实验目的 荧光分光光度法测定 面粉中核黄素(vB2 、实验原理 、FL-4500型气相色谱仪 复旦化学系 四、实验步骤 教学实验中心 五、数据处理 包慧敏 六、思考题 下一页 21:4309
21:43:09 荧光分光光度法测定 面粉中核黄素（VB2） 一、实验目的 二、实验原理 三、FL-4500型气相色谱仪 四、实验步骤 五、数据处理 六、思考题 复旦化学系 教学实验中心 包慧敏
实验目的 1、掌握面粉样品的消化方法,了解溶液的pH值等对 核黄素荧光强度的影响。 2、了解荧光分光光度让的主要结构及工作原理,掌握 其正确使用方法。 3、荧光分析法基本原理和学习测绘核黄素的激发光谱 和荧光光谱,标唯准曲线法定量分析。 214309 L//
21:43:09 1、掌握面粉样品的消化方法，了解溶液的pH值等对 核黄素荧光强度的影响。 2、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理，掌握 其正确使用方法。 3、荧光分析法基本原理和学习测绘核黄素的激发光谱 和荧光光谱，标准曲线法定量分析。 一、实验目的
二、实验原理 1、荧光、荧光分子光物质 2、荧光分析法:特点、定量方法 3、核黄素VB2:结构、性质、面粉中提取方法 4、荧光分光光度计:结构、原理、操作 214309 L//
21:43:09 二、实验原理 1、荧光、荧光分子/荧光物质 2、荧光分析法：特点 、定量方法 3、核黄素VB2：结构、性质、 面粉中提取方法 4、荧光分光光度计：结构、原理、操作
问题1.荧光、荧光分子 荧光产生的机制一—去活化过程 溶液中: 10141012s1013-101ls 102106s 振动弛豫内部转换 体系间的跨越 (发生在相同多重度间)(发生在不同多重度间) 2 ST(≤Sn 1015sA1 磷光发射 10-2-10s 基态S0 荧光发射外部转换 107-109s发生在不同电子能态间 熄灭) 页 214309 页
21:43:09 荧光产生的机制——去活化过程 问题1. 荧光、荧光分子
强荧光物质 结构特点:ππ*、共轭π体系、刚性平面结构、取代基 °”如素和结相分 COO COo 而酚酞没有。 如芴和联苯在相同的条件下,荧 光量子产率约为1和018 214309 L//
21:43:09 强荧光物质 结构特点：→﹡ 、共轭 体系、 刚性平面结构、 取代基 如荧光素和酚酞结构十分相似， 荧光素在溶液中有很强的荧光， 而酚酞没有。 如芴和联苯在相同的条件下，荧 光量子产率约为1和0.18
影响荧光发射溶液环境因素p.362 〔a)溶剂效应:取决于荧光体和溶剂的化学结构、极 性、重原子效应(b)温度:T↑9(c)pH平 衡解离关系对mx、均有影响 溶液荧光的猝灭p.364 荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子之间相互作用而导致荧光强度 下降的现象称为荧光的猝灭(或熄灭) 引起荧光猝灭的物质称为光猝灭剂。 214309 L//
21:43:09 影响荧光发射溶液环境因素 p.362 ： （a）溶剂效应：取决于荧光体和溶剂的化学结构、极 性、重原子效应 （b）温度：T ↑ φf↓ （c）pH 平 衡解离关系 对f.max、φf 均有影响 溶液荧光的猝灭 p.364 荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子之间相互作用而导致荧光强度 下降的现象称为荧光的猝灭（或熄灭） 引起荧光猝灭的物质称为荧光猝灭剂
问题2.分子荧光分析法 方法的分类被测物理性质 相应的分析方法 辐射的发射发射光谱法(X射线、紫外、可见光等),火焰光度 法,荧光光谮法(Ⅹ射线、紫外、可见光),磷光光 谱法,放射化学法 辐射的吸收分光光度法(X射线、紫外、可见光、红外),原子 光学分析法 吸收法,核磁共振波谮法,电子自旋共振波谱法ψ 辐射的散射 浊度法,拉曼光谱法 辐射的折射 折射法,干涉法 辐射的衍射 射线衍射法,电子衍射法 辐射的旋转 偏振法,旋光色散法,圆二色性法 首/页)/页 214309 页
21:43:09 问题2. 分子荧光分析法
光谱名称的问题: 1.原子光谱与分子光谱 原子光谱:电子能级跃迁 分子光谱:电子能级、振动能级、转动能级跃迁 2.吸收光谱与发射光谱 吸收光谱:从低能级向高能级跃迁,使光的强度减弱; 发射光谱:从高能级跃迁回低能级,相应的能量以光的形式 辐射出来 3.关系 原子光谱:原子吸收光谱、原子发射光谱 分子光谱:分子吸收光谱(可见、紫外、红外吸收光谱) 214309
21:43:09 1. 原子光谱与分子光谱 原子光谱：电子能级跃迁； 分子光谱：电子能级、振动能级、转动能级跃迁 2. 吸收光谱与发射光谱 吸收光谱：从低能级向高能级跃迁，使光的强度减弱； 发射光谱：从高能级跃迁回低能级，相应的能量以光的形式 辐射出来 3. 关系 原子光谱：原子吸收光谱、原子发射光谱； 分子光谱：分子吸收光谱（可见、紫外、红外吸收光谱） 光谱名称的问题：
原子光谱VS.分子光谱 E A 原子光谱/线光谱: 电子跃迁能级 (单重态、三重态) 原子光谱 锐线光谱 h y 分子光谱/带光谱: 电子跃迁能级 分子振动能级 分子转动能级 分子光谱 带状光谱 214309 L//
21:43:09 原子光谱 V.S. 分子光谱 原子光谱/线光谱： 电子跃迁能级 （单重态、三重态） 分子光谱/带光谱： 电子跃迁能级 分子振动能级 分子转动能级
吸收光谱VS.发射光谱 激发光谱 荧光光谱 蒽的激发光谱(吸收光谱)和发射光谱(荧光光谱) Reference material No. 1 Anthracene.Corrected Spectra 吸收光谱 发射光谱 激发光谱: Excitation Spectrum,激发波长:xm处 发射光谱 Emission Spectrum,发射波长:m X 页/页 214309 页
21:43:09 激发光谱 荧光光谱 em.max处 IF ～ex 吸收光谱 V.S. 发射光谱