENTE风 ⑦让EXEM的EM一侧的指示灯亮。 ⑧让REPEA了的指示灯不亮。 ⑨SLIT)ENTER3)ENTER, (3)将盛有蒸馏水的试样固定于试样池支架上。 (4)按下键CHARTFEE可，使记录纸空白转出3cm左右。 (5)按 LIsT健。 (6)按START/STOP健。 通过以上操作，便可测试出蒸馏水的荧光光谱。 2.未知试样的荧光光谱测定在测试测定条件未知的试样时，可先将激发 波长设定为250m测定荧光谱。通过测得的荧光光谱求出荧光波长，然后按此 荧光波长设定荧光分光器的波长，测定激发光谱，求出激发波长。用激发波长再 次设定激发分光器后，测定荧光光谱。最终决定适当的激发波长和荧光波长
SCAN SPEED AB— SCISSA SCALE SENSI— TIVITY ORDI— NATE SCALE EM RANGE EX GO TO ⑨ SLIT :EX 10NM(3) :EM 10NM(3) （2）上述测试条件可按如下的键操作进行设定： ① 3 5 0 ENTER ② 3 5 0 ENTER 4 5 0 ENTER ③ 2 ENTER ④ 2 ENTER ⑤ 7 ENTER ⑥ 1 ENTER ⑦ 让 EX|EM 的 EM 一侧的指示灯亮。 ⑧ 让 REPEAT 的指示灯不亮。 ⑨ SLIT 3 ENTER 3 ENTER 。 （3）将盛有蒸馏水的试样固定于试样池支架上。 （4）按下键 CHARTFEED，使记录纸空白转出 3cm 左右。 （5）按 LIST 键。 （6）按 START / STOP 键。 通过以上操作，便可测试出蒸馏水的荧光光谱。 2．未知试样的荧光光谱测定 在测试测定条件未知的试样时，可先将激发 波长设定为 250nm 测定荧光谱。通过测得的荧光光谱求出荧光波长，然后按此 荧光波长设定荧光分光器的波长，测定激发光谱，求出激发波长。用激发波长再 次设定激发分光器后，测定荧光光谱。最终决定适当的激发波长和荧光波长
(1)将初始设定后的测试条件进行如下的变更： EX GOTO 2回 ENTER EM RANGE 2☑5☒0 ENTER70☑O]NTNR ORDI- NATE SCALE 7ENTER (2)将未知试样盛入试样池，然后固定于试样池支架上。 (3)按下CHART FEED键，使记录纸空白转出3cm~4cm (4)按IST健 (5)按START/STOP键 (6)测试得到的光谱中波长250nm和500nm的谱峰是激发光产生的散射光 (7)以相同的条件对溶液进行空白测试。 (8)空白溶液所得到的光谱中也同样可观测到溶液的拉曼线及所含杂质的 荧光光谱，从试样的光谱减去空白溶液的光谱，使可得到未知试样的荧光光谱。 (9)若没有测试出未知试样的光峰，可将激发光波长以50m为单位向长 波方向移动，进行荧光测试，重复(6)、(7)、(8)的操作。 (10)将EXEM键，设定为EX(激发分光器)。 (1l)按下CHARTFEED健，使记录纸空白转出3cm~4cm (12)按START/STOP键 (13)激发光谱上在荧光分光器波长和其12的波长出现的是散射光的峰。 (14)将溶液透入试样池，进行激发光谱的测试，将以上得到的两个激发光 谱进行比较，减去空白溶液的拉曼线之后得到试样的激发光谱。 (15)所得的激发波长和荧光波长便可用于定量测定。激发、荧光光谱都有 两个以上峰时，应选用峰值最大且溶液空白实验中基线噪音较少的峰。 数据记录及处理 1.蒸馏水的荧光光谱 2.未知试样的荧光光谱。 思考题
EX GOTO EM RANGE （1）将初始设定后的测试条件进行如下的变更： 2 5 0 ENTER 2 5 0 ENTER 7 0 0 ENTNR 7 ENTER （2）将未知试样盛入试样池，然后固定于试样池支架上。 （3）按下 CHARTFEED 键，使记录纸空白转出 3cm～4cm （4）按 LIST 键 （5）按 START/STOP 键 （6）测试得到的光谱中波长250nm和500nm的谱峰是激发光产生的散射光。 （7）以相同的条件对溶液进行空白测试。 （8）空白溶液所得到的光谱中也同样可观测到溶液的拉曼线及所含杂质的 荧光光谱，从试样的光谱减去空白溶液的光谱，使可得到未知试样的荧光光谱。 （9）若没有测试出未知试样的光峰，可将激发光波长以 50nm 为单位向长 波方向移动，进行荧光测试，重复（6）、（7）、（8）的操作。 （10）将 EX|EM 键，设定为 EX（激发分光器）。 （11）按下 CHARTFEED 键，使记录纸空白转出 3cm～4cm （12）按 START / STOP 键 （13）激发光谱上在荧光分光器波长和其 1/2 的波长出现的是散射光的峰。 （14）将溶液透入试样池，进行激发光谱的测试，将以上得到的两个激发光 谱进行比较，减去空白溶液的拉曼线之后得到试样的激发光谱。 （15）所得的激发波长和荧光波长便可用于定量测定。激发、荧光光谱都有 两个以上峰时，应选用峰值最大且溶液空白实验中基线噪音较少的峰。 数据记录及处理 1．蒸馏水的荧光光谱。 2．未知试样的荧光光谱。 思考题 ORDI－ NATE SCALE
1.荧光杯与比色杯的区别是什么？ 2.荧光测定中应该注意的主要问题是什么？
1．荧光杯与比色杯的区别是什么? 2．荧光测定中应该注意的主要问题是什么?