EphA2在大肠腺癌中的表达 陈壬寅李珊珊 郑州大学第一附属医院病理科 郑州大学基础医学院病理学教研室 河南省肿瘤病理重点实验室
EphA2在大肠腺癌中的表达 陈壬寅 李珊珊 郑州大学第一附属医院病理科 郑州大学基础医学院病理学教研室 河南省肿瘤病理重点实验室
第一部分 大肠腺癌中EphA2表达及其与 临床病理学因素、DNA倍体 细胞周期关系的研究
第一部分 大肠腺癌中EphA2表达及其与 临床病理学因素、DNA倍体、 细胞周期关系的研究
EphA2基因的介绍 EphA2是 Lindberg于1990年用简并引物从人角化细胞 cDNA文库中筛选得到的一个Eph( Erythropoitin produceing hepato-cellular, Eph) 亚家族成员。 人EphA2基因定位于1p361,有17个外显子。 Eph受体家族是已知最大的酪氨酸蛋白激酶受体 ( receptor tyrosine kinase,RTK)家族最大的家庭。 Eph家族受体激酶和他们EN配体介导的细胞信号传 导参与神经系统的基本发生过程、神经系统的信号传 递,在细胞的分化、发育、增殖,组织和器官的形成 血管生成、细胞与细胞之间的粘附及肿瘤的发生 和肿瘤的新生血管的形成等过程中发挥重要的和必 不可少的作用
EphA2基因的介绍 • EphA2是Lindberg于1990年用简并引物从人角化细胞 cDNA文库中筛选得到的一个Eph（Erythropoitinproduceing hepato-cellular,Eph) 亚家族成员 。 • 人EphA2基因定位于1p36.1,有17个外显子。 • Eph受体家族是已知最大的酪氨酸蛋白激酶受体 (receptor tyrosine kinase, RTK)家族最大的家庭。 • Eph家族受体激酶和他们EFN配体介导的细胞信号传 导参与神经系统的基本发生过程、神经系统的信号传 递，在细胞的分化、发育、增殖，组织和器官的形成 、血管生成、细胞与细胞之间的粘附及肿瘤的发生 和肿瘤的新生血管的形成等过程中发挥重要的和必 不可少的作用
EphA2与肿瘤的关系 EphA2广泛高表达于不同的肿瘤组织和细胞系,如 乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癟和食管癌,肾 细胞癌等,目前认为EphA2参与肿瘤的发生和发展 ,是功能强大的癌基因 ·phA2的高表达能诱导非转化乳腺和前列腺上皮细 胞在体内、外的恶性转化,并促进其侵袭转移 应用EphA2蛋白的抗体靶向抑制试验,下调FphA2 蛋白表达的同时,也抑制了肿瘤细胞的生长,进而 降低肿瘤的恶性程度
EphA2与肿瘤的关系 • EphA2广泛高表达于不同的肿瘤组织和细胞系，如 ：乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌，肾 细胞癌等，目前认为EphA2参与肿瘤的发生和发展 ，是功能强大的癌基因。 • EphA2的高表达能诱导非转化乳腺和前列腺上皮细 胞在体内、外的恶性转化，并促进其侵袭转移 。 • 应用EphA2蛋白的抗体靶向抑制试验，下调EphA2 蛋白表达的同时，也抑制了肿瘤细胞的生长，进而 降低肿瘤的恶性程度
实验标本 154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河 南省肿瘤医院2001年1月~2004年12月手术切除标本的存档蜡块(其中66例为手术切 除新鲜标本和蜡块和88例存档蜡块) 1份置4%多聚甲醛中固定存放 另2份置-82C中存放 石蜡包 石蜡包埋、 埋、切 切片,进 行免疫组 提取总 FCM检 HE 化 mRNA、 侧DNA 染色 进行 倍体、细 RI- 胞周期 细胞增 PCR 殖率
154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河 南省肿瘤医院2001年1月~2004年12月手术切除标本的存档蜡块 (其中66例为手术切 除新鲜标本和蜡块和88例存档蜡块) 1份置4%多聚甲醛中固定存放 另2份置-82℃中存放 石蜡包 埋、切 片、 HE 染色 石蜡包埋、 切片，进 行免疫组 化 提取总 mRNA、 进行 RTPCR 实 验 标 本 FCM检 侧DNA 倍体、细 胞周期 细胞增 殖率
临床病理资料 154例(88例存档石蜡包埋标本和66例 手术切除新鲜大肠腺癌标本)大肠腺 患者,术前均未接受化疗、放疗及其他 治疗。其中男性78例,女性76例,年龄 在23-85岁之间,平均年龄为497岁
临床病理资料 154例（88例存档石蜡包埋标本和66例 手术切除新鲜大肠腺癌标本）大肠腺癌 患者，术前均未接受化疗、放疗及其他 治疗。其中男性 78例，女性 76例，年龄 在 23-85岁之间，平均年龄为49.7岁
66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌: 分化程度:高分化腺癟30例,中分化腺癌23 例,低分化腺癌13例。 浸润深度:粘膜层10例,粘膜下层0例,肌 层14例,浆膜层37例,外周组织5例。 转移:有淋巴结转移者16例,无淋巴结转 移者50例;有血道转移者1例,无血道转 移者65例;无种植性转移
66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌： 分化程度:高分化腺癌30例，中分化腺癌23 例，低分化腺癌13例。 浸润深度:粘膜层10例，粘膜下层0例，肌 层14例，浆膜层37例，外周组织5例。 转移：有淋巴结转移者16例，无淋巴结转 移者50例；有血道转移者1例，无血道转 移者65例；无种植性转移
88例存档蜡块全部为腺癌: 分化程度:高分化腺癌21例,中分化腺癌18例, 低分化29例和未分化20例; 浸润深度:粘膜层62例,粘膜下层1例,肌层17 例、浆膜层5例,外周组织3例; 转移:有淋巴结转移者14例,无淋巴结转移者74 例;有血道转移者11例,无血道转移者77例; 有种植性转移者10例,无种植性转移者78例
88例存档蜡块全部为腺癌: 分化程度：高分化腺癌21例，中分化腺癌18例， 低分化29例和未分化20例； 浸润深度：粘膜层62例，粘膜下层1例，肌层17 例、浆膜层5例，外周组织3例； 转移：有淋巴结转移者14例，无淋巴结转移者74 例；有血道转移者11例，无血道转移者77例； 有种植性转移者10例，无种植性转移者78例
技术路线 免疫组化(SP法) FCM RT-PCR技术 检测66例大肠腺癌手术切 检测66例大肠腺癌手术切 检测154例大肠腺癌组织 除新鲜组织和相应正常大 除新鲜组织和相应正常大肠 和相应正常食管组织中 肠粘膜手术切除新鲜组织 EphA2蛋白表达 中DNA倍体、细胞周期 粘膜手术切除新鲜组织中 细胞增殖率 EphA2mRNA表达 探讨EphA2表达与大肠腺癌病理临床因素、DNA倍体、细胞周期的关系
技 术 路 线 免疫组化（SP法) FCM RT-PCR技术 检测154例大肠腺癌组织 和相应正常食管组织中 EphA2蛋白表达 检测66例大肠腺癌手术切 除新鲜组织和相应正常大 肠粘膜手术切除新鲜组织 中DNA倍体、细胞周期、 细胞增殖率 探讨EphA2表达与大肠腺癌病理临床因素、DNA倍体、细胞周期的关系 检测66例大肠腺癌手术切 除新鲜组织和相应正常大肠 粘膜手术切除新鲜组织中 EphA2mRNA表达
实验方法 免疫组化 ◆步骤(略) 令对照组设计:以已知EphA2阳性食管鳞癌和正常食管 粘膜腺体组织切片作为阳性对照,用正常兔lsG代替一抗 作为阴性对照,用PBS代替一抗作为空白对照。 心免疫组化结果判定及定量分析:EPhA2免疫组化阳性 表达位于细胞胞浆,呈棕黄色。定量分析采用高清晰图 像处理系统,随机取10个高倍视野进行图像分析,对免 疫组化切片检测FphA2阳性细胞数,依据阳性细胞所占肿 瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果
一. 免疫组化 ❖ 步骤 （略） ❖ 对照组设计：以已知EphA2阳性食管鳞癌和正常食管 粘膜腺体组织切片作为阳性对照，用正常兔IgG代替一抗 作为阴性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。 ❖ 免疫组化结果判定及定量分析：EPhA2免疫组化阳性 表达位于细胞胞浆，呈棕黄色。定量分析采用高清晰图 像处理系统，随机取10个高倍视野进行图像分析，对免 疫组化切片检测EphA2阳性细胞数，依据阳性细胞所占肿 瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果。 实 验 方 法