生物技术专业按心课程 基因工 华东理工大学张惠展
生物技术专业核心课程 生物技术专业核心课程 基因工程 华东理工大学 张惠展 华东理工大学 张惠展
基因工程 1重组DNA技术与基因工程的基本概念 2重组DNA技术与基因工程的基本原理 3重组DNA技术所需的基本条件 4重组DNA技术的操作过程 5目的基因的克隆与基因文库的构建 6外源基因在大肠杆菌中的表达 7外源基因在酵母菌中的表达 8外源基因在哺乳动物细胞中的表达 9外源基因表达产物的分离纯化
基因工程 5 2 3 4 1 6 7 8 9 重组重组DNA DNA技术与基因工程的基本概念 技术与基因工程的基本概念 重组DNA技术与基因工程的基本原理 技术与基因工程的基本原理 重组DNA技术所需的基本条件 技术所需的基本条件 重组DNA技术的操作过程 技术的操作过程 目的基因的克隆与基因文库的构建 目的基因的克隆与基因文库的构建 外源基因在大肠杆菌中的表达 外源基因在大肠杆菌中的表达 外源基因在酵母菌中的表达 外源基因在酵母菌中的表达 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 外源基因在哺乳动物细胞中的表达 外源基因表达产物的分离纯化 外源基因表达产物的分离纯化
4重组DNA技术的操作过程 ADNA的体外重组(切、接) B重组DNA分子的转化和扩增(转、增) C转化子的筛选和鉴定(检)
4 重组DNA技术的操作过程 技术的操作过程 C 转化子的筛选和鉴定（检） 转化子的筛选和鉴定（检） B 重组DNA分子的转化和扩增（转、增） 分子的转化和扩增（转、增） A DNA A DNA的体外重组（切、接） 的体外重组（切、接）
4重组DNA技术的操作过程
4 重组DNA技术的操作过程 技术的操作过程 切切 接接 转转 增增 检检
4重组DNA技术的操作过程 ADNA的体外重组(切与接) 同种内切酶生产的粘性末端的连接 同尾酶生产的粘性末端的连接 不同粘性末端的连接 人工粘性末端的连接 粘性未端的更换 重组率
A DNA A DNA的体外重组（切与接） 的体外重组（切与接） 4 重组DNA技术的操作过程 技术的操作过程 同种内切酶生产的粘性末端的连接 同种内切酶生产的粘性末端的连接 同尾酶生产的粘性末端的连接 同尾酶生产的粘性末端的连接 不同粘性末端的连接 不同粘性末端的连接 粘性末端的更换 粘性末端的更换 人工粘性末端的连接 人工粘性末端的连接 重组率 重组率
同种内切酶生产的粘性末端的连接 5 GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG EcoRI G 5 AATTC G 5 AATTC CTTAA 5 G CTTAA 5 G 退火 5 G AATTC G AATTC CTTAA G CTTAA G 5 G AATTC G AATTC CTTAA G CTTAA G T4-DNA ligase GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG
同种内切酶生产的粘性末端的连接 同种内切酶生产的粘性末端的连接 5' 5' GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG EcoRI EcoRI 5' G CTTAA AATTC G 5' G 5' CTTAA 5' 5' AATTC G 5' 退火退火 G CTTAA AATTC G 5' G CTTAA 5' AATTC G G CTTAA AATTC G 5' G CTTAA 5' AATTC G T4-DNA ligase T4-DNA ligase GAATTC CTTAA G 5' 5' GAATTC CTTAA G GAATTC CTTAA G 5' 5' GAATTC CTTAA G
同尾酶生产的粘性末端的连接 TGATCA 5 GGATCC GGATCC ACTAGT CCTAGG CCTAGG Bc‖l BamhI T 5 GATCA 5 GATCC ACTAG 5 T 5 CCTAG 5 退火 5 T GATCC G GATCA ACTAG G CCTAG T 5 G GATCA ACTAG G CCTAG T T4-DNA ligase ACTAGG( GGATCA CCTAGT 5 TGAICCH9 GGATCA CCTAGT
同尾酶生产的粘性末端的连接 同尾酶生产的粘性末端的连接 BamHI BamHI 5' 5' GGATCC CCTAGG GGATCC CCTAGG 5' G CCTAG GATCC G 5' T 5' ACTAG 5' 5' GATCA T 5' 退火退火 G CCTAG GATCC G 5' T ACTAG 5' GATCA T T4-DNA ligase T4-DNA ligase TGATCC ACTAG G 5' 5' GGATCA CCTAG T 5' TGATCA ACTAGT 5' BclI BclI G CCTAG GATCC G 5' T ACTAG 5' GATCA T TGATCC ACTAG G 5' 5' GGATCA CCTAG T
不同粘性末端的连接 CTGCAG GGATCC GGATCC GACGTC CCTAGG CCTAGG Pstl BamHI 5 CTGCA 3 5 GATCC G G 3’ ACGTO CCTAG 5 T4-DNA pol 切平 Klenow 补平 G 5 GATCC GGATC G CTAGG CCTAG 5 T4-DNA ligase GGATCG CALCO GGATCG CCTAGC
不同粘性末端的连接 不同粘性末端的连接 BamHI BamHI 5' 5' GGATCC CCTAGG GGATCC CCTAGG 5' G CCTAG GATCC G 5' CTGCA 5' G 5' G ACGTC 3' T4-DNA ligase T4-DNA ligase CGATCC GCTAG G 5' 5' GGATC G CCTAG C 5' CTGCAG GACGTC 5' PstI PstI 3' T4-DNA pol T4-DNA pol 切平切平 5' C G 5' G C Klenow Klenow 补平补平 5' GGATC CCTAG 5' GATCC CTAG G CGATCC GCTAG G 5' 5' GGATC G CCTAG C
人工粘性末端的连接5突出末端 5 AATTC ECoR I 5 GATCC BamH I CTTAA 5 CCTAG 5 Klenow 补平 Klenow 补平 GAATT 5 AATTC GGATC CTTAA 5 TTAAG CCTAG 5 TdT dGTP Tat dcTP GAATTGGGGGG AATTC GATCC GGATCCCCCCC TTAA GGGGGGTTAAG CCCCCCCTAGG CCTAG 退火 T4-DNA ligase BamHI BamH I GAATTGGGGGGGATCC GGATCCCCCCCAATTC CTTAACCCCCCCTAGG CCTAGGGGGGGTTAAG GAATTGGGGGGGATCC GGATCCCCCCCAATTC CTTAACCCCCCCTAG CCTAGGGGGGGTTAAG
人工粘性末端的连接 人工粘性末端的连接 5‘突出末端 5' G CCTAG GATCC G 5' G 5' CTTAA 5' 5' 5' AATTC G T4-DNA ligase T4-DNA ligase 5' 5' Klenow Klenow 补平补平 Klenow Klenow 补平补平 5' GGATC CCTAG 5' GATCC CTAG G 5' GAATT CTTAA 5' 5' 5' AATTC TTAA G TdT TdT dGTP dGTP TdT TdT dCTP dCTP GAATTGGGGGG CTTAA AATTC GGGGGGTTAA G GGATCCCCCCC CCTAG GATCC CCCCCCCTAG G GAATTGGGGGGGATCC CTTAACCCCCCCTAG G GGATCCCCCCCAATTC CCTAGGGGGGGTTAA G 5' 5' GAATTGGGGGGGATCC CTTAACCCCCCCTAG G GGATCCCCCCCAATTC CCTAGGGGGGGTTAA G 退火退火 BamH I BamH I EcoR I EcoR I BamH I BamH I BamH I BamH I
人工粘性末端的连接3突出末端 5 GCATG 3 Sph I CTGCA 3 3GTACG 3'ACGTC G Pst I TdT dCTP TdT dGTP GCATGCCCCCC 3 CTGCAGGGGGG 3 3 CCCCCCGTACG 3 GGGGGGACGTC G 退火 GCATGCCCCCC CTGCAGGGGGG GGGGGGACGTC CCCCCCGTACG 5 CTGCAGGGGGG GGGGGGACGTC CCCCCCGTACG 5 Klenow T4-DNA ligase PstI Pst I GCATGCCCCCCTGCAG CTGCAGGGGGGCATGC CGTACGGGGGGACGTC GACGTCCCCCCGTACG 5 GCATGCCCCCCTGCAG GacGrccccccGTacG
人工粘性末端的连接 人工粘性末端的连接 3‘突出末端 CTGCA 3' G G 3' ACGTC 5' GCATG 3' C 5' C 3' GTACG T4-DNA ligase T4-DNA ligase TdT TdT dCTP dCTP TdT TdT dGTP dGTP GCATGCCCCCC 3' C 退火退火 Pst I Pst I Pst I Pst I C 3' CCCCCCGTACG CTGCAGGGGGG 3' G G 3' GGGGGGACGTC 5' 5' GCATGCCCCCC G C GGGGGGACGTC CTGCAGGGGGG C G CCCCCCGTACG 5' 5' GCATGCCCCCC G C GGGGGGACGTC CTGCAGGGGGG C G CCCCCCGTACG 5' 5' GCATGCCCCCCTGCA G CGTACGGGGGGACGTC CTGCAGGGGGGCATG C GACGTCCCCCCGTACG 5' 5' GCATGCCCCCCTGCA G CGTACGGGGGGACGTC CTGCAGGGGGGCATG C GACGTCCCCCCGTACG Klenow Klenow Pst I Pst I Sph I Sph I
